Année Universitaire : 2018-2019

Master Sciences et Techniques : CMBA

Chimie des Molécules Bio Actives

MEMOIRE DE FIN D’ETUDES

Pour l’Obtention du Diplôme de Master Sciences et Techniques

Présenté par:

IDRISSI FIRDAOUS

Encadré par:

MOUSSAIF AHMED (Encadrant à CNESTEN)

EL YAHYAOUI ADIL (Encadrant à CNESTEN)
FARAH ABDELLAH (Professeur à FST Fès)

Soutenu Le 18 juin 2019 devant le jury composé de:

FARAH ABEDELLAH (Professeur à FST Fès)

LAMCHARFI ELHADI (Professeur à FST Fès)
SKALLI KHALID (Professeur à FST Fès)

Stage effectué au : Centre National de l'Energie, des Sciences et des Techniques Nucléaires

Faculté des Sciences et Techniques - Fès. B.P. 2202 – Route d’Imouzzer. FES.  212 (0) 5 35 60 29 53 Fax : 212 (0) 5 35 60 82 14
 À mes très chers parents
Tous les mots du monde ne sauraient exprimer l’immense amour que
je vous porte, ni la grande gratitude que je vous témoigne pour tous
les efforts et les sacrifices que vous n’avez jamais cessés de consentir
pour mon instruction et mon bien-être .
J’espère avoir répondu aux espoirs que vous avez fondés en moi .
Acceptez, chère parents, cette petite dédicace de ma part.

À mes très chers sœurs et frères

Votre confiance à moi, vos encouragements, vos prières sont ce qui
ma pousse toujours à suivre la voie d’excellence, à rêver et à
réaliser mes rêves.

À mes très chères amies

ZINEB, IMANE, HAFSSA, NASSIMA, JIHANE

En témoignage de l’amitié qui nous unie, des souvenirs et des
moments que nous avons passées ensembles, je vous dédie ce
travaille.
Je vous aime beaucoup et je vous souhaite une carrière plein de
réussite et d’excellence.
Longue a dieu ; et que la bénédiction et le salut d’ALLAH soient sur
le plus noble des prophètes et des messagers, notre prophète
Mohammed qui nous a appris à être reconnaissants envers les
personnes qui nous apporté du soutient et de l’aide.
 À mes encadrants de stage
Mr. MOUSSAIF AHMED, ET Mr. EL YAHYAOUI ADIL
C’est un grand honneur pour moi de travailler ma recherche sous
votre encadrement.
Je vous remercie vivement pour votre gentillesse et votre écoute
Vos conseils et remarques m’ont étaient d’un grand apport pour la
réalisation de ce travail.
Veuillez trouver ici Messieurs l’expression de notre gratitude et ma
grande estime.

À mon maître et encadrant de recherche

Monsieur le professeur ABDELLAH FARAH
Je vous remercie chaleureusement monsieur pour ton intérêt et ton
soutien, ta grande disponibilité et tes nombreux conseils durant la
rédaction de ma recherche.
Veuillez croire cher maître à l’assurance de ma grande estime et
sincère reconnaissance.

À mes professeures et jurés de recherche

ELHADI LAMCHARFI et KHALID SKALLI

Je tiens à vous remercie pour l’intérêt que vous avez bien voulu porter
à mon travail en acceptant de faire partie de ce jury.
 Liste des tabLeaux

TABLEAU 1 : Historique de l’évolution des trois plus grandes classes de pesticides des années
1900 à nos jours . ................................................................................................................................ 8
TABLEAU 2 : Les principaux groupes chimiques des pesticides . .................................................. 12
TABLEAU 3 : Propriétés physico-chimiques et données de toxicité du carbofurane . ................... 18
TABLEAU 4 : la règlementation finale relative à l’utilisation de carbofurane . .............................. 25
TABLEAU 5 : Interprétation de la valeur du ratio de conformité (R).............................................. 38
TABLEAU 6 : les conditions analytiques pour la détection du carbofurane par HPLC-UV. .......... 40
TABLEAU 7 : Paramètres de la linéarité . ....................................................................................... 42
TABLEAU 8 : les propriétés physico-chimiques des échantillons . ................................................. 45

Liste des figures

FIGURE 1 : Mécanismes de transferts et de transformations des pesticides dans les milieux ...... 14
FIGURE 2 : Processus de pollution environnementale par les pesticides. ..................................... 15
FIGURE 3 : La réactivité des carbamate avec l'acétylcholine . ..................................................... 21
FIGURE 4 : Mécanisme d'action toxique d'un carbamate (carbofurane ) ...................................... 21
FIGURE 5 : les différents métabolites de carbofuran . .................................................................. 22
FIGURE 6 : Principales étapes d'une procédure analytique utilisée pour la détermination ........... 26
FIGURE 7 : representation schematique d’un système de pompage ............................................ 29
FIGURE 8 : injecteur à boucle . ..................................................................................................... 30
FIGURE 9 : Diagramme schématique des étapes de préparation du sol ........................................ 34
FIGURE 10 : Linéarité obtenue pour la solution standard du carbofurane pour tout le domaine
d’étude(à droite) et pour le domaine restreint (à gauche) . ................................................................ 41
FIGURE 11 : Le spectre du carbofurane standard detecter par HPLC-UV à une concentration de
5.10-3 mg / ml .................................................................................................................................... 42
FIGURE 12 : Le spectre du carbofurane détecter dans l’eau du puits par HPLC-UV . ................... 46
FIGURE 13 : Le spectre du carbofurane détecter dans l’eau d’extrémités par HPLC-UV . ........... 47
FIGURE 14 : Le spectre du carbofurane détecter dans l’eau d’extrémités par HPLC-UV . ........... 48

Liste des secteurs

SECTEUR 1 : L’utilisation des pesticides dans le monde par région et par catégorie .................... 16
SECTEUR 2 : Quantité des pesticides importés au Maroc en tonnes de 2009 à 2014 .................... 17
 Sommaire
INTRODUCTION............................................................................................................................................... 1

PRESENTATION DU CNESTEN
I. Présentation du CNESTEN.............................................................................................................................. 4
1 . Mise en service du Centre d’Etudes Nucléaires de la Maâmora ....................................................................... 4
2. Situation géographique .................................................................................................................................... 4
3 . Missions principales du CNESTEN ................................................................................................................ 5
II. Organigramme générale du CNESTEN ........................................................................................................... 5

Partie I : SYNTHESE BIBLIOGRAPHIQUE

I. Introduction ................................................................................................................................................... 8
II. Présentation générale des pesticides ............................................................................................................... 9
1. Définitions .................................................................................................................................................... 9
a. Pesticides ................................................................................................................................................. 9
b. Résidu de pesticides ................................................................................................................................. 9
2. Compositions ................................................................................................................................................ 9
III. classification ..................................................................................................................................................... 10
1. Premier système de classification ................................................................................................................ 10
a. Herbicides .............................................................................................................................................. 10
b. Fongicides ............................................................................................................................................. 10
c. Insecticides ............................................................................................................................................ 10
2. Deuxième système de classification............................................................................................................. 11
IV. Toxicologie et écotoxicologie ....................................................................................................................... 13
1. Sur l'homme ................................................................................................................................................ 13
2. Sur l'environnement .................................................................................................................................... 14
V. Les pesticides dans l’eau ................................................................................................................................... 15
1. Transfert des pesticides ............................................................................................................................... 15
2. Etat de contamination .................................................................................................................................. 15
VI. Le Marché des Pesticides .............................................................................................................................. 16
1. Dans le Monde ............................................................................................................................................ 16
2. Au Maroc.................................................................................................................................................... 16
VII. Règlementation ............................................................................................................................................. 17
VIII. Carbofurane .................................................................................................................................................. 18
1.Description ..................................................................................................................................................... 18
2. Propriétés physicochimique ........................................................................................................................... 18
3. la synthèse chimique du carbofurane.............................................................................................................. 19
a. Description du procédé.......................................................................................................................... 19
b. Etapes de synthèse ................................................................................................................................ 19
4. Mécanisme d'action ....................................................................................................................................... 21
a.L’Acétylcholinestérase .............................................................................................................................. 21
b.Mécanisme d’inhibition de l’acétylcholinestérase ...................................................................................... 21
 5. Toxicocénitique ............................................................................................................................................. 22
a.Absorption................................................................................................................................................. 22
b.Distribution ............................................................................................................................................... 22
c.Métabolisme .............................................................................................................................................. 23
d.Elimination................................................................................................................................................ 23
IX. Donnés toxicologiques de carbofurane .......................................................................................................... 23
1.Toxicité aigue................................................................................................................................................. 23
2.Toxicité chronique.......................................................................................................................................... 23
a.Effets cancérogène, tératogène ou mutagène .............................................................................................. 23
b.Effets sur la reproduction et le développement ........................................................................................... 23
c.Comportement et devenir du carbofurane dans l’environnement ................................................................. 24
d.Effets sur les organismes non cibles ........................................................................................................... 24
X. Règlementation ................................................................................................................................................. 25

Partie II : METHODES ANALYTIQUES

I. Introduction .................................................................................................................................................. 28
II. Technique d’analyse : HPLC –UV................................................................................................................. 28
1. Principe ..................................................................................................................................................... 28
2. Appareillage ............................................................................................................................................... 28
a. Un réservoir de solvant (éluant) .............................................................................................................. 28
b. Dispositif de dégazage ........................................................................................................................... 29
c. La pompe ............................................................................................................................................... 29
d. Injecteur ................................................................................................................................................. 30
e. Colonne ................................................................................................................................................. 30
f. Détecteur ............................................................................................................................................... 30
g. La phase stationnaire et la phase mobile ................................................................................................. 31
III. METHODES D’EXTRACTION ET D’ANALYSE ...................................................................................... 32
1. Matériels ..................................................................................................................................................... 32
a. Petit matériels ....................................................................................................................................... 32
b. Appareillage .......................................................................................................................................... 32
c. Réactifs .................................................................................................................................................. 33
2. Méthodes d’échantillonnage ........................................................................................................................ 33
a. Collecte des échantillons de l’eau des puits ............................................................................................ 33
b. Collecte des échantillons d’eau d’extrémité : ......................................................................................... 33
c. Collecte des échantillons de sol .............................................................................................................. 33
3. Traitement des échantillons ......................................................................................................................... 33
a. L’eau du puits ........................................................................................................................................ 33
b. L’eau de surface ..................................................................................................................................... 34
c. Le sol ..................................................................................................................................................... 34
 PARTIE III : VALIDATION DE LA METHODE D’ANALYSE
ET DOSAGE DES ECHANTILLONS
I. Introduction .................................................................................................................................................. 36
II. Contexte de la validation ............................................................................................................................... 36
1. Définitions .................................................................................................................................................. 36
2. Critères ....................................................................................................................................................... 36
a. Linéarité ................................................................................................................................................ 36
b. Limites de détection et de quantification ................................................................................................. 37
c. Le ratio de conformité ............................................................................................................................ 37
d. Fidélité................................................................................................................................................... 38
e. Justesse .................................................................................................................................................. 39
III. Résultats et discussions .................................................................................................................................. 40
A. Conditions d’analyses ................................................................................................................................. 40
1. Principe de la méthode ................................................................................................................................ 40
2. Produits chimiques et réactifs ...................................................................................................................... 40
3. Instrumentation et conditions chromatographiques ...................................................................................... 40
a. Appareillage .......................................................................................................................................... 40
b. Condition d’analyse ............................................................................................................................... 40
4. Préparation des solutions standards du carbofurane ..................................................................................... 41
5. Validation de la méthode............................................................................................................................. 41
B. Validation de la méthode d’analyse ............................................................................................................. 41
1. Linéarité ..................................................................................................................................................... 41
2. La limite de détection, de quantification et le ratio de conformité ................................................................ 42
3. Fidélité ....................................................................................................................................................... 43
a. Réplicabilité ........................................................................................................................................... 43
b. Répitabilité ............................................................................................................................................ 44
c. Reproductibilité ..................................................................................................................................... 44
4. Justesse ....................................................................................................................................................... 45
C. Dosage des résidus du carbofurane .............................................................................................................. 45
1. Objectif ....................................................................................................................................................... 45
2. Propriétés physico-chimiques ...................................................................................................................... 45
3. Dosage du carbofurane dans l’eau du puits .................................................................................................. 46
4. Dosage du carbofurane dans l’eau d’extrémités ........................................................................................... 47
5. Dosage du carbofurane dans le sol ............................................................................................................... 48
CONCLUSION GENERALE ............................................................................................................................ 49
Bibliographie : ......................................................................................................................................................... 50
ANNEXE I ...................................................................................................................................................................... 52
ANNEXE Ii ..................................................................................................................................................................... 53
INTRODUCTION

La propagation d’industrialisation, la naissance de nouvelle technologies,

l'accroissement de la population, le développement de l'agricultures et l'obligation de Maroc à
améliorer ses production agricole dans le but de résoudre les problèmes de nutrition , sont tous
liés à la consommation des quantités économes de pesticides .

Les pesticides aussi appelés produits phytosanitaires sont des substances émises dans
les cultures pour lutter contre des organismes nuisibles. La lutte chimique existe depuis des
millénaires et les pesticides sont utilisés depuis la deuxième guerre mondiale. Leur rôle est
important en termes d’assurance des récoltes, de production du lait et de la viande, de la
réduction du pourrissement des aliments stockés, la suppression d’épidémies, l’amélioration
de l’hygiène corporelle, la réduction du personnel dans l’agriculture et la désinfections des
lieux sanitaires.

Bien que l’objectif principal de l’utilisation de ces substances soit de résoudre certains
problèmes, cette utilisation intensive peut être à l’origine d’autres problèmes et effets néfastes
sur la santé humaine comme sur l’environnement. Les pesticides sont parmi les polluants les
plus dangereux de l’environnement en raison de leurs stabilités, leurs mobilités, et les effets à
long terme sur les organismes vivants. Le devenir des pesticides concerne tout le milieu
naturel dans son ensemble (sol, eau et air) mais le sol reste un compartiment clé car une
grande proportion des pesticides appliqués lors du traitement des cultures arrive au sol, par
application directe et/ou par lessivage du feuillage. (1)

Dans l'agriculture moderne, le carbofuran est utilisé à large spectre d'activité en

traitement du sol contre une large gamme d'insectes et ravageurs sur plusieurs cultures
(légumières, maïs, soja, tournesol, arbres, arbustes d'ornement, cultures florales...) .En
conséquence, il a attiré une grande attention comme une alternative aux insecticides
organochlorés, très persistants et très toxiques.

Bien qu'il est moins toxique et moins persistant que les organophosphorés
(modérément persistants), le carbofurane présente une préoccupation internationale et est
devenu une menace aussi bien pour la santé humaine et animal que pour l'environnement suite
à sa détection dans des eaux superficielles et souterraines à cause de sa mobilité et de son
lessivage dans beaucoup du sols. A cause de cette menace , son utilisation sous formes de
granules est interdite aux USA depuis 1991 et au Canada à partir de 1993 .

1
 De nombreux travaux ont démontré la présence et la persistance du carbofuran dans
les eaux, les sols, l’air mais aussi dans les produits alimentaires. Certains pesticides sont
désormais considérés comme des polluants organiques persistants ou encore des perturbateurs
endocriniens. Ils constituent à la fois une menace écologique et environnementale certaine
mais également sanitaire. Afin de garantir la sécurité alimentaire des consommateurs et
de préserver l’environnement, une législation concernant l’utilisation de ces composés a été
mise en place. Dans de nombreux pays, celle-ci se traduit par une tolérance des résidus de ces
micropolluants sous un certain seuil maximal (limite maximale de résidus). Il est alors aisé de
comprendre pourquoi la problématique réside désormais dans la détermination et la
quantification de ces pesticides dans différents milieux.

De nombreux programmes de suivi des résidus de pesticides dans des matrices

alimentaires et des échantillons environnementaux ont déjà été menés. Cependant, le nombre
de polluants à l’état de traces, qui doivent être suivis, est constamment croissant et les niveaux
auxquels ces composés doivent être déterminés sont de plus en plus bas. Il est alors devenu
nécessaire de développer des méthodes analytiques capables de détecter et de quantifier ces
molécules à de très faibles teneurs.

OBJECTIF :

Notre objectif est sert à mettre en place et valider une méthode de dosage des résidus
du carbofurane présent dans des échantillons de l’eau et du sol prélevés à partir d’une terre
agricole intégrer dans la région de Rabat - Salé - Kénitra .

Ce travaille est repartie en trois chapitres :

Chapitre I : Synthèse bibliographique relative au sujet des pesticides notamment le carbofurane.

Chapitre II : Techniques /Méthodes d’analyses utilisées pour l‘extraction du carbofuran.

Chapitre III : Optimisation et validation d’une méthode de dosage du carbofurane .

2
PRESENTATION

DU

CNESTEN

3
I. Présentation du CNESTEN

Le Centre National de l’Energie, des Sciences et des Techniques Nucléaires (CNESTEN)

est un établissement public créé en 1986, à vocation scientifique, technique et commerciale et
ouvrant sous la tutelle du Ministre de l’énergie, des Mines, de l’eau et de l’environnement, et
administré par un conseil d’Administration présidé par le Premier Ministre.

1) Mise en service du Centre d’Etudes Nucléaires de la Maâmora

A partir de Janvier 2003, le CNESTEN a transféré ses activités de Rabat au CENM et a

commencé l’exploitation des diverses installations et laboratoires. En effet, pour accompagner
le développement de la demande nationale en matière des applications des techniques
nucléaires, stimuler la recherche dans ce domaine et préparer l’avènement de
l’électronucléaire pour des fins énergétiques ou de dessalement de l’eau de mer, le CNESTEN
a réalisé, de 1999 à fin 2002, le premier centre d’études nucléaires du Maroc (CENM).
Cette œuvre scientifique et technique concrétise le choix politique et stratégique des
pouvoirs publics marocains dans le domaine des hautes technologies.
Sa réalisation a pu voir le jour grâce à l’investissement consenti par l’Etat et à la
coopération scientifique, technologique et financière de l’AIEA, la France et les Etats Unis
d’Amérique.

2) Situation géographique

Le Centre National de l’Energie, des Sciences et des

Techniques Nucléaires « CNESTEN » se situe en plein cœur de
la forêt de la Maâmora, à 22 Km au Nord-est de Rabat et à 15 km
au Sud-ouest de Kenitra., le Centre d'Etudes Nucléaires de la
Maâmora (CENM) assure au Maroc la maîtrise du savoir-faire de
la technologie nucléaire.

Le CENM est un complexe scientifique et technologique réalisé sur une superficie de

25ha la surface totale construite est de 18.300 m² abritant :
Un réacteur nucléaire de recherche d'une puissance de 2 MW,

4
 Un ensemble de laboratoires de recherche scientifique et appliquée spécialisés dans les
domaines :
• des applications nucléaires en médecine, biologie et santé ;
• de l’instrumentation et les applications industrielles des rayonnements
ionisants
• des applications nucléaires dans les sciences de la terre et de l’environnement
• de la sûreté et la sécurité radiologique ;
• de la gestion des déchets radioactifs;
Un centre de Formation;
Un Centre d’Information & de Documentation;
Bâtiments conventionnels de support: Administration, Sécurité, moyens généraux,
Cantine, Portier, Gendarmerie;
Ateliers Mécaniques et Verrerie;
Zones d'extension future.

3) Missions principales du CNESTEN

Développer la recherche scientifique dans le domaine nucléaire ;

Promouvoir les applications des techniques nucléaires dans les secteurs socio-
économiques ;
Assurer le support technique à l’état en matière de sécurité radiologique et nucléaire ;
Contribuer à la préparation des bases technologiques nécessaires à l’introduction de
l’option électronucléaires.
Le CNESTEN s’est forgé une triple vocation: centre de recherche, de conseil et
d’appui technique à l’état en matière nucléaire et prestataire de service dans le domaine
des sciences et des technologies nucléaires.
Le CNESTEN a développé un savoir-faire et une expérience confirmés au niveau
national et international dans le domaine de l’utilisation des techniques nucléaires dans
les secteurs de la santé, l’eau, l’environnement, l’agriculture, l’industrie, l’énergie, la
sureté et la sécurité.

II. Organigramme générale du CNESTEN

5
 DIREC TION GENERAL E
DIREC TION GENERAL E

Comités de
Struc ture de gestion
c oordination/
du projet CEN
c oncertation

SECRETARIAT
GENER AL

Audit Qualité J uridique

Contrôle de gestion Comm unic ation

Pôle Exp loitatio n et

Pôle Valo risatio n d e la Pôle Etu d es et Pôle Ad min istration
Pôle Secu rité et Su reté Tech n o lo gies d es In stallatio n s
Rech erch e Rech erch e d es Resso u rces
Nu cléaires

Dépatement des
Département Program mation et Département de Département d'Exploitation Département
Applications aux Scienc es
Ev aluation Ec onomique Radioprotection et et Technologies des Ress ourc es Hum aines
du Viv ant
Sécurité Réac teurs

Dépatement des
Département Mark eting et Département de Département Moy ens
Applications aux Scienc es
Comm ercial Protec tion de Département de gestion Généraux
de la Terre et de
l'Env ironnement des Déchéts Radioac tif s
l'Env ironnement

Département
Unité de Sécurité
Département C ooperation Equipem ent et
Phy s ique Département de Département de
Approv isionnem ent
l'Instrum entation et des Maintenance Tec hnique
Applications Indus trielles

Centre de Doc um entation et Département Département F inances

d'Inf ormation d'Analy s e de Sûreté et Com ptabilité
Département de la
Phy s ique des Matériaux

Centre de F ormation en Département Sy s tèm e

Tec hniques Nuc léaires d'Inf ormation

Organigramme Général du CNESTEN

6
 Chapitre I

SYNTHESE
BIBLIOGRAPHIQUE

7
 I. Introduction
La première utilisation des pesticides en agriculture date de l’antiquité. Leur développement
à ensuite suivi celui de la chimie minérale. Les composés alors employés étaient des dérivés de
composés minéraux ou de plantes comme par exemple, ceux à base d’arsenic, de cuivre, de zinc, de
manganèse ou de sulfate de nicotine. Puis, à partir de la seconde guerre mondiale, les pesticides ont
bénéficié du développement de la chimie organique. Les composés synthétiques majoritaires ont
d’ailleurs été à l’origine de l’expansion rapide des produits phytosanitaires à partir des années 1940.
(2)

Tableau 1 : Historique de l’évolution des trois plus grandes classes de pesticides des
années 1900 à nos jours (3).

Plus de 1000 pesticides sont utilisés à travers le monde pour empêcher que nos aliments ne
soient endommagés ou détruits par des nuisibles. Chacun de ces pesticides possède des propriétés et
des effets toxicologiques différents.

Bien que la plupart d’entre eux aient été interdits dans de nombreux pays en raison d'effets
mutagènes et cancérigènes, les pesticides et leurs métabolites sont toujours présents dans
l'environnement, en particulier dans les sols et les sédiments, en raison de leur persistance et leurs
propriétés lipophiles (4).

8
 II. Présentation générale des pesticides
1. Définitions
a. Pesticides

Les pesticides sont, en terme générique utilisé pour désigner toutes les substances naturelles
ou de synthèse capables de contrôler, d'attirer, de repousser, de détruire ou de s'opposer au
développement des organismes vivants (microbes, animaux ou végétaux) considérés comme
indésirables pour l'agriculture, l'hygiène publique (par exemple les cafards dans les habitations), la
santé publique (les insectes parasites (poux, puces) ou vecteurs de maladies telles que le paludisme
et les bactéries pathogènes de l' eau détruites par la chloration, la santé vétérinaire, ou les surfaces
non-agricoles (routes, aéroports, voies ferrées, réseaux électriques...)., ils sont l'un des rares
substances qui sont à la fois toxiques et délibérément rejetés dans l'environnement (5).

b. Résidu de pesticides

Selon la FAO (Food and Agriculture Organization), un résidu de pesticides désigne toute
substance présente dans les aliments, les produits agricoles ou les aliments fourragers par suite de
l’utilisation d’un pesticide. Ce terme englobe tous les dérivés du pesticide comme les métabolites,
les produits de dégradation, les impuretés possédant des propriétés toxicologiques avérées.

2. Compositions

Un pesticide comprend une ou plus des matières actives et des matières additives. La
présentation sous laquelle un pesticide est vendu et utilisé est appelée « formulation ».
La formulation est composée de deux types de matières :
➢ Les matières actives sont responsables de l’effet et de la toxicité intrinsèque
d’un pesticide.
➢ Les matières additives permettent l’utilisation de la formulation, assurent la
stabilité des matières actives durant le stockage et/ou l’utilisation.

Les matières additives sont souvent appelées des adjuvants, des solvants, ou des excipients
(6).

9
 III. classification

Les pesticides disponibles aujourd’hui sur le marché sont caractérisés par une telle variété de
structures chimiques, de groupes fonctionnels et d’activités que leur classification est complexe.

En général les substances actives sont classées en fonction de :

➢ la nature de l’espèce à combattre (premier système de classification),
➢ la nature chimique de la principale substance active (deuxième système

de classification (7,8).

1. Premier système de classification

Le premier système de classification repose sur le type de parasites à contrôler.

Il existe principalement trois grandes familles d’activités que sont les :
➢ Herbicides
➢ Fongicides
➢ Insecticides

a. Herbicides

Ce sont les plus utilisés dans le monde en tonnage et en surface. Ils sont destinés à éliminer
les végétaux rentrant en concurrence avec les plantes à protéger en ralentissement leur croissance.
Ils peuvent être des perturbateurs de la régulation d’une hormone «l’auxine», le principale hormone
agissant sur l’augmentation de la taille des cellules, de la photosynthèse ou encore des inhibiteurs de
la division cellulaire, de la synthèse des lipides, de cellulose ou des acides amines.
b. Fongicides

Ces substances permettent de combattre la prolifération des maladies des plantes provoquées
par les champignons ou encore des bactéries.
Ils peuvent agir différemment sur les plantes soit en inhibant le système respiratoire ou la
division cellulaire, soit en perturbant la biosynthèse des acides aminés, des protéines ou le
métabolisme des glucides.
c. Insecticides

Ces substances sont utilisées pour la protection des plantes contre les insectes. Ils
interviennent en les éliminant ou en empêchant leur reproduction.
Ils existent différents types d’insecticides tels que les neurotoxiques, les régulateurs de
croissance et ceux agissant sur la respiration cellulaire.

10
 Outre, ces trois grandes familles, d’autres peuvent être citées en exemple :
➢ les taupicides contre les taupes,
➢ les acaricides contre les acariens,

➢ les rodenticides contre les rongeurs,

➢ les nématicides contre les nématodes et les vers,

➢ les molluscicides contre les mollusques, limaces et escargots,

➢ les corvicides contre les corbeaux et tous les oiseaux

ravageurs de cultures.

2. Deuxième système de classification

Le classement se fait en fonction de la nature chimique de la substance active.

Les principaux groupes chimiques comprennent les :
➢ Organochlorés
➢ Organophosphorés
➢ Carbamates
➢ Pyréthrinoïdes

À ceux-ci s’ajoutent des produits divers tels que les triazines et les urées substituées.

Famille de molécules Définition Exemples

Dichlorodiphényltrichloroéthane
Les organochlorés sont des
insecticides composés d’atomes de
carbone, d’hydrogène et de chlore.
Ce sont des composés apolaires
donc très peu solubles dans l’eau,
Les
fortement solubles dans les lipides et les
Organochlorés solvants organiques. Ils sont caractérisés
par leur résistance à la dégradation
biologique, chimique et photolytique,
par leur toxicité et par leur tendance à la
bioaccumulation dans la chaîne
alimentaire. (9)

11
 Les organophosphorés sont des
composés chimiques similaires aux
organochlorés caractérisés par la
présence d’un atome de phosphore.
Ils constituent la classe des
insecticides la plus toxique pour les
vertébrés cependant ils sont peu
persistants dans l’environnement et se Méthamidophos
dégradent rapidement en climat tropical.
Ce qui justifie leur présence en
agriculture comparativement aux
Les organochlorés (10).
Organophosphorés
Ils sont généralement subdivisés en
trois groupes suivants les structures : les
aliphatiques, les dérivés phénylés et les
hétérocycles.

Ils sont généralement volatiles et

solubles dans les hydrocarbures non
aliphatiques et sont susceptibles de
s’hydrolyser facilement en milieu
alcalin.

Les carbamates sont des insecticides Carbofurane

dérivés de l’acide carbamique, qui
agissent en inhibant l’activité
Les Carbamates enzymatique de l’acétylcholinestérase,
inhibition qui peut être réversible dans
certains cas.

Diuron
Les pyréthrinoïdes sont des
Les insecticides synthétiques. Leur structure
pyréthrinoïdes est dérivée des pyréthrines, issues des
fleurs du pyrèthre. Ils sont stables à la
lumière et sont en général efficaces à
faible dose sur un large spectre
d’insectes(9).

TABLEAU 2 : Les principaux groupes chimiques des pesticides.

12
 IV. Toxicologie et écotoxicologie

Plusieurs études ont été menées pour connaître le devenir des produits phytosanitaires après
leur épandage en zone agricole. Les résultats obtenus ont permis de conclure que le recours excessif
aux pesticides peut porter préjudice à la santé des agriculteurs et des consommateurs, tout comme à
l’environnement et à l’économie.

1. Sur l'homme
La contamination de l’homme par les pesticides peut se faire par différentes voies. Il peut les
absorber via les aliments et l’eau ou par contact avec la peau ou encore par inhalation.
A l’inverse, d’autres substances de toxicité moindre sont susceptibles de s’accumuler dans
l’organisme et d’induire des effets à plus long terme qui sont difficilement quantifiables.
Par ailleurs ces produits sont transformés parallèlement en différents métabolites susceptibles
d’engendrer d’autres répercutions sur l’organisme humain (10).
Plusieurs études épidémiologiques ont établi des liens plus ou moins importants entre
l'exposition professionnelle aux pesticides et certaines formes de cancers (11).
Des relations ont été observées pour le lymphome non hodgkinien (cancer des lymphocytes), la
leucémie, les sarcomes, le myélome multiple, le cancer du cerveau et le cancer de la prostate. Des
possibilités d'association ont aussi été faites pour le cancer du sein, du poumon, du pancréas, de la
vessie, des testicules et de l’estomac (12).
A noter aussi que des pesticides ont été retrouvés dans le cordon ombilical mais aussi dans le
lait maternel. Ils sont à l’origine parfois des mauvais développements des fœtus, des malformations
congénitales et des anomalies du système nerveux central (13).
Certaines substances de synthèse, dont des pesticides, peuvent perturber le système hormonal
ou endocrinien et provoquer un déséquilibre physiologique, pourraient aussi être associées au
développement du cancer du sein, à une réduction de la fertilité mâle, à des dommages aux glandes
thyroïde et pituitaire, à la diminution du système immunitaire et à des problèmes liés au
comportement. Parmi les autres effets possibles chez l'humain, on peut noter l'obésité, la
décalcification des os et le diabète (14).
Mais tous ces liens entre les produits phytosanitaires et certains cancers ne sont que des
suppositions. Il n’est pas exclu que d’autres facteurs de risque présents en milieu agricole (comme le
tabagisme, le rayonnement solaire, l’alimentation…) puissent jouer un rôle important dans le
déclenchement de ces cancers (15).

13
 2. Sur l'environnement
Les substances actives phytosanitaires sont appliquées le plus souvent sous la forme de
liquides pulvérisés sur les plantes et/ou sur le sol. Dans certains cas, elles sont incorporées au sol,
déposées sous forme de granulés, ou encore par le biais des graines qui en sont enrobées.
Dès qu’ils ont atteint le sol ou la plante, les pesticides peuvent être absorbés par les plantes
ou des organismes du sol, les substances actives peuvent se volatiliser, ruisseler ou être lessivées,
voire même rester dans le sol.
Ainsi, l'ensemble des compartiments environnementaux peuvent être potentiellement touché
et impacté par les pesticides, en plus des cibles contre lesquelles ils sont théoriquement dirigés. Les
effets toxiques indésirables pour les espèces non cibles des trois compartiments environnementaux
sont liés et il est illusoire de vouloir les distinguer. En effet une même substance active pourra avoir
des répercussions sur l'ensemble des espèces constitutives des différents compartiments de
l'environnement. (16)

FIGURE 1: Mécanismes de transferts et de transformations des pesticides dans les milieux

de l’environnement.

14
 V. Les pesticides dans l’eau
1. Transfert des pesticides
L’eau est un des vecteurs principaux du transfert des substances phytosanitaires appliquées
sur les parcelles vers les milieux aquatiques. Par conséquent, la caractérisation des voies de transfert
de l’eau est indispensable à la mise en place de moyens pour limiter les risques de transferts
associés de matières actives. L’eau excédentaire est susceptible de mobiliser et faire migrer les
produits phytosanitaires vers les ressources en eau par infiltration, ruissellement ou écoulement
hypodermique. En règle générale, l’infiltration est supposée alimenter les réserves souterraines,
tandis que le ruissellement et l’écoulement hypodermique orientent l’eau vers les réseaux
superficiels. A ces trois voies de circulation s’ajoute le transfert par réseau de drainage.

2. Etat de contamination
La problématique des pesticides comme polluants concentrés et entraînés par les eaux de
pluie et de ruissellement vers les cours d'eau et les nappes phréatiques est approfondies car les
conséquences peuvent être majeures à la fois sur la santé de l’homme mais également sur la faune et
la flore en provoquant des déséquilibres et des accumulations de toxiques tout le long de la chaîne
alimentaire.(17)

Le risque de contamination quasi directe des nappes lié à un apport accidentel, le transfert
par infiltration des produits phytosanitaires épandus sur les champs agricoles peuvent aussi
entraîner la contamination des eaux souterraines. Dans ce cas là, le risque de contamination
dépend de la mobilité du pesticide elle-même fonction de leur propriétés physico-chimiques,
des propriétés du sol et de la vitesse d’infiltration dans le sol . Des études a été effectuer pour
examiné le niveau de contamination en pesticides des eaux souterraines en Lorraine. Ils ont
dénombré 5 matières actives fréquemment retrouvées dans ce milieu : atrazine, simazine, lindane,
carbofurane et isoproturon. (18)

FIGURE 2 : Processus de pollution environnementale par les pesticides.

15
 VI. Le Marché des Pesticides
1. Dans le Monde

Il existe dans le Monde près de 100 000 spécialités commerciales autorisées à la vente. Elles
sont composées à partir de 900 matières actives différentes. On enregistre 15 à 20 nouvelles matières
actives qui s'y rajoutent chaque année.

Le marché mondial (environ 40 milliards de dollars) est globalement stable depuis quelques
années (2000).

Il faut noter que certains évènements climatiques récents (chaleur et sécheresse en Europe,
pluie en Océanie) influencent fortement ces chiffres, en Europe et en Amérique du Nord. Les
herbicides représentent 70 à 80% des produits utilisés (notamment à cause de la forte augmentation
des cultures de maïs) tandis que sous les Tropiques, 50% des produits appliqués sont des insecticides.

La diversification des cultures, avec l’amélioration du niveau de vie dans certains pays,
modifie également cet équilibre. Ainsi la Chine a converti l’équivalent de la surface de l’Angleterre de
rizières en cultures maraîchères, entraînant une diversification des produits mis en œuvre (19).

SECTEUR 1 : L’utilisation des pesticides dans le monde par région et par catégorie (19)

2. Au Maroc

Le Maroc importe chaque année entre 6.000 à 6.500 tonnes de produit phytosanitaires par le
biais d'environ 28 sociétés. Il existe actuellement sur le marché, environ 210 matières actives
représentées par 1400 spécialités commerciales.

16
 Les insecticides occupent la première place avec près de 90 molécules et 602 spécialités
commerciales. Ensuite viennent les fongicides avec 40 molécules (380 spécialités), les herbicides
avec 60 molécules (192 spécialités).

Enfin, 18 molécules de pesticides divers (acaricides, acaricides, auxines, etc...) représentés par
255 spécialités commerciales ont été homologuées. (20)(21)

SECTEUR 2: Quantité des pesticides importés au Maroc en tonnes de 2009 à 2014

(source : CropLife Maroc).

VII. Règlementation
Le contrôle des produits phytosanitaires s’est établi peu à peu en fonction de la politique de
développement prôné par le pays et par la disponibilité des moyens.

Au Maroc, ce contrôle a connu une évolution dans le temps. La promulgation de la Loi n°42-
95 relative au contrôle et à l’organisation du commerce des produits pesticides à usage agricole a
permis d’édicter les mesures relatives à la fabrication, l’étiquetage, l’entreposage, la distribution, la
commercialisation et l’utilisation des produits phytosanitaires à usage agricole. Au terme
de la loi, aucun produit phytosanitaire ne peut être commercialisé, importé ou fabriqué s’il n’a
pas fait l’objet d’une homologation (22).

17
 VIII. Carbofurane

Le carbofurane, un carbamate anticholinestérase, est couramment utilisé comme insecticide,

nématicide et acaricide dans les pratiques agricoles du monde entier. En raison de son utilisation
répandue dans l'agriculture, la contamination des aliments, de l'eau et de l'air est devenue imminente et,
par conséquent, des effets néfastes sur la santé sont inévitables chez les humains, les animaux, les
espèces sauvages et les poissons. Actuellement, le carbofuran est le plus souvent impliqué dans une
intoxication malveillante.

1. Description

Le carbofurane ou le 3,3-dihydro-2,2
dimethylbenzofuran-7-ylmethylcarbamate de formule brute
(C12H15NO3) est un insecticide et un nématocide du groupe
des carbamates , solide et cristallin , stable en milieu neutre ou
acide, mais instable en milieu alcalin, utilisé dans la lutte
contre une grande variété d’organismes défoliateurs et
fouisseurs qui s’attaquent à de nombreuses cultures de fruits et
de légumes.

2. Propriétés physicochimique

Carbofurane Propriété Unité Valeur

Masse molaire g mol-1

ol 221,30

Point de fusion °C 153–154

Pression de vapeur mPaa 2,7

Densité g/cm3 1,8
Dégradation jours
urs 30–117
Formule brute : C12H15NO3 Solubilité dans l'eau mg/litre 700
Nature : Insecticide
Apparence : Cristaux blancs DT501 ur)
(Jour) 26 à 110 dans le sol
Utilisation : Toutes les cultures 690 dans l’eau
DL502 (mg Kg-1) 2 chez les souris

TABLEAU 3: Propriétés physico-chimiques et données de toxicité du carbofurane (23).

1
DT50 : le temps de demi-vie dans un milieu donné, est la période nécessaire à la disparition de la moitié du
produit appliqué (en jours).
2
DL50 : La dose létale 50 (concentration létale 50) est un indicateur quantitatif de la toxicité d'une substance.

18
 3. la synthèse chimique du carbofurane
Le carbofurane est synthétisé par plusieurs méthodes, nous citons le procédé de synthèse

à partir le 1,2 cyclohexanedion :

a. Description du procédé

Le procédé comprend l'alkylation de la 1,2-cyclohexanedione avec un composé bêta-

méthallylique et la soumission du produit résultant à un réarrangement / axomatisation de Claisen
pour obtenir du carbofuranne phénol.

En fin la réaction du phénol avec l'isocyanate de méthyle donne le carbofurane.(24)

b. Etapes de synthèse

Ce processus peut être décrit comme suit :

l'alkylation de la 1,2-cyclohexanedione :

Dans la voie préférée, la 1,2-cyclohexanedione est O- et C-alkylée avec du chlorure de β-

méthallyle par catalyse basique ou O-alkylée avec de l'alcool β-méthallylique par catalyse acide
pour donner le β-méthallyldiosphénol III correspondant.

19
 Formation du carbofuranol :

Le réarrangement de disophénol III en 1,2-dione I substituée en 3 (indiquée en énol) ou en dérivé

dihydrofurane II est réalisé.

Ces intermédiaires ne sont pas isolés mais sont ensuite chauffés en présence d'un catalyseur
d'aromatisation (tel que le palladium sur divers supports ou le soufre) pour donner le benzofuranol
IV:

Préparation du carbofurane :

Le benzofuranol IV est ensuite converti en carbofuranne par des procédures classiques de

carbamoylation, telles que par réaction avec de l'isocyanate de méthyle en présence d'un catalyseur
à base d'amine tertiaire:

20
 4. Mécanisme d'action

Le carbofurane est un insecticide à large spectre très toxique de la famille des carbamates. Il
est absorbé à partir du tractus gastro-intestinal, par inhalation, et dans une moindre mesure par la
peau intacte.
C’est un pesticide anticholinesterasiques qu’il agit par inhibition réversible de l’acétylcholinestérase
(Responsable de la dégradation de l'acétylcholine : neurotransmetteur du système parasympathique
qui est libéré aux jonctions neuromusculaires) et qui provoque une crise cholinergique et en fin la
mort des insectes.
a. L’Acétylcholinestérase

Est une enzyme qui catalyse la réaction d'hydrolyse de l’acétylcholine (médiateur chimique
du système nerveux parasympathique nécessaire à la transmission de l’influx nerveux) en choline et
en acide acétique.
En physiologie, cette réaction est nécessaire pour permettre aux récepteurs cholinergiques de
revenir à leur état de repos après activation.

b. Mécanisme d’inhibition de l’acétylcholinestérase

Les carbamates en générale réagissent avec les estérases (acétylcholinestérase) qui sont
rapidement hydrolysés, avec fixation du carbamate sur le site catalytique, donnant naissance à une
enzyme carbamylée stable par rapport à l’enzyme acétylée formé naturellement.

FIGURE 3 : La réactivité des carbamate avec l’acétylcholine.

FIGURE 4: Mécanisme d'action toxique d'un carbamate (carbofurane). (25)

21
 5. Toxicocénitique

Le carbofurane est dégradé dans le sol par hydrolyse, par action microbienne et, dans une
moindre mesure, par photodécomposition. Sa persistence dépend du pH, du type de sol, de la
température, de la teneur en eau et de la population microbienne.(26)

a. Absorption

- Une absorption digestive rapide et quasi complète (>90%).

- Une bonne pénétration cutanée du fait de leur lipophilie importante.

b. Distribution

La plupart des produits sont rapidement distribués dans l’organisme et ne tendent pas à
s’accumuler. Les concentrations les plus élevées sont retrouvées dans les organes où le produit sera
métabolisé.
c. Métabolisme

Principalement hépatique, le carbofurane est dégradé en différents composés comprenant le

carbofuranephénol, le 3-hydroxycarbofurane et le 3- cétocarbofurane,le 3-hydroxycarbofuranephénol
et le 3-céto-carbofurane phénol.

FIGURE 5 : Les différents métabolites de carbofurane (27).

22
 d. Elimination

L’excrétion des métabolites est essentiellement urinaire, accessoirement pulmonaire et fécale.

Le carbofurane est donc rapidement absorbé, métabolisé et éliminé principalement via l'urine.
L'hydroxylation, les réactions d'hydrolyse et de conjugaison sont les principales étapes métaboliques.
Les métabolites résultants sont soit des esters, soit des produits de clivage de la liaison ester. (28)

IX. Donnés toxicologiques de carbofurane

1. Toxicité aigue

Le Carbofuran appartient à la classe Ib (très dangereux) de l’OMS (Organisation Mondiale de

la Santé)(29). Certaines de ses formulations appartiennent à la classe I (très dangereux ou
extrêmement dangereux) ou sont de la classe II (modérément dangereux). Il est extrêmement toxique
par voie orale et par inhalation (la DL50 est 5 à 13 mg/kg chez le rat, 2mg/kg chez la souri).
La toxicité par la voie cutanée est faible. Il est peu irritant pour les yeux et la peau. Il n'est pas
un sensibilisant cutané (32). La dégradation par la chaleur peut libérer des vapeurs toxiques (30). De
tous les pesticides utilisés sur les cultures, excepté l’aldicarb et le parathion, le carbofuran a la plus
forte toxicité aigue chez l’homme (29).
C’est un neurotoxique du à son activité d’inhibiteur du cholinestérase (29) (30), (31). Cette
activité est de courte durée et est réversible (30). Une personne exposée à des doses supérieures à
0,25 mg·kg-1 du poids corporel peut présenter des symptômes tels que: salivation, douleurs
abdominales, somnolence, étourdissement, anxiété, vomissement, perte de contrôle, voire coma et
arrêt cardiaque (31).
C’est un puissant perturbateur endocrinien qui peut causer une altération de la concentration
de plusieurs hormones de l’homme et de l’animal même à une dose infime. (31)

2. Toxicité chronique

a. Effets cancérogène, tératogène ou mutagène

Le carbofurane n’est pas connu pour induire des effets cancérigènes de même, il n’a pas été
démontré que le carbofuran est tératogène ou mutagène (29).

b. Effets sur la reproduction et le développement

L'administration subchronique du carbofuran aux rats peut présenter une toxicité pour les
spermatozoïdes et les testicules (32). L'exposition prolongée ou répétée au carbofuran peut causer les
mêmes effets qu'une exposition aiguë (32). Il n’a pas été démontré que le carbofuran a un effet

23
sur la reproduction chez l’homme et l’animal au niveau d’exposition prévus (30). Cependant
l’ingestion de doses élevées de manière chronique endommage les testicules chez les chiens (30). Les
doses de 5mg/kg/jour données aux rats et aux souris pendant deux ans ont montré des diminutions de
poids, le carbofurane est connu pour induire des effets sur la reproduction et le développement (29).

c. Comportement et devenir du carbofurane dans l’environnement

Le carbofuran est soluble dans l’eau, et est classé comme mobile à très mobile dans les sols
sablonneux et limoneux, et modérément dans les sols argileux (30).
Au sol, sa demi-vie relative à la photolyse est de 78 jours. Il est très persistant dans les sols en
condition aérobie. Sa demi-vie varie selon le pH du sol (demi-vie = 149 j à pH 7,7 et demivie = 321j
à pH 5,7) (33). Le carbofuran se dégrade assez lentement dans les sols non stériles, neutres ou acides
dans des conditions aérobies avec une demi-vie de 1 à 8 semaines. Il est plus stable dans un sol stérile
et instable dans des conditions alcalines.
Dans des conditions anaérobiques, le carbofuran peut prendre deux fois plus de temps avant
de se dégrader (34). Il est aussi très persistant dans l'eau en condition anaérobie où sa demi-vie est de
189 jours (33). Du fait de sa grande mobilité, le carbofuran présente un risque de contamination des
eaux superficielles dans les zones sablonneuses, le carbofuran est connu pour lixivier dans le sol, et
il a été trouvé dans des eaux souterraines suite à des utilisations agricoles (34).
Dans l'air, le carbofuran existe à la fois sous forme de vapeur et adsorbé sur les particules en
suspension. (33)

d. Effets sur les organismes non cibles

Plusieurs sources concordantes existent sur la haute toxicité du carbofurane envers les oiseaux
(30). Une seule graine peut tuer un oiseau (DL501 orale de 0,4 mg/kg poids corporel (33).
Le carbofuran est très toxique pour les invertébrés de l’eau douce et extrêmement toxique
pour les oiseaux (34). Il est modérément à très toxique chez les poissons d'eau douce (CL50 96 h =
88 à 1 990 ppb) (33). Il est extrêmement toxique chez la Daphnie magna, la CL50 2 est de 0,015 mg/l,
(20), chez les algues la DL 50 est de 19,9 mg/l (31).
Le carbofuran est extrêmement toxique chez les abeilles (34), avec une DL50 aiguë par
contact de 0,16μg/abeille (33).

1
DL50 : Dose létale médiane
2
CL50 : Concentration létale médiane

24
 X. Règlementation

L'analyse de EPA (Agence de Protection environnementale) a également confirmé que le

carbofuran est une menace pour la santé humaine à travers la nourriture, l’eau et les boissons
contaminées, et aussi l'exposition professionnelle (35).

l'EPA interdit toutes les utilisations du carbofuran , et cette décision a été appliquée le 31
décembre 2009. Le carbofuran ne peut pas être utilisé aux Etats-Unis, où il est produit (36).

Pays Décisions
La Décision de la Commission 2007/416/CEdu 13 juin
2007 est pleinement entrée en vigueur le 13 décembre
Union européenne 2008, toute utilisation de produits phytopharmaceutiques
contenant du carbofuran étant alors interdite à compter de
cette date au plus tard. (37)
La vente de produits pesticides contenant du carbofuran a
été interdite au Canada à compter du 31 décembre 2010.
L’utilisation de produits pesticides contenant du
Canada
carbofuran a été interdite à partir du 31 décembre 2012.
Les produits pesticides contenant du carbofuran ne
peuvent plus être utilisés au Canada. (37)

Pays du CILSS Sur la recommandation du Comité sahélien des pesticides

(CaboVerde,Gambie, (CSP), le carbofuran a été interdit par la décision du
Mauritanie, Niger, Ministre coordonnateur du CILSS n° 008/MAE-MC/2015
Sénégal, Tchad et du 08 avril 2015. Les produits à base de carbofuran ne
Togo) peuvent plus être utilisés dans les pays du CILSS. (37)
Selon la décision du Ministre de l’Agriculture du
Développement Rural et des Pèches Maritimes le
carbofurane à été homologuer pour usage agricole dans les
cultures de tomate et de betterave a sucre pour une durée de
Maroc
dix ans durant la période du 17/04/2006 au 16/04/2016
La même décision est encore disponible dans le marché des
pesticides jusqu’à présent. (Annexe I).

TABLEAU 4 : La règlementation finale relative à l’utilisation de carbofurane.

25
 PROBLEMATIQUE

Le contrôle des organismes nuisibles aux cultures (adventices, ravageurs et maladies) est
essentiel à la production végétale agricole. Celle-ci fait encore largement appel à l’utilisation de
produits phytosanitaires en vue d'optimiser et de sécuriser les systèmes de production mais est
également à l’origine de contaminations environnementales et d’effets potentiellement préjudiciables
pour la santé humaine et pour l’environnement. En particulier, leur utilisation peut conduire à la
présence de résidus de pesticides dans les denrées alimentaires. (38)
La surveillance des résidus des pesticides dans le domaine de la santé publique est confrontée
à la quantification et l’identification de centaines de molécules ayant des propriétés physico-chimiques
différentes dans des matrices variées. Aussi des méthodes sensibles, sélectives, fiables et engendrant
un cout modéré sont nécessaires et représentent un enjeu non négligeable voire même un défi pour les
analystes.
C’est dans ce contexte de réglementation de la présence des pesticides, du respect de la
conformité commerciale des produits et de garantie de la sécurité du consommateur que des méthodes
analytiques capables d’identifier sans ambigüité les pesticides et de les quantifier à de très faibles
niveaux sont très fortement requises.
C’est dans cette même voie que notre objectif est sert à valider une méthode de dosage des
résidus de carbofurane présent dans l’eau et le sol.

FIGURE 6 : Principales étapes d'une procédure analytique utilisée pour la détermination

de pesticides dans des échantillons alimentaires. (39)

26
 Chapitre II

METHODES
ANALYTIQUES

27
 I. Introduction
L'analyse des résidus de pesticides est une activité complexe car les produits
phytosanitaires appartiennent à des classes chimiques très diverses ; leur dosage nécessite donc
l'utilisation de techniques variées et les limites de détermination demandées sont de plus en plus
basses.

La description du devenir des pesticides et de leurs produits de dégradation dans

l’environnement nécessite leur identification et leur dosage dans les sols et les eaux. A cette fin,
il faut mettre tout un ensemble de techniques qui permettent d’obtenir les informations
recherchées à partir d’échantillons prélevés dans les divers milieux où les pesticides peuvent être
présents.

II. Technique d’analyse : HPLC –UV

1. Principe
La chromatographie liquide haute performance appelé
CLHP est une technique instrumentale qui permet de séparer les
composants d’un mélange non volatile, thermosensible, de polarité
élevée afin de les identifier et les quantifier. Elle met en œuvre,
selon la nature de la phase stationnaire, des phénomènes de partage,
d’adsorption, d’échange d’ions ou d’exclusion.

2. Appareillage
Un appareil CLHP (Fig.1.1) comporte différents modules:
un réservoir contenant la phase mobile, un système de pompage, un
injecteur, une colonne, un détecteur à travers lesquels
un liquide entraîne les substances d’un mélange à séparer et un système d’acquisition de données.
Il nécessite également un dispositif de dégazage. Les différents modules sont reliés par des
canalisations courtes et de très faible diamètre interne (0,1 mm).
a. Un réservoir de solvant (éluant)

Le plus souvent ce réservoir est une bouteille en verre dans laquelle plonge un tube
avec une extrémité filtrante en téflon qui contient la phase mobile en quantité suffisante.
Pour l’éluant utilisé doit nécessairement :
✓ Maintenir la stabilité de la colonne,
✓ Etre compatible avec le détecteur,
✓ Solubiliser suffisamment l’échantillon et ne pas gêner sa récupération. (40)

28
 b. Dispositif de dégazage

Durant le pompage, dans la chambre de mélange ou dans la colonne elle-même, si les solvants
ne sont pas dégazés, l’air dissout dans le liquide soumis à de forte pression, forme des bulles à
l’intérieur du système, c’est là un inconvénient majeur pour le fonctionnement de la plupart des
détecteurs en particulier ceux qui utilisent des propriétés optiques. En règle générale, plus le liquide
est polaire, plus la tendance de l’air à se dissoudre est forte. Il convient donc d’éliminer au maximum
l’azote et l’oxygène qui peuvent être présents. Le dégazage de la phase mobile se fait par barbotage
d’hélium, par ultrasons ou par un dégazeur. (40)

c. La pompe

La pompe d’un chromatographe a pour rôle d’assurer l’écoulement de la phase mobile dans la
colonne.
Elle permet de travailler:

✓ En mode isocratique , c'est-à-dire avec 100% d'un même éluant tout au long de
l'analyse.
✓ En mode gradient, c'est-à-dire avec une variation de la concentration des constituants
du mélange d'éluant.

FIGURE 7 : Représentation schématique d’un système de pompage. (40)

Actuellement les paramètres d'une pompe sont :

✓ Débit : 0,01 à 10 mL/min
✓ Stabilité < 1% (<0,2% pour des chromatographies d'exclusion diffusion)
✓ Pression maximale > 350 bars

29
 d. Injecteur

Le type d'injecteur le plus couramment utilisé comporte une vanne à boucle d'échantillonnage
d'une capacité fixe (10, 20, 50 µL…). Cette boucle permet d'introduire l'échantillon sans modifier
la pression dans la colonne.

FIGURE 8 : injecteur à boucle. (40)

e. Colonne

Les colonnes CLHP sont généralement courtes et droites en acier inoxydable se

caractérise par:
- Nature en inox;
- Diamètre interne de  4 mm;
- Longueur = 5, 10, 15, ou 25 cm;
- Remplissage (en silice, silice greffée ou particules polymériques) a une
granulométrie de 3, 5, ou 10 µm .
- Le débit de la phase mobile ne peut dépasser quelques mL/min.
Ces colonnes ont l’avantage de la rapidité de l’analyse, consomment
moins de solvant et conduisent à une meilleure résolution de l’analyse. .(40)

f. Détecteur

Ces systèmes de détection sont des éléments indispensables au système chromatographique

CLHP. Ils permettent de suivre en continu la séparation et de mesurer la concentration instantanée
des différents solutés d’un mélange à analyser.

30
 Dans notre cas la HPLC est équipée d’un détecteur Photomètre UV (Ultra-violet). (40)

Photomètre UV

Le détecteur UV mesure l’absorption de la lumière par le produit à la sortie de la colonne et

opère à longueur d’onde constante, celle-ci ayant été fixée par l’operateur.
Pour que ce type de détecteur soit utilisable, il faut que:

✓ Le produit à détecter absorbe la lumière à une longueur d’onde accessible à

l’appareil, et que son coefficient d’absorption soit suffisamment grand.

✓ La phase mobile n’absorbe pas la lumière à la longueur d’onde choisie par

l’opérateur.

✓ Ce détecteur détecte seulement les changements dans le soluté donc on peut

l’utiliser dans l’analyse par gradient d’élution.

✓ Le détecteur est facile à opérer et ne détériore pas l’échantillon. (40)

g. La phase stationnaire et la phase mobile

i. La phase stationnaire

On distingue deux types de phase stationnaire :

La phase normale :

La phase normale est constituée de gel de silice. Ce matériau est très polaire. Il faut donc
utiliser un éluant apolaire. Ainsi lors de l'injection d'une solution, les produits polaires sont retenus
dans la colonne, contrairement aux produits apolaire qui sortent en tête.
L'inconvénient d'une telle phase, c'est une détérioration rapide au cours du temps du gel de
silice, ce qui entraîne un manque de reproductibilité des séparations.
La phase inverse :

La phase inverse est majoritairement composée de silice greffée par des chaînes linéaires de 8
ou 18 atomes de carbones (C8 et C18). Cette phase est apolaire et nécessite donc un éluant polaire
(ACN, MeOH, H2O). Dans ce cas, ce sont les composés polaires qui seront élués en premier.

31
 Contrairement à une phase normale, il n'y a pas d'évolution de la phase stationnaire au cours du
temps, et la qualité de la séparation est donc maintenue constante.

ii. La phase mobile

L'interaction plus ou moins forte entre la phase mobile et la phase stationnaire

normale ou à polarité inversée se répercute sur les temps de rétention des solutés.
La polarité de la phase stationnaire permet de distinguer deux situations de principe :
Si la phase stationnaire est polaire :

On utilisera une phase mobile peu polaire la chromatographie est dite en phase normale.
Si la phase stationnaire est très peu polaire :

On choisira une phase mobile polaire (le plus souvent des mélanges de méthanol ou
d'acétonitrile avec de l'eau), c'est la chromatographie en phase inverse.

III. METHODES D’EXTRACTION ET D’ANALYSE

1. Matériels de travail

a. Petits matériels

Le matériel utiliser dans la préparation des échantillons est le suivant :

- Spatule, - Filtre à seringue,

- Tubes en verre, - Ampoule à décanté,
- Bucher, - Eprouvette graduée,
- Micropipette de 100 à 1000 µL, - Tube en plastique,
- Micropipette de 2 à 20 µL, - Tube à centrifuger en verre,
- Seringue, - Pipete pasteur.
b. Appareillages

Les différents appareils utilisés dans la préparation et l’analyse des échantillons sont :
- Balance analytique, - Vortex,
- Agitateur magnétique, - PH- mètre,
- Centrifugeuse, - Conductimètre,
- Rota vapeur,
- Système HPLC équipé d'une colonne Pecosphère-3C C18 et d'un détecteur UV
à barrette de diodes.

32
 c. Réactifs

Les différents réactifs et solvants utilisés dans l’analyse sont :

- Le pesticide standard : le carbofurane , P = 99,8%
- Acétonitrile (qualité HPLC pour la colonne C18)
- Eau (qualité HPLC pour la colonne C18)
- MgSO4
- NaCl
- Chitosane cristallisé

2. Méthodes d’échantillonnage

a. Collecte des échantillons de l’eau du puits

Les prélèvements d’eau au niveau d’un puits ont été réalisés à l’aide d’un
seau attaché au bout d’une corde et qui est remonté à l’aide d’une poulie. Ensuite un flacon de
prélèvement en plastique munis d’un couvercle à vis d’une capacité de
500 mL ont été ensuite remplis, et transportés au laboratoire.

b. Collecte des échantillons d’eau d’extrémité :

L’eau d’extrémité est prélevée à travers la quantité d’eaux restantes, qui s’accumulent à la
surface de la terre après le processus d’arrosage.

c. Collecte des échantillons de sol

Pour faire le prélèvement, un trou de la profondeur de la bèche a été creusé avec un espace
suffisant pour retirer la terre qu’elle contient. Les échantillons élémentaires ont été prélevés après tri
des pierres et des matières végétales et un échantillon final de laboratoire de 200 g a été prélevé.

3. Traitement des échantillons

a. L’eau du puits

L’eau prélever est analysé directement après une simple filtration par un filtre seringue.

33
 b. l’eau de surface

La méthode consiste à extraire le carbofurane qui se trouve dans l’eau par un solvant approprié
et non missible à l’eau.
Il consiste à transférer 10 mL d’échantillon dans une ampoule à décanter dans
laquelle on ajoute 10 mL de solvant extractif constitué de l’acetonitrile. Le tout est agité
vigoureusement en chassant périodiquement l’air et on laisse décanter pendant quelque minute au
bout desquelles la phase organique est collectée dans un bucher. L’opération est répétée 3 fois avec
10 mL de solvant organique et les extraits recueillis dans le même bucher que précédemment. La
solution est analysée directement par CLHP-UV.
c. Le sol

L’Extraction du carbofurane a partir du sol est effectuer selon une version de la méthode de
QuEChERS . Dans cette méthode le carbofurane est extraits dans une première étape à l'aide
d’acétonitrile saturée avec sulfate de magnésium et chlorure de sodium suivi d'une étape d’extraction
solide liquide avec des supports Chitosane. L’analyse ensuite est effectuée à l'aide d’une chaîne
HPLC alliance.
Les étapes d’extraction et de purification sont présentées dans le diagramme schématique ci-
dessous :

Ajouter 10 ml ACN au tube 1 , 4g de MgSO4 et 2 g de NaCl

Ajouter 10 g du sol

Agiter 5 minutes et centrifuger à 4000 tr /min pendant 10

minutes
Transférer 10 ml d’aliquote au tube 2 + 450mg anhydre
MgSO4+100 mg Chitosane cristallisé puis mélanger 30
secondes

Centrifuger le tube pendant 5 minutes à 4000 tr/min

Transférer 2ml de surnageant au tube centrifuge en verre

Evaporer à sec à moins de 40°C

Ajouter à l’extrait sec, 500μL d'acétonitrile

Vortex pendant environ 5 seconde

Filtrer sur filtre seringue puis analyse par HPLC-UV

FIGURE 9 : Diagramme schématique des étapes de préparation du sol.

34
 Chapitre III

VALIDATION DE
LA METHODE
D’ANALYSE
ET
DOSAGE DES
ECHANTILLONS

35
 I. Introduction
Pour choisir une méthode d’analyse, de nombreux critères devront être pris en compte, par
exemple le nombre et la cadence des analyses qu'on va effectuer, la capacité d'investissement du
laboratoire et les moyens humains dont il dispose, mais le but essentiel sera toujours de produire au
moindre coût une donnée que personne ne puisse contester : un résultat d'analyse validé, appelé
donnée analytique. Atteindre cet objectif nécessite, d'une part, de s'assurer de l'exactitude de la
méthode choisie, d'autre part, de réduire le nombre de répétitions des analyses destinées à produire
une même donnée.

II. Contexte de la validation

1. Définitions

la validation est le processus qui consiste à évaluer une méthode, un instrument ou toute autre
pièce de l’équipement, un matériel étalon, etc..., pour déterminer s'il est approprié pour le travail en
cours et s'il répond aux espérances et aux besoins des analystes.
Selon la norme NF EN ISO / CEI 17025, il s’agit de la « confirmation par examen et l’apport
de preuves objectives du fait que les exigences particulières en vue d’une utilisation prévue
déterminée sont remplies ». (35)
En fait, selon la norme U47-600-1, cette confirmation « consiste à comparer les valeurs des
critères de performance déterminées au cours de l’étude de caractérisation de la méthode à celles
attendues ou assignées au préalable (limites d’acceptabilité, objectifs à atteindre), puis à déclarer la
méthode d’analyse valide ou non valide ».(36)

2. Critères

a. Linéarité

La linéarité d’une méthode est sa capacité à l'intérieur d'un certain intervalle, à fournir une
valeur d’information ou des résultats proportionnels à la quantité en analyte à doser dans le matériau
d’essai.

36
 b. Limites de détection et de quantification

i. La limite de détection LD

Est la concentration minimale de l'analyte qui peut être détectée avec une certitude
acceptable, quoique non quantifiable avec la précision acceptable. Des définitions diverses sont
utilisées, mais, c'est souvent la quantité d'analyte qui produit une réponse 3 fois plus grande que le
niveau du bruit de fond du système de détection.

LDM = 3 × S
LDM : limite de détection de la méthode
S : écart type de réplica

ii. La limite de quantification LQ

Est la concentration ou la masse minimale de l'analyte qui peut être évaluée quantitativement
avec une précision acceptable. Elle Devrait s'appliquer à la méthode analytique complète. Bien que
différemment définie, la limite de quantification doit avoir une valeur plus grande que celle de la
limite de détection c’est souvent la quantité d’analyte qui produit une réponse 10 fois plus grande que
le bruit de fond.

LQM = 10 × S
LQM : limite de détection de la méthode .
S : écart type .

c. Le ratio de conformité

Le calcul du ratio de conformité nous permet de déterminer la validité d’une démarche

pour l’établissement d’une limite de détection.
Il se calcule selon l’équation suivante :

X̅ X̅
𝑅= =
𝐿𝐷𝑀 𝑐𝑎𝑙𝑐𝑢𝑙é𝑒 3 𝑆
R : ratio de conformité
X̅ : moyenne arithmétique des n réplica .
S : écart type des n réplica .
LDM : limite de détection de la méthode

37
 4 < R < 10 R<4 R >10

La concentration utilisée est Ce ratio indique que la limite réelle Ce ratio indique que la limite
adéquate de détection de la méthode est plus réelle de détection de la méthode
élevée que la limite de détection est plus basse que la
estimée lors des essais. limite de détection estimée lors
des essais.

TABLEAU 5 : Interprétation de la valeur du ratio de conformité (R).

d. Fidélité

A un niveau donné, c'est l'étroitesse de l'accord entre les résultats obtenus en appliquant le
procédé expérimental à plusieurs reprises dans conditions déterminées.
Selon les conditions d'exécution de l’essai, cette caractéristique s'exprime sous forme de
réplicapilité, de répétabilité ou de reproductibilité.
i. Réplicapilité

La réplicabilité à un niveau donné correspond à l’étroitesse de l’accord entre les

résultats individuels successifs obtenus sur le même échantillon soumis à l’essai dans le même
laboratoire et dans les conditions suivantes : même analyste, même appareil, même jour.
La valeur sera déterminée à partir de l’équation suivante :

t(0,975 ;n-1) × s1
√n
t(0,975 ;n-1) : constante dépendant du degré de
concentration désiré
n : le nombre de mesure effectuées
s1 : écart de la réplicabilité

ii. Répétabilité

La répétabilité à un niveau donné correspond à l’étroitesse de l’accord entre les

résultats individuels obtenus sur le même échantillon soumis à l’essai dans le même laboratoire
et dont au moins l’un des éléments suivants est différent : l’analyste, l’appareil, le jour.

La valeur sera déterminée à partir de l’équation suivante :

t(0,975 ;n-1) × s2
√n
t(0,975 ;n-1) : constante dépendant du degré de
concentration désiré
n : le nombre de mesure effectuées
s2 : écart de la répétabilité

38
 iii. Reproductibilité

La reproductibilité à un niveau donné correspond à l’étroitesse de l’accord entre les

résultats individuels obtenus sur le même échantillon soumis à l’essai dans des laboratoires
différents et dans les conditions suivantes : analyste différent, appareil différent, jour différent ou
même jour.

La valeur sera déterminée à partir de l’équation suivante :

t(0,975 ;n-1) × s3
√n
t(0,975 ;n-1) : constante dépendant du degré de
concentration désiré
n : le nombre de mesure effectuées
s3 : écart de la reproductibilité

e. Justesse

La justesse à un niveau donné correspond à l’étroitesse de l’accord entre la valeur

certifiée par un organisme reconnu et le résultat moyen qui serait obtenu en appliquant dix fois
le procédé expérimental (n = 10 replica). La justesse se mesure, à un niveau donné de
concentration, dans la zone quantifiable pratique de la méthode.

Elle s’exprime par l’erreur relative.

𝐽𝑢𝑠𝑡𝑒𝑠𝑠𝑒 (%) = 100 – |𝐸𝑟𝑟𝑒𝑢𝑟 𝑟𝑒𝑙𝑎𝑡𝑖𝑣𝑒 (%)|

V0 -Vs
(
𝐸𝑟𝑟𝑒𝑢𝑟 𝑟𝑒𝑙𝑎𝑡𝑖𝑣𝑒 % =) × 100
Vs
VO : moyenne des valeurs observées
Vs : valeur suggérée

39
III. Résultats et discussions
A. Conditions d’analyses

1. Principe de la méthode

L’objectif de ce travail est la validation d’une méthode de dosage du carbofurane par HPLC
équipée d’un détecteur UV à polarité de phases inversée.

2. Produits chimiques et réactifs

Le pesticide standard : Carbofurane est de pureté supérieure à 99 %.
Acetonitrile SIGMA ALDIRITCH, grade HPLC.
Eau SIGMA ALDIRITCH, grade HPLC.

3. Instrumentation et conditions chromatographiques

a. Appareillage

L’instrument utilisé est un appareil HPLC de type Ultimate 3000 de marque Thermo Fisher
Scientifique, fonctionne équipé d'un injecteur à boucle d’échantillonnage d’injection de 20 µL, d’un
four (25 à 90 °C), d’une pompe d’injection (4 à 400 bar) et d’un détecteur UV à barrette de diodes
(DAD) de longueurs d’ondes 190 à 400 nm . Toutes les analyses ont été effectuées à température
ambiante (25°C) dans le mode isocratique d’élution.
La séparation est réalisée en utilisant une colonne de type Sunfire C18 de marque Water, de
250 millimètres et 4,6 millimètres de diamètre avec une taille des billes de 5 micromètres.

b. Condition d’analyse

Les paramètres optimisés dans l’analyse sont les suivants :

Composition de la phase Débit Longueur d’onde Temps totale

Pesticide mobile (mL/min) (nm) d’analyse
ACN % Eau % (min)

Carbofurane 80 20 1,4 194 5

TABLEAU 6 : les conditions analytiques pour la détection du carbofurane par HPLC-UV.

40
 4. Préparation des solutions standards du carbofurane

Tout d’abord nous avons procédé à la préparation d’une solution mère par dissolution d’une
quantité exactement pesée de 0,84 mg du carbofurane dans 1 ml d’acetonitrile pour préparer de
concentration de 0,84 mg/ml.
Ensuite on a préparé des solutions intermédiaires à différentes concentrations :
-1 -1 -2 -2 -3 –3
(5.10 mg/ ml, 10 mg/ ml, 5.10 mg/ ml, 10 mg/ ml, 5.10 mg/ ml et 10 mg/ ml) diluer
dans l’acétonitrile. Chaque solution à été injecter une seule fois pour déterminer le domaine de
linéarité.
Ces solutions ont été utilisées comme une gamme d’étalonnage

5. Validation de la méthode

Le procédé a été validé par la détermination de la linéarité, limites de détection (LD), de

quantification (LQ), le ratio de conformité, fidélité et justesse.

B. Validation de la méthode d’analyse

1. Linéarité
La linéarité instrumentale a été déterminée par l’injection de la solution standard analytique à 6
niveaux de concentration allant de 0 ,5 mg /ml à 0,001mg/ml. (ANNEXE II: A)
La figure 1 représente les courbes de régression correspondant aux carbofurane dans la solution
standard pour tout le domaine d’étude (à droite) et pour le domaine restreint (à gauche).

FIGURE 10 : Linéarité obtenue pour la solution standard du carbofurane pour tout le

domaine d’étude (à droite) et pour le domaine restreint (à gauche).

41
 La courbe d'étalonnage du carbofurane est nettement non linéaire à des concentrations
supérieures à 0,01 mg/ml.
Or, la bonne linéarité n’est observée que dans un intervalle entre 0,05 à 0,001 mg /ml (4
concentrations différentes ont été utilisées).
L'équation de la droite de régression est de la forme : y = a.x +b (x:concentration du
carbofurane en mg/mL et y: aire du pic).
Les paramètres étudiés La solution standard du carbofurane

Ordonnée à l’origine (b) 0,620

Pente de la droite (a) 2215,5

Coefficient de corrélation (R2) > 0,995

TABLEAU 7 : Paramètres de la linéarité.

Le coefficients de corrélations de la droite de régression correspondant aux carbofurane dans

la solution standard est supérieurs à 0,995.
On peut donc conclure, que la méthode de dosage du carbofurane par HPLC-UV est linéaire
dans cet intervalle.
2. La limite de détection, de quantification et le ratio de conformité R
Durant notre étude, nous avons injecté dix fois une solutions de concentration de 5.10-3
mg/ml par chromatographie liquide à haute performance. Des chromatogrammes enregistrés, on a
relevé les aires des pics de chacune des injections puis on a calculé la concentration de chaque

injection par la droite de régression : y = a.x + b (ANNEXE II : B).

FIGURE 11 : Le spectre du carbofurane standard détecter par HPLC-UV à une

concentration de 5.10-3 mg/ml.

42
 Moyennant les formules mentionnées des différents paramètres calculés eu les valeurs
regroupées dans le tableau suivant :

Moyenne Ecart type LDM Ratio de conformité LQM

0,005 0,0002 0,0005 9,8205 0,0017

Selon les résultats obtenus, le ratio de conformité est compris entre 4 < R=9,8205 < 10 ce qui
indique que la concentration de la solution utilisée est adéquate.
On peut donc conclure, puisque le ratio de conformité est acceptable, la limite de détection ainsi
établie est acceptée.

3. Fidélité

a. Réplicabilité

Afin d’évaluer la réplicabilité, nous avons effectués 10 injection sur la dernière

concentration détectable par la méthode d’analyse, préparés par même operateur, dans le même
laboratoire, au même jour, avec même appareil
Les résultats obtenus sont regroupées dans le tableau suivant :

Moyenne Ecart type Réplicabilité

0,0051 0,0002 Réplica(-) : 0,00502 ; Réplica(+) : 0,00526

Les dix essaies effectuer donne des résultats compris entre 0,00502 mg /ml ˂ [C] ˂ 0,00526
mg/ml.

On conclure selon les résultats obtenus que la méthode d’analyse est réplicable.

43
 b. Répitabilité

La répétabilité du carbofurane est évaluée à l’aide de l’injection de trois solutions de même

concentration (5.10-3 mg/ml) préparés par trois operateurs différents, dans le même laboratoire, au
même jour, avec même appareil.
Les résultats sont présentés dans le tableau suivant :

Résultats analytique
Opérateurs Concentration Aire de pic 𝐲−𝐛
𝒙=
𝒂

A 0,005 11,577 0,00494534

B 0,005 11,819 0,00505466
C 0,005 11,657 0,00498144

Les valeurs obtenues sont homogènes ce qui montrent une précision convenable pour la
méthode analytique.

c. Reproductibilité

De la même manière que pour l’évaluation de la répétabilité, nous avons effectués

l’injection de trois solutions de même concentration (5.10-3 mg/ml), préparés par des operateurs
différents, analysés dans trois laboratoires différents.
Les résultats sont les suivants :

Résultats analytique
Laboratoires Concentration Aire de pic 𝐲−𝐛
𝒙=
𝒂

A 0,005 11,577 0,00494534

B 0,005 11,476 0,00490002
C 0,005 11,707 0,00500406

On observe que les résultats obtenus par les différents laboratoires sont semblables
et homogènes.
Donc, la fidélité de la méthode est jugée acceptable.

44
 4. Justesse

Pour calculer la justesse nous avons effectuer dans la même concentration détecter par la
méthode d’analyse ([5.10-3 mg/ml]) dix injections , dont les valeurs suggérées sont fournies par
la HPLC-UV .

Les résultats obtenus sont regroupés dans le tableau ci-dessous :

[ ] réelle de Moyenne Erreur relative % Justesse

l'échantillon

5*10-3

0,005 0,0051 2,9 99,97

Les résultats du test de justesse montrent que l’erreur relative ne dépasser pas une valeur
précisée (généralement autour de 10 %). On l’estime par la différence entre la moyenne d’un
nombre fini de valeurs mesurées et la valeur de référence est très faible.
On conclure que la méthode est juste.

C. Dosage des résidus du carbofurane

1. Objectif
Application de la méthode validée pour le dosage des résidus du carbofurane dans l’eau du
puits, l’eau d’extrémité et le sol, échantillonnés à partir de notre zone d’étude.

2. Propriétés physico-chimiques

Echantillons Température (°C) PH Conductivité (us/cm)

L’eau du puits 2.35 1863

L’eau d’extrémité 25 7,40 855

Le sol 2 ,61 1243

TABLEAU 8 : les propriétés physico-chimiques des échantillons.

45
 3. Dosage du carbofurane dans l’eau du puits

Apres filtration d’une quantité d’eau du puits, 1ml d’eau est injecter directement dans la
HPLC-UV dans les mêmes conditions optimisées par la méthode validé précédemment.
Le chromatogramme enregistrer est le suivant :

FIGURE 12 : Le spectre du carbofurane détecter dans l’eau du puits par HPLC-UV .

Un spectre clair et bien séparer est obtenu après l’injection de l’échantillon dans un temps de
rétention de tr = 2,5 min. Il s’agit d’un signale du carbofurane (en comparaison avec l’étude du
carbofurane standard précédente).

La quantification du carbufurane est calculée selon l'équation de la droite de régression

validé par la méthode optimisée (y = a*x +b (x: concentration du carbofurane en mg/mL et y: aire
du pic)).

En conclusion, la concentration doser dans l’eau du puits est de [CP]= 0,24 g/l.

46
 4. Dosage du carbofurane dans l’eau d’extrémités

Après l’extraction du carbofurane par la méthode d’extraction déjà mentionner dans le

chapitre II , 1ml de la solution obtenus est injectée
Le chromatogramme enregistrer est le suivant :

FIGURE 13 : Le spectre du carbofurane détecter dans l’eau d’extrémités par HPLC-UV.

Un spectre fine et clair est enregistré dans un temps de rétention de tr = 2,5 min. Il s’agit du
carbofurane .
On observe l’apparition d’un autre signale avant le spectre de notre pesticide. Il peut être
l’un de ses métabolites qui sont apparus au cours du processus d’extraction.
En bref, la concertation du carbofurane dans l’eau d’extrémités évaluée par l’équation de la
droite de régression est de [CE]= 0,027 g/l.

47
 5. Dosage du carbofurane dans le sol

Le protocole mis en œuvre pour l’extraction du carbofurane à partir du sol est celui d’une
version de la méthode de QuEChERS figurant sur la partie II.
L’extrait final obtenu par cette méthode est directement utilisé pour l’analyse.
Le chromatogramme détecter est ci-dessous :

FIGURE 14 : Le spectre du carbofurane détecter dans l’eau d’extrémités par HPLC-UV.

L’analyse de l’extrait du sol par HPLC est montré la présence du carbofurane à un temps de
rétention de tr = 2,5 min (l’autre spectre est due à la dégradation du carbofurane dans le sol).
En conclusion, la concentration enregistré du carbofurane dans le sol selon l’équation de la
droite de régression est de [CS]= 0,084 g/l.

48
 CONCLUSION GENERALE

Notre travail a consisté à l’analyse et à la validation d’une méthode de dosage permettant la

détection des résidus d’un pesticide connus sous le nom du carbofurane couramment utilisés en
agriculture pour le traitement des cultures des fruits par Chromatographie Liquide Haute
Performance à polarité de phases inversée couplée à un détecteur à barrette de diodes.
Premièrement,

Nous avons déterminée les paramètres optimaux permettant l’analyse du carbofurane par
HPLC/DAD avec une colonne de type Sunfire C18 de marque Water (4,6*250 mm ; 5µm), à =
194 nm, une phase mobile constituée d’un mélange binaire Acétonitrile-Eau (80:20 ; v/v), à débit
1,4 mL min-1 et une température de 25°C.

Nous avons, par ailleurs, validé la méthode de dosage du carbofurane. Ainsi, nous avons pu
montrer que la méthode de dosage adoptée est conforme, exacte, fidèle et linéaire entre 0,05 mg
mL-1 et 0,001 mg mL-1. La limite de détection et de quantification du carbofurane sont
respectivement de 0,0005 mg mL-1 et 0,0017 mg mL-1.
En conclusion, la méthode optimisée est : rapide, facile à mettre en œuvre, non couteuse,
linéaire , exacte , répétable et reproductible.
Deuxièmement,

Cette méthode validée est appliquée pour le dosage des résidus du carbofurane dans l’eau du
puits , l’eau d’extrémité et le sol , échantillonner à partir d’une zone agricole intégrée dans la région
de rabat-sale-kenitra .
la concentration déterminer du carbofurane dans l’eau du puits , l’eau d’extrémité et le
sol par chromatographie liquide à haute performance sont respectivement de 240mg/kg ,
27mg/kg
et 84 mg /kg.
En conclusion, d’après les limites de tolérance de résidus fixées par la Direction des
aliments du Ministre de l’Agriculture du Développement Rural et des Pèches Maritimes, l’apport
alimentaire maximal de carbofurane serait, en théorie, de 0,1 mg/Kg, qui est une valeur beaucoup
plus faible par rapport à l’apport réel dosé au cours de notre étude.

49
 Bbibliographie :
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Jijel Faculté des Sciences Exactes et de l’Informatique Département de Chimie , pp : 30-35 .

51
ANNEXE I

52
 ANNEXE II
A. Les résultats analytiques de la solution standards du carbofurane à six niveaux de
concentration :

CONCENTRATION AIRE DE PIC

mg/ml mAU

0,5 425,5276
0,1 208,0667
0,05 111,351
0,01 24,4653
0,005 12,0296
0,001 2,7802

B. Les résultats analytiques de la concentration [C]=5.10-3 mg/ml :

AIRE DE PIC RESULTATS ANALYTIQUES

CONCENTRATION
mAU mg/ml
mg/ml
C5.10-3
11,9263 0,005103002
-3
C5.10
12,1686 0,005212367
-3
C5.10
11,7953 0,005043873
-3
C5.10
11,8082 0,005049695
-3
C5.10
11,7071 0,005004062
-3
C5.10
11,4766 0,004900023
-3
C5.10
12,6153 0,005413992
-3
C5.10
11,7596 0,005027759
-3
C5.10
12,5018 0,005362762
C5.10-3 12,4366 0,005333333

53
 Mémoire de fin d’études pour l’obtention du Diplôme de Master Sciences et Techniques

Nom et prénom: IDRISSI FIRDAOUS

Année Universitaire : 2018/2019
Titre: Optimisation et validation d’une méthode de dosage du carbofurane dans des échantillons de
l’eau et du sol par chromatographie liquide haute performance .

Résumé
L'objet de ce travail est la validation d’une méthode de dosage du carbofurane par HPLC/DAD
à polarité de phases inversée.
L’analyse chromatographique a été réalisée sur une colonne de type Sunfire C18 de marque
Water (250 mm * 4,6 mm et une granulométrie de 5 μm) à 25 °C à 194 nm avec une phase mobile
constituée d'Acétonitrile-Eau (80:20, v/v) et à débit de 1,4 mL min-1.
L’intervalle de linéarité est compris entre 0,05 à 0,001 mg mL-1. Les coefficients de corrélation
(R2) des équations de régression sont supérieurs à 0,995. La précision de la méthode est démontrée par
la comparaison avec d’autre laboratoire à différents manipulateurs.
Selon les résultats de la validation, la méthode proposée est simple, conforme, linéaire, exacte
et peut être appliquée à l'analyse du carbofurane à différentes matrices.

Mots clés : Carbofurane, carbamate, pesticide, insecticide.

Abstract:
The objective of the current study is to develop and validate a reverse-phase HPLC for the
determination of carbofuran.
Chromatographic analysis was performed on a column of type Sunfire C18 de marque Water
(250 mm * 4.6mm grain size of 5 μm) at 25 °C using a diode array detector (DAD) at 194 nm and a
mobile phase was composed of acetonitrile-Water (80:20, v/v) delivered at flow 1,4 mL min-1.
The method is linear in a concentration range from 0,05 to 0,001 mg mL-1. The correlation
coefficients (R2) regression equations are greater than 0.995. The precision of the method is
demonstrated by comparison with other laboratories to different manipulator.

The results of the validation, the proposed method is simple, consistent, linear, accurate and could be
applied to the analysis of carbofurane at different matrices.

Key words: Carbofuran, carbamate , pesticide, insecticide.

Faculté des Sciences et Techniques - Fès. B.P. 2202 – Route d’Imouzzer. FES.  212 (0) 5 35 60 29 53 Fax : 212 (0) 5 35 60 82 14