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    POS Ag HIV

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    Aurelien Juvénal
    Ce document décrit la procédure pour réaliser un test de dépistage de l'anticorps VIH. Il explique le principe du test ELISA, les étapes du protocole incluant la préparation des réactifs, l'incubation et la lecture des résultats. Le document liste également le matériel nécessaire pour effectuer le test.

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    PROCÉDURE DE REALISATION Pages :

    CERIMED ANALYSES DE L’Ag HIV Applicable le :


    BIOMEDICALES Code : P001 Version : 1 Sign val :

    Rédigé par : Vérifié par : Validé par :


    Nom JOFACK BERTHOL MBEP Christian Dr ATEBA Ghislaine

    Date
    Signatures

    1. OBJECTIFS ET PORTÉE
    a. Objectif

    La réalisation du test de l’anticorps HIV permet de déterminer si le système immunitaire d’un patient
    développe les anticorps spécifiques aux antigènes du virus de l’hépatite
    b. Personnes concernées
    Personnel de l’unité des ELISA
    2. Domaine d’application

    Unité des ELISA


    3. RÉFÉRENCES

    Fiche d’utilisation du réactif antigène HIV (HUMAN)


    4. TACHES, AUTORISATIONS ET RESPONSABILITÉS

    Tâches Personnes autorisées Responsables

    Réalisation du test Personnels de l’unité des ELISA JOFACK BERTHOL

    Validation du test Personnels de l’unité des ELISA MBEP Christian


    et le responsable technique
    PROCÉDURE DE REALISATION Pages :
    CERIMED ANALYSES DE L’Ag HIV Applicable le :
    BIOMEDICALES Code : P001 Version : 1 Sign val :

    5. PRINCIPE
    Le principe du dosage de l’antigène HIV repose sur l’ELISA sandwich double détection d’antigène et
    d’anticorps. Des antigènes recombinants spécifiques au VIH 1.2 ainsi que les anticorps monoclonaux dirigé
    contre l’Ag p24 du VIH sont fixés dans les puits de microtitration ; au cours de l’incubation les anticorps
    spécifiques et antigènes présent dans l’échantillon se fixent aux antigènes immobilisés ainsi qu’au conjugué
    1 formant des complexes doubles antigène-anticorps ; ces complexes sont marqués en ajoutant le conjugué 2
    après le cycle de lavage pour l’élimination des composants non fixés, le TMB est ajouté une coloration bleu
    se forme et vire au jaune à l’ajout du stop . L’intensité de la coloration est proportionnelle à la concentration
    d’Ac-VIH/Ag-VIH dans l’échantillon.
    6. PROTOCOL DE REALISATION DU TEST

     PREPARATION DE LA SOLUTION DE LAVAGE


    Elle se fait en diluant la solution Wash buffer avec de l’eau distillée fraichement préparée : 1+24
    NB : Ramener les réactifs à température ambiante au moins 30 min avant utilisation

     MODE OPERATOIRE

    - Ajouter 30ul du WCON-1 dilué au 10+100 dans les puits du control négatif, positif et
    échantillon
    - Ajouter 70ul du CN, CP, et l’échantillon dans les puits ; recouvrir d’un film protecteur
    adhésif et incuber 60 min à 37 ͦ c
    - Diluer WCON-2 au 10+100 et ajouter 50ul de la solution diluée dans les puits recouvrir d’un
    film protecteur adhésif et incuber 30 min à 37 ͦ c
    - Laver 04 fois avec la solution de lavage (régler le combis Wash à 400ul de solution par
    puits)
    - Diluer le SUBSTRAT au 10+100 et ajouter 100ul de la solution diluée dans les puits recouvrir
    d’un film protecteur adhésif et incuber 20 min à 18-24 ͦ c à l’abri de la lumière
    - Ajouter 150ul du Stop
    - Lire à 450nm de densité optique dans les 3-4 min qui suivent l’ajout du stop.
    Si les puits sont doublés ou triplé toujours faire la moyenne des DO pour avoir la DO finale.
    Le test est valide si : NC ≤ 0.200, CP1 et CP2 ≥ 0.800

    Interprétation des résultats qualitatifs


    Valeur seuil (VS) = moyenne CN + 0 ,400

    - Si DO patient < VS → NEGATIVE

    - Si DO patient > VS → POSITIVE


    PROCÉDURE DE REALISATION Pages :
    CERIMED ANALYSES DE L’Ag HIV Applicable le :
    BIOMEDICALES Code : P001 Version : 1 Sign val :

    7. MATERIELS UTILISES

     Micropipettes
     Plaque pour les puits
     Puits pour le test
     Réactif
     Gants
     Embouts
     Chronomètre
     Fiche de paillasse
     Combi Wash
     Huma Reader

    PROCÉDURE DE REALISATION DE Pages :
    CERIMED ANALYSES L’Ag HIV Applicable le :
    BIOMEDICALES Code : P001 Version : 1

    ATTESTATION DE LECTURE
    Je reconnais avoir lu et compris la Procédure de Rédaction des Procédures

    Ref : CERIMED SOP 001, version 1 11

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