Abc-301681-26300-Influence de La Nature de Lanticoagulant Sur Le Dosage Plasmatique de Quinze Parametres Biochimiques-G
Abc-301681-26300-Influence de La Nature de Lanticoagulant Sur Le Dosage Plasmatique de Quinze Parametres Biochimiques-G
Abc-301681-26300-Influence de La Nature de Lanticoagulant Sur Le Dosage Plasmatique de Quinze Parametres Biochimiques-G
Émilie Sacchetto Résumé. L’étude de l’influence de l’anticoagulant utilisé dans les tubes de
Damien Ali prélèvement pour l’obtention de plasma a été réalisée pour quinze paramètres
Erwan Dumontet biochimiques dosés sur automate Cobas 6000 ce (Roche Diagnostics). Pour
chacun des paramètres testés l’ensemble du domaine de mesure a été étudié. La
Didier Le Carrer
comparaison des résultats des dosages obtenus sur plasma obtenu par prélève-
Jean-Luc Orsonneau ment sanguin sur héparinate de lithium et sur EDTA incluent : la corrélation, les
Odile Delaroche limites d’acceptabilité en regard des normes de suivi et normes d’interprétation
Edith Bigot-Corbel de la droite de régression définis par la SFBC et l’analyse de Bland-Altman.
Laboratoire de biochimie, Centre Les paramètres étudiés ont été classés en trois catégories. Les paramètres pour
hospitalier universitaire de Nantes, lesquels le dosage n’est pas influencé par la nature de l’anticoagulant uti-
Hôpital Guillaume et René Laënnec,
Saint-Herblain, France
lisé : apolipoprotéine A1, apolipoprotéine B, alanine amino-transférase, créatine
<[email protected]> kinase, créatinine, cholestérol total, HDL-cholestérol, lipase, NT-Pro BNP, tro-
ponine T et urée. Les paramètres pour lesquels les résultats sont sous-estimés
sur plasma EDTA incluant ceux pour lesquels l’impact est modéré et pour
lesquels les normes d’interprétation ne sont pas modifiées : triglycérides, et
ceux pour lesquels les normes d’interprétation sont modifiées sur un ou plu-
sieurs niveaux : aspartate amino transférase et lactate déshydrogénase. Enfin,
les paramètres dont le dosage n’est pas réalisable sur plasma EDTA comme la
phosphatase alcaline.
Mots clés : héparinate de lithium, EDTA, comparaison, normes
d’interprétation, normes de suivi
Abstract. The study of the influence of the anticoagulant used in blood collec-
tion tubes to obtain plasma was performed for fifteen biochemical parameters
measured with automated Cobas 6000 (Roche Diagnostics). For each para-
meter tested the entire measurement domain was studied. The comparison of
results obtained on plasma blood sample obtained by lithium heparin and EDTA
include: correlation, the limits of acceptability in the standards of monitoring
and interpretation standards regression defined by the SFBC and analysis of
Bland-Altman. The parameters studied were classified into three categories. The
parameters for which the assay is not influenced by the nature of the anticoa-
gulant used: apolipoprotéin A1, apolipoprotein B, alanine amino-transferase,
creatine kinase, creatinine, total cholesterol, HDL-cholesterol, lipase, NT-Pro
BNP, troponine T and urea. The parameters for which the results are underesti-
mated EDTA plasma, including those for which the impact is moderate and for
which the interpretive standards are not changed: triglycerides, and those for
doi:10.1684/abc.2014.0959
which performance standards are changed on one or more levels: aspartate ami-
Article reçu le 29 janvier 2014, notransferase and lactate dehydrogenase; and finally the not practicable EDTA
accepté le 07 février 2014
plasma parameters: alkaline phosphatase.
Key words: lithium heparin, EDTA, comparison, performance standards, moni-
Tirés à part : E. Bigot-Corbel toring standards
Pour citer cet article : Sacchetto É, Ali D, Dumontet E, Le Carrer D, Orsonneau JL, Delaroche O, Bigot-Corbel E. Influence de la nature de l’anticoagulant sur le dosage
plasmatique de quinze paramètres biochimiques. Ann Biol Clin 2014 ; 72(3) : 337-50 doi:10.1684/abc.2014.0959 337
Article original
La qualité de la phase pré-analytique conditionne d’EDTA en vue du dosage du calcium, magnésium, fer,
l’exactitude et la justesse du résultat rendu en biologie [1- phosphatases alcalines, et créatine kinase [9].
3]. Parmi les différents points critiques de cette phase, le Les sels d’héparine sont très utilisés pour l’obtention de
prélèvement sanguin occupe la première place [4, 5]. En plasma. L’héparine est un glycosaminoglycane sulfaté qui
effet, le prélèvement de sang en l’absence d’anticoagulant bloque la coagulation en activant les antithrombines. Plu-
va permettre l’obtention de sérum tandis que la présence sieurs sels d’héparine sont utilisés : héparinate de lithium,
d’un anticoagulant dans le tube de prélèvement va permettre héparinate de sodium ou héparinate d’ammonium. Les sels
l’obtention de plasma. Le sérum est obtenu par centrifu- de lithium ne peuvent pas être utilisés pour le dosage du
gation à partir de sang total coagulé. Il est dépourvu des lithium, les sels d’ammonium ne peuvent pas être utilisés,
facteurs de coagulation, mais est enrichi par les composants ni pour le dosage de l’ammonium, ni pour le dosage de
cellulaires des plaquettes et les produits du métabolisme l’urée. L’héparine est le seul anticoagulant utilisable pour
cellulaire. Le plasma est le surnageant acellulaire obtenu la détermination du pH, des gaz du sang et des électrolytes
après centrifugation de sang total, dont la coagulabilité a [5].
été inhibée par adjonction d’un anticoagulant présent dans Le citrate de sodium est également un bon ligand du cal-
le tube de prélèvement. Pour certains paramètres, il existe cium. Il est utilisé pour obtenir du plasma en vue d’examens
une différence significative entre les mesures réalisées sur de coagulation (rapport sang/citrate : 9/1) ou pour la mesure
plasma et sérum [6-8]. Plusieurs raisons sont à l’origine de la vitesse de sédimentation (rapport sang/citrate : 4/1).
de ces différences : l’analyte peut être consommé pen- Le fluorure et le monoiodoacétate de sodium sont des anti-
dant le processus de coagulation (fibrinogène, plaquettes, glycolytiques qui inhibent la consommation de glucose
glucose) ou au contraire l’analyte peut être libéré des cel- par les cellules sanguines, respectivement par inhibition de
lules lors du processus de coagulation (potassium, lactate l’énolase et de la glycéraldéhyde-3-phosphate déshydro-
déshydrogénase, phosphate, ammonium, lactate). La déter- génase. Ils peuvent être utilisés conjointement à un autre
mination des paramètres de biochimie est généralement anticoagulant pour le dosage d’analytes comme le glucose
réalisée sur plasma plutôt que sur sérum du fait d’un cer- et le lactate [10].
tain nombre d’avantages qui sont d’une part la rapidité, En règle générale, les prélèvements sanguins destinés aux
puisqu’il n’est pas nécessaire d’attendre la coagulation pour analyses biochimiques (hors protéinologie) sont réalisés sur
procéder à la centrifugation et que le temps de centrifu- héparinate de lithium (H-Li).
gation peut être réduit par augmentation de la vitesse de Depuis plusieurs années, les fournisseurs d’automates et
centrifugation. D’autre part, l’augmentation du rendement réactifs de biochimie fournissent les recommandations de
puisqu’on obtient pour une même quantité de sang total réalisation des dosages sur leurs automates, ainsi que le
prélevé un volume de plasma 15 à 20 % plus élevé que type de prélèvement utilisable : plasma et/ou sérum. Ils
le volume de sérum, et des résultats plus représentatifs précisent également les différents types de plasma uti-
puisque le plasma représente mieux l’état in vivo que le lisables. L’anticoagulant le plus largement recommandé
sérum. Mis à part lors de l’électrophorèse des protéines, est l’héparinate de lithium, puisqu’il ne présente pas
où la présence de fibrinogène dans la région des gam- les inconvénients de l’EDTA classiquement utilisé pour
maglobulines peut simuler une protéine monoclonale ou l’hémogramme, qui en complexant les ions divalents rend
gêner l’interprétation, les inconvénients dus à l’utilisation impossible le dosage de ces derniers [5].
de plasma en biochimie sont essentiellement liés à la nature Lors d’une hospitalisation aux urgences ou dans un service
de l’anticoagulant utilisé puisqu’en effet chaque anticoa- de soins, le premier bilan effectué comprend en général
gulant peut conduire à une interférence dépendant de la un bilan biochimique de base (associé éventuellement à un
méthode d’analyse. bilan d’exploration des gaz du sang) et un hémogramme. De
Les principaux anticoagulants utilisés pour la réalisation même, dans les services de réanimation post-chirurgicale,
des prélèvements sanguins chez les patients sont : l’EDTA, les patients sont suivis régulièrement par un bilan sanguin
l’héparine, le citrate et le fluorure de sodium [5]. systématique biochimique et hématologique. Dans certains
L’acide éthylène diamine tétraacétique ou EDTA est un cas, lors de problèmes liés au prélèvement du tube H-Li
chélateur de cations divalents utilisé comme anticoagulant (oubli de prélèvement, sang coagulé, quantité insuffisante,
puisqu’ il inactive le calcium nécessaire à la coagulation par prélèvement hémolysé), il peut être opportun d’utiliser le
formation d’un complexe inactif. C’est aussi un inhibiteur tube EDTA classiquement réservé pour les analyses héma-
de protéases comme les métalloprotéases ou les cys- tologiques afin d’effectuer certains dosages biochimiques.
téines protéases calcium-dépendantes à la concentration de Nous avons comparé dans cette étude sur une trentaine de
1-10 M. L’EDTA est utilisée sous forme de sel de sodium patients, les résultats de quinze paramètres biochimiques
ou plus souvent de potassium : EDTA di- ou tripotassique. dosés soit sur plasma hépariné, soit sur plasma EDTA, les
Les recommandations sont de ne pas utiliser les sels prélèvements ayant été réalisés au même moment.
Tableau 1. Paramètres pour lesquels l’influence de l’anticoagulant a été étudiée sur l’automate Cobas 6000 ce (Roche Diagnostics).
Pour chaque paramètre sont précisés : l’acronyme, le nom du paramètre, la méthodologie utilisée (principe, méthode et longueur d’onde de mesure), le
domaine de linéarité fourni par le fabricant, ainsi que le CV de reproductibilité obtenu pendant la période de l’étude (déterminé comme la valeur la plus élevée
obtenue par passage de 3 niveaux de contrôle interne de qualité) et l’incertitude de mesure des paramètres déterminée à partir des résultats de contrôles
internes de qualité externalisés.
Tableau 2. Paramètres pour lesquels l’influence de l’anticoagulant a été étudiée sur l’automate Cobas 6000 ce (Roche Diagnostics).
Paramètre Méthode dosage Corrélation Plasma EDTA (Y) versus Plasma H-Li (X)
Équation de la droite Coefficient Domaine de Moyenne Nombre
d’allométrie de corrélation mesure étudié des de patients
r rapports
Y/X
ALAT Méthode y = 0,9914 x - 0,0303 0,998 0,19-11,2 kat/L 0,95 34
enzymatique
Apo A1 Immunoturbidimétrie y = 0,8915 x + 0,0408 0,991 0,7-1,6 g/L 0,93 33
Apo B Immunoturbidimétrie y = 0,8753x + 0,1007 0,971 0,4-1,2 g/L 1,0 34
ASAT Méthode y = 0,9676x - 0,0806 0,999 0,3-13 kat/L 0,88 34
enzymatique
CK Méthode y = 1,0167x - 0,0821 0,998 0,2-19 kat/L 0,86 32
enzymatique
CRE Méthode y = 0,9646x - 1,7754 0,995 30-370 mol/L 0,95 35
colorimétrique
CT Méthode y = 0,9649x - 0,0107 0,997 2,5-8,5 mmol/L 0,96 31
enzymatique
HDL-C Méthode y = 0,9498x + 0,018 0,997 0,57-1,93 mmol/L 0,97 30
enzymatique
LDH Méthode y = 0,7222x + 0,2034 0,821 3,9-10 kat/L 0,78 31
enzymatique
LIP Méthode y = 0,8741x + 0,0513 0,997 0,09-4 kat/L 0,98 35
enzymatique
NT-pro BNP Méthode y = 0,9354x + 48,155 0,999 13-33000 ng/L 0,95 34
immuno-chimique
PAL Méthode y = 0,0125x - 0,0079 0,943 0,6-7,0 kat/L 0,01 30
enzymatique
TG Méthode y = 0,875x + 0,1053 0,987 0,6 -8,4 mmol/L 0,95 37
enzymatique
TNT-HS Méthode y = 0,9976x + 42,739 0,987 6-9000 ng/L 1,07 38
immuno-chimique
UR Méthode y = 0,9753x + 0,0107 0,999 1,9-23 mmol/L 0,98 36
enzymatique
Pour chaque paramètre sont précisés : l’acronyme, la méthodologie utilisée, l’équation de la droite de corrélation et le coefficient de corrélation (r), le domaine
de mesure étudié la moyenne des rapports y/x ou Y = valeur déterminée sur plasma EDTA et X valeur déterminée sur plasma H-Li, le nombre de patients
testés.
rapport Y/X est supérieur à 1,1. Cependant la confrontation toléré à 0,05. L’analyse Bland-Altman met en évidence
des écarts d’exactitude moyens aux normes d’interprétation quatre patients pour lesquels les normes de suivi SFBC sont
et de suivi SFBC est correcte sur les trois niveaux. dépassées (figure 3A).
Plasma EDTA
8
15
6
10
4
5
2
0 0
0 2 4 6 8 10 12 0 5 10 15 20 25
Plasma hépariné Plasma hépariné
Plasma EDTA
6
250
5
200
4
150
3
100
2
50 1
0 0
0 50 100 150 200 250 300 350 400 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Plasma hépariné Plasma hépariné
1,5 5
4
1 3
2
0,5
1
0 0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 0 1 2 3 4 5 6 7 8
Plasma hépariné Plasma hépariné
Figure 1. Paramètres non influencés par la nature de l’anticoagulant utilisé. Représentation graphique des résultats expérimentaux obtenus
pour l’ALAT (A), la CK (B), la créatinine (C), le cholestérol total (D), le HDL-cholestérol (E), la lipase (F), le NT-pro BNP (G), La troponine (H)
et l’urée (I). En abscisse figure la concentration dans l’échantillon de plasma H-Li. En ordonnée figure la concentration dans l’échantillon
de plasma EDTA.
G 35000
NT Pro-BNP ng/L H10000 Troponine T hs STAT ng/L
Plasma EDTA
Plasma EDTA
6000
20000
5000
15000
4000
10000 3000
2000
5000
1000
0 0
0 5000 10000 15000 20000 25000 30000 35000 0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000 9000 10000
Plasma hépariné Plasma hépariné
I Urée mmol/L
25
y = 0,9753x + 0,0107
R2 = 0,9981
20
Plasma EDTA
15
10
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5
Plasma hépariné
Figure 1. (suite)
Plasma EDTA
1
1,2
1 0,8
0,8
0,6
0,6
0,4
0,4
0,2
0,2
0 0
0 0,5 1 1,5 2 2,5 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 1,6
Plasma hépariné Plasma hépariné
Plasma EDTA
8 6
5
6
4
4 3
2
2
1
0 0
0 2 4 6 8 10 12 14 0 2 4 6 8 10 12
Plasma hépariné Plasma hépariné
Plasma EDTA
6
0,06
5
0,05
4
0,04
3
0,03
0,02 2
0,01 1
0 0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Plasma hépariné Plasma hépariné
Figure 2. Paramètres pour lesquels la pente de la droite de régression et/ou la moyenne des rapport Y/X (EDTA)/(H-Li) est inférieure à 0,9
ou supérieure à 1,1. Représentation graphique des résultats expérimentaux obtenus pour l’apolipoprotéine A (A), l’apolipoprotéine B (B),
l’ASAT (C), la LDH (D), la PAL (E), les triglycérides (F). En abscisse figure la concentration dans l’échantillon de plasma H-Li. En ordonnée
figure la concentration dans l’échantillon de plasma EDTA.
(234 -618 UI/L). La corrélation du dosage sur plasma EDTA mesure, la moyenne du rapport Y/X = 0,78. On retrouve
(y) et sur plasma H-Li (x) fournit une droite de pente vingt-six échantillons pour lesquels le rapport Y/X est
(a) = 0,722 et d’ordonnée à l’origine (b) = + 0,203, avec inférieur à 0,9 et la confrontation des écarts d’exactitude
un coefficient de corrélation (r) = 0,821 (figure 2D). La cor- moyens aux normes d’interprétation SFBC met en évi-
rélation n’est pas très bonne sur l’ensemble du domaine de dence un écart pour les niveaux bas, moyens et élevés
Y-X
0,0 0
-1
-0,2
-2
-0,4
-3
-0,6 -4
-0,8 -5
0 2 4 6 8 10 12 14 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
(X+Y)/2 (X+Y)/2
1,5
4
1,0
2
0,5
Y-X
Y-X
0 0,0
-0,5
-2
-1,0
-4
-1,5
-6 -2,0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 0 1 2 3 4 5 6 7 8
(X+Y)/2 (X+Y)/2
E Triglycérides mmol/L
2,5
2,0
1,5
1,0
0,5
Y-X
0,0
-0,5
-1,0
-1,5
-2,0
-2,5
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
(X+Y)/2
Figure 3. Représentation graphique des résultats de l’analyse de Bland-Altman obtenus pour l’ASAT (A), la CK (B), la LDH (C), la lipase
(D) et les triglycérides (E). En ordonnée figure la différence entre la valeur mesurée sur plasma EDTA (Y) et la valeur mesurée sur plasma
H-Li (X). En abscisse figure la moyenne des mesures. Les pointillés bleus indiquent les normes de suivi SFBC.
Y-X
1,0 0
-500
0,9
-1000
-1500
0,8
-2000
0,7 -2500
0 5000 10000 15000 20000 25000 30000 35000 0 5000 10000 15000 20000 25000 30000 35000
X (X+Y)/2
1,20 300
200
1,10
100
Y/X
Y-X
1,00 0
0,90 -100
-200
0,80
-300
0,70 -400
0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 4500 5000 0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000 4500 5000
X (X+Y)/2
1,20 3000
2000
1,10
1000
Y/X
Y-X
1,00 0
-1000
0,90
-2000
0,80
-3000
0,70 -4000
0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000 9000 10000 0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000 9000 10000
X (X+Y)/2
Figure 4. Résultats obtenus pour les marqueurs cardiaques : NT-pro BNP et troponine T hs STAT. Sont représentés pour le NT-pro BNP :
le rapport entre la valeur mesurée sur plasma EDTA (Y) et la valeur mesurée sur plasma H-Li (X) en fonction de la valeur mesurée sur
plasma H-Li, sur l’ensemble de la gamme de mesure (A1) et de façon plus restreinte sur la zone 0-5000 ng/L (B1), les traits noirs indiquent
les seuils de 0,9 et 1,1 pour Y/X. En parallèle la représentation graphique des résultats de l’analyse de Bland-Altman avec en ordonnée la
différence entre la valeur mesurée sur plasma EDTA (Y) et la valeur mesurée sur plasma H-Li (X) sur l’ensemble de la gamme de mesure
(A2) et de façon plus restreinte sur la zone 0-5000 ng/L (B2). En abscisse figure la moyenne des mesures. Les pointillés bleus indiquent
les normes de suivi fixés au laboratoire. Pour la troponine sont représentés le rapport entre la valeur mesurée sur plasma EDTA (Y) et la
valeur mesurée sur plasma H-Li (X) en fonction de la valeur mesurée sur plasma H-Li, sur l’ensemble de la gamme de mesure (C1) et de
façon plus restreinte sur la zone 0-150 ng/L (D1), les traits noirs indiquent les seuils de 0,9 et 1,1 pour Y/X. En parallèle la représentation
graphique des résultats de l’analyse de Bland-Altman avec en ordonnée la différence entre la valeur mesurée sur plasma EDTA (Y) et la
valeur mesurée sur plasma H-Li (X) sur l’ensemble de la gamme de mesure (C2) et de façon plus restreinte sur la zone 0-150 ng/L (D2).
1,2 50
30
1,1
10
Y/X
Y-X
1,0
-10
0,9
-30
0,8 -50
0,7 -70
0 20 40 60 80 100 120 140 0 20 40 60 80 100 120 140
X (X+Y)/2
Figure 4. (suite)
(a) = 0,925 et d’ordonnée à l’origine (b) = + 0,019, avec la validation de la méthode : elles sont fixées à 14 pour le
un coefficient de corrélation (r) 0,998 (figure 1F). La corré- niveau bas (150 ng/L), 28 pour le niveau moyen (300 ng/L)
lation est correcte, sur l’ensemble du domaine de mesure, et 376 pour le niveau élevé (4 000 ng/L). La confrontation
la moyenne du rapport Y/X = 0,98. On retrouve un échan- des écarts d’exactitude moyens aux normes d’interprétation
tillon pour lequel le rapport Y/X est inférieur à 0,9 et un intra laboratoire fixées est correcte sur les trois niveaux
pour lequel le rapport Y/X est supérieur à 1,1. Cependant, (figures 4A2 et 4B2).
la confrontation des écarts d’exactitude moyens aux normes
d’interprétation et de suivi SFBC est correcte sur les trois Phosphatases alcalines (PAL)
niveaux (figure 3D).
La corrélation a été réalisée sur 30 échantillons de patients
présentant des valeurs comprises entre 0,63 et 7,72 kat/L
Fragment N terminal du précurseur (36 - 463 UI/L). La corrélation du dosage sur plasma EDTA
du peptide natriurétique de type B (y) et sur plasma H-Li (x) fournit une droite de pente
(NT-Pro BNP) (a) = 0,012 et d’ordonnée à l’origine (b) = - 0,008, avec
un coefficient de corrélation (r) = 0,943 (figure 2E). La
La corrélation a été réalisée sur 34 échantillons de patients
corrélation n’est pas bonne, sur l’ensemble du domaine de
présentant des valeurs comprises entre 13 et 33245 ng/L. La
mesure, la détermination sur plasma EDTA donnant tou-
corrélation du dosage sur plasma EDTA (y) et sur plasma
jours des résultats inférieurs à 0,1 kat/L. De ce fait la
H-Li (x) fournit une droite de pente (a) = 0,935 et d’ordon-
moyenne du rapport Y/X = 0,01 et tous les résultats des
née à l’origine (b) = + 48,15, avec un coefficient de corréla-
échantillons de patient s’écartent des bornes recommandées
tion (r) = 0,999. La corrélation est correcte, sur l’ensemble
SFBC. Le dosage de la PAL n’est donc pas réalisable sur
du domaine de mesure, la moyenne du rapport Y/X = 0,95
plasma EDTA probablement du fait de la présence d’ions
(figure 1G). On retrouve deux échantillons pour lesquels
magnésium et zinc dans les réactifs utilisés pour le dosage.
le rapport Y/X est inférieur à 0,9 (figures 4A1 et 4B1). En
ne s’intéressant qu’aux patients dont la valeur déterminée
Triglycérides (TG)
sur plasma H-Li était inférieure à 5 000 ng/L (n = 27) la
corrélation du dosage sur plasma EDTA (y) et sur plasma La corrélation a été réalisée sur 37 échantillons de patients
H-Li (x) fournit une droite de pente (a) = 0,962 mais dont présentant des valeurs comprises entre 0,58 et 8,40 mmol/L.
l’ordonnée à l’origine (b) est -3,007 et non plus + 48,15, La corrélation du dosage sur plasma EDTA (y) et sur
avec un coefficient de corrélation (r) = 0,999, ce qui per- plasma H-Li (x) fournit une droite de pente (a) = 0,875
met de vérifier la bonne corrélation même dans les zones et d’ordonnée à l’origine (b) = + 0.105, avec un coeffi-
de concentrations normales à faiblement élevées. Pour ce cient de corrélation (r) 0,9865 (figure 2F). La corrélation
paramètre, la SFBC n’a pas établi de limites acceptables est correcte, sur l’ensemble du domaine de mesure, la
tant en terme de CV de répétabilité et de reproductibilité moyenne du rapport Y/X = 0,95. On retrouve un échantillon
que de normes de suivi et d’interprétation. Nous avons fixé pour lequel le rapport Y/X est inférieur à 0,9 ; cepen-
au laboratoire nos propres normes d’interprétation lors de dant la confrontation des écarts d’exactitude moyens aux
normes d’interprétation et de suivi SFBC est correcte sur les Pour ces paramètres, aucun écart d’exactitude n’est observé
trois niveaux. L’analyse Bland-Altman met en évidence un par rapport aux normes de suivi et d’interprétation SFBC
patient pour lequel les normes de suivi SFBC sont dépassées (ALAT, CK, créatinine, cholestérol total, HDL-cholestérol,
(figure 1E). urée), ou par rapport aux normes d’interprétation intra-
laboratoire (troponine T), et ceci sur l’ensemble des
niveaux.
Troponine T hypersensible (TNT) – Paramètres dosables sur plasma EDTA mais pour lesquels
La corrélation a été réalisée sur 38 échantillons de patients une différence existe avec les résultats obtenus sur plasma
présentant des valeurs comprises entre 6 et 9123 ng/L. La H-Li : Il s’agit de l’ASAT, la LDH, le NT-Pro BNP et les
corrélation du dosage sur plasma EDTA (y) et sur plasma triglycérides, pour lesquels les résultats obtenus sur plasma
H-Li (x) fournit une droite de pente (a) = 0,998 et d’ordon- EDTA sont globalement inférieurs à ceux obtenus sur
née à l’origine (b) = + 42,74, avec un coefficient de corré- plasma H-Li, et pour lesquels on observe un écart sur un ou
lation (r) = 0,987 (figure 1H). La corrélation est correcte, plusieurs niveaux par rapport aux normes d’interprétation
sur l’ensemble du domaine de mesure, la moyenne du rap- SFBC ou par rapport aux normes d’interprétation intra-
port Y/X = 1,07 (figures 4C1 et 4D1). En ne s’intéressant laboratoire (NT-pro BNP).
qu’aux patients où la valeur déterminée sur plasma H-Li – Enfin, parmi les paramètres étudiés, la PAL n’est pas
était inférieure à 150 pg/mL (n = 27), la corrélation du dosable sur plasma EDTA.
dosage sur plasma EDTA (y) et sur plasma H-Li (x) four-
nit une droite de pente (a) = 1,054 mais où l’ordonnée à
l’origine (b) est - 0,1797 et non plus + 42,739, avec un coef- Discussion
ficient de corrélation (r) = 0,999, ce qui permet de vérifier la
bonne corrélation même dans les zones de concentrations Bien évidemment, le dosage des cations divalents : calcium,
normales a faiblement élevées. Comme pour le NT-proBNP, magnésium, fer est impossible sur plasma EDTA puisqu’il
la SFBC n’a pas établi de limites acceptables et nous avons s’agit d’un chélateur. De même le dosage de sodium et de
fixé au laboratoire nos propres normes d’interprétation lors potassium est impossible puisque les sels d’EDTA utilisés
de la validation de la méthode, elles sont fixées à 2,8 pour sont soit sodiques, soit potassiques. Les recommandations
le niveau bas (14 ng/L), 10 pour le niveau moyen (50 ng/L) internationales CLSS sont de ne pas utiliser les sels d’EDTA
et 500 pour le niveau élevé (2 500 ng/L). La confrontation en vue du dosage du calcium, magnésium, fer, PAL et CK.
des écarts d’exactitude moyens aux normes d’interprétation Les spécifications des fournisseurs de tubes y rajoutent
intra laboratoire fixées est correcte sur les trois niveaux la lipase et la créatinine. Sur Cobas 6000, les spécifica-
(figures 4C2 et 4D2). tions des fiches techniques indiquent l’utilisation possible
de manière indifférente de plasma EDTA ou de plasmas H-
Li pour le dosage de l’ALAT, l’Apo A1 l’ApoB l’ASAT,
Urée (UR)
la créatinine, le cholestérol, le HDL-cholestérol, le NT-pro
La corrélation a été réalisée sur 36 échantillons de patients BNP, les triglycérides, la troponine T hs et l’urée. Pour
présentant des valeurs comprises entre 1,9 et 22,6 mmol/L. les PAL, la lipase, la CK et la LDH les spécifications des
La corrélation du dosage sur plasma EDTA (y) et sur fiches techniques indiquent l’utilisation de plasma hépariné
plasma H-Li (x) fournit une droite de pente (a) = 0,975 et uniquement.
d’ordonnée à l’origine (b) = + 0,011, avec un coefficient de La nature de l’échantillon utilisable pour le dosage des para-
corrélation (r) 0,999 (figure 1I). La corrélation est correcte, mètres du bilan lipidique, historiquement réalisé sur tube
sur l’ensemble du domaine de mesure, la moyenne du rap- sec, a été étendue au plasma hépariné et/ou EDTA pour per-
port Y/X = 0,98. On retrouve un échantillon pour lequel le mettre le dosage de ces paramètres en même temps qu’un
rapport Y/X est inférieur à 0,9. Cependant la confrontation bilan plus complet. Cependant, il existe une sous-estimation
des écarts d’exactitude moyens aux normes d’interprétation des valeurs plasmatiques de cholestérol de 3 à 4,7 % pour
et de suivi SFBC est correcte sur les trois niveaux. l’EDTA, de 3 % pour l’héparine, phénomène non retrouvé
À l’issue de ce travail nous pouvons donc classer les para- sur le dosage du HDL-cholestérol [13-16]. La cause de ces
mètres étudiés en 3 catégories : écarts est inexpliquée. Nos résultats sont en accord avec ces
– Paramètres dosables indifféremment sur plasma hépa- données mais montrent également les valeurs plus basses
riné ou sur plasma EDTA : Les résultats de notre étude obtenues pour le dosage des triglycérides et des apolipo-
montrent qu’un certain nombre de paramètres peuvent être protéines A1 et B sur plasma EDTA.
dosés indifféremment sur plasma H-Li ou plasma EDTA : La CK fait partie des paramètres pour lesquels toutes
l’Apo A1, apo B, ALAT, CK, créatinine, cholestérol total, les recommandations précisent de réaliser le dosage uni-
HDL-cholestérol, lipase, troponine T hs, urée. quement sur plasma hépariné. Dans notre étude, nous ne
trouvons aucune différence entre les résultats obtenus sur Le dosage de la LDH n’est pas préconisé, il est toutefois
plasma EDTA ou H-Li. réalisable et doit être rendu si la valeur est élevée avec un
L’importance de la nature de l’échantillon pour le dosage commentaire signalant la nature du prélèvement ainsi que
des marqueurs cardiaques est très documentée et les recom- l’importance moyenne du biais observé. Le rendu du résul-
mandations ont évolué en fonction des méthodes de dosage tat n’est pas recommandé si la valeur mesurée est normale.
et de la molécule dosée : troponine T ou I, BNP ou NT-pro
BNP [17-25]. Concernant la troponine, les recommanda-
tions conjointes SFBC-CNBH sont d’utiliser le plasma Conclusion
hépariné [22]. L’utilisation de plasma EDTA est toutefois
préconisée par certains fournisseurs. Nous avons étudié la L’objectif d’un laboratoire de biochimie d’urgence est de
troponine T hS et ne trouvons aucune différence entre les rendre rapidement des résultats fiables. Nous avons étu-
résultats obtenus sur plasma EDTA ou H-Li, quelle que dié l’impact de l’utilisation de plasmas prélevés sur EDTA
soit la plage de mesure. Concernant les peptides natriuré- en remplacement de plasmas prélevés sur héparinate de
tiques cardiaques, les données de la littérature indiquent lithium, sur la détermination des paramètres biochimiques
l’utilisation possible de plasma EDTA ou de sérum pour les plus fréquemment demandés, et confronté les résultats
le dosage du BNP et de sérum ou plasma hépariné ou obtenus aux données indiquées par le fournisseur. Ceci nous
EDTA pour le dosage du NT-pro BNP [23-25]. Nous avons a permis, en cas de nécessité, d’élargir pour certains para-
étudié le NT-proBNP et trouvons 5 patients pour lesquels mètres nos conditions de réalisation de dosages permettant
une différence est observée entre les résultats obtenus sur un gain de temps dans la prise en charge des patients.
plasma EDTA ou H-Li pour des valeurs supérieures à
3 500 ng/L, mais l’écart observé ne dépasse pas les normes Liens d’intérêts : Les auteurs déclarent ne pas avoir de
d’interprétation intra-laboratoire fixées. lien d’intérêt en rapport avec cet article.
La lipase et la LDH font partie des paramètres pour lesquels
les recommandations fournisseurs indiquent l’utilisation
de plasma hépariné uniquement. Nous observons pourtant Références
une très bonne corrélation entre le dosage de la lipase sur
1. Guder WG. Preanalytical factors and their influence on analytical qua-
plasma EDTA et H-Li avec une confrontation des écarts lity specifications. Scand J Clin Lab Invest 1999 ; 59 : 545-9.
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correcte sur tous les niveaux ce qui permet la réalisation 2. Bonini P, Plebani M, Ceriotti F, Rubboli F. Errors in laboratory medi-
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du dosage. Concernant la LDH, même si la corrélation
est bonne, il existe un biais avec des résultats inférieurs 3. Simundic AM, Cornes M, Grankvist K, Lippi G, Nybo M,
d’environ 40 % lors de la réalisation du dosage sur plasma Kovalevskaya S, et al. Survey of national guidelines, education and trai-
ning on phlebotomy in 28 European countries : an original report by
EDTA, mais ce biais est plus ou moins important selon les the European Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine
patients. (EFLM) working group for the preanalytical phase (WG-PA). Clin Chem
Grâce à cette étude, nous avons évalué l’impact de la Lab Med 2013 ; 51 : 1585-93.
nature de l’anticoagulant sur différents niveaux de valeurs 4. CLSI (formerly NCCLS). Procedures for the collection of diagnostic
de quinze paramètres biochimiques couramment analysés. blood specimens by venipuncture ; Approved Standard - Sixth Edition.
Ceci nous a permis d’établir un certain nombre de règles CLSI document H3 - A6 (ISBN 1-56238-650-6). Clinical and Laboratory
Standards Institute, 940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsyl-
sur le rendu des résultats en cas de nécessité d’utilisation de vania 19087-1898 USA, 2007.
plasma EDTA en remplacement de plasma H-Li. Ces règles
permettent de garantir aux cliniciens et aux patients le rendu 5. CLSI (formerly NCCLS). Tubes and additives for venous blood speci-
men collection ; Approved Standard Fifth Edition CLSI document H1-A5
de résultats fiables sur ce type de prélèvement [6, 22]. Sur (ISBN 1-56238-519-4). Clinical and Laboratory Standards Institute, 940
prélèvement EDTA, elles peuvent être résumées de la façon West Valley Road, Suite 1400, Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA,
suivante. 2003.
Le dosage et le rendu de résultats des paramètres non impac- 6. Mohri M, Rezapoor H. Effects of heparin, citrate, and EDTA on plasma
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total, HDL-cholestérol, lipase, NT-proBNP, et troponine T 4.
Hs est réalisable et ne s’accompagne pas de commentaire. 7. Mohri M, Allahyari L, Sardari K. Effects of common anticoagulants on
Le dosage et le rendu des résultats des paramètres ASAT et routine plasma biochemistry of horse and comparison with serum. JEVS
triglycérides est réalisable mais doit être accompagné d’un 2007 ; 27 : 313-6.
commentaire signalant la nature du prélèvement ainsi que 8. Boyanton BL, Blick KE. Stability studies of twenty-four analytes in
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