Transduction cellulaire

Principes généraux de transduction

Survol:
– Signalisation
– Récepteurs
– Transducteurs
– Cibles (targets)
Principaux types of recepteurs cellulaires de
surface
- signalisation par protéines-G
- signalisation par RTK (récepteurs Tyrosine-kinase)
Autres recepteurs
 Transduction
Terminologie:
Enzyme-linked receptor (Receptor-tyrosine kinase)
G-protein linked receptor
nuclear hormone receptor
G-protein
Second messenger: cAMP, IP3+DAG, Ca2+
adaptor protein protein kinase
scaffolding protein
SH2 domain
MAPK
Ras
phosphodiesterase
phospholipase
protein phosphatase
crosstalk
 Principes Généraux de Transduction
1. Communication implique
généralement
(i) une molecule de signalisation,
(ii) un recepteur,
(iii) transducteurs intracellulaire
du signal et
(iv) des cibles (targets)
 Principes Généraux de Transduction
2. chaque cellule respond à un profile complexe de
molecules de signalisation (crosstalk)
 Principes Généraux de Transduction
3. Differentes cellules respondent differemment à
une molecule signalisation particulière
 Principes Généraux de Transduction
4. Les Cellules peuvent se rappeler les effects de
certains signaux
5. Les Cellules peuvent ajuster leur sensibilités à un
signal
 Principes Généraux de Transduction
4. Les Cellules peuvent se rappeler les effects de
certains signaux
5. Les Cellules peuvent ajuster leur sensibilités à un
signal
 Molécules de Signalisation

signaux de sécrétion:
• Autocrine-signal affecte la même cellule ou
des cellules de même type
• Paracrine-signal affecte des cellulaes voisines
• Endocrine-signal affecte des cellules à longue
distance

signaux contact-dépendants :
-les signaux ne sont pas libérés mais affectent
d’autres cellules en contact avec l’une d’elles
par interactions proteine-proteine
 Signalisation Autocrine

Signaux libérés par une cellule affectent

d’autres cellules dans l’entourage immediat

Amplifie une response en induisant de

nombreuses “cellules semblables” à respondre
de la même manière

Permet aux cellules une réponse coordonnée

(effet de communauté)
Signalisation Autocrine
 Signalisation Paracrine

Signaux libérés par une cellule agissent sur

différentes cellules immédiatement voisines

La transmission synaptique ressemble à une

stimulation paracrine mais la réponse est limitée
aux cellules en très proche proximité

La propagation du signal est limitée par

-capture cellulaire,
-degradation extracellulaire
-& liaison
 Signalisation Endocrine

Signaux libérés par une cellule affectent

differentes cellules très éloignées

La signalisation endocrine exerce souvent de

multiple effets sur l’organisme en affectant de
nombreux tissus differents
 Récepteurs
= Proteines qui lient une
molécule signal et initient une
cascade de signalisation
Récepteurs de surface
-proteines membranaires
integrales qui lient un signal
extracellulaire et
provoquent une cascade de
signalisation

Récepteurs intracellulaires
-recepteurs nucleaires
 Transduction intracellulaire du Signal
Les recepteurs membranaires activés peuvent
modifier l’activité des enzymes intracellulaires
surtout:
–des enzymes modifiant des Protéines
•Kinases (PKA, PKC, PKG)/ phosphatases
•acetylases/ deacetylases
–des enzymes modifiant des Lipides
•Phospholipases (PLCβ ou γ)
•Phosphotidyl inositol kinase (PI3K)
–des enzymes modifiant des Nucleotides
•cyclases/ phosphodiesterases
 Recepteurs Cellulaires de surface
3 classes principales recepteurs cellulaires de surface :
I. Recepteurs couplés à un canal ionique
II. Recepteurs à activité enzymatique associée
peuvent possèder une activité enzymatique intrinsèque
ou bien
lorsqu’ils lient un ligand, développent une activité
enzymatique
III. Recepteurs couplés aux protéines-G
sont monomeriques (7TM)
et activent une proteine-G trimèrique
(proteine liant GTP) qui régule des
proteines downstream
Recepteurs à activité enzymatique associée
5 classes principales selon :
•type d’effecteur (p.ex. kinase vs. phosphatase)
•cible (serine/threonine, tyrosine, histidine)
•type de relation entre recepteur et enzyme

1. Recepteurs tyrosine kinase (RTK)

2. recepteurs associés à Tyrosine kinase
3. Recepteurs serine/threonine kinase
(PKA, PKC, PKG, PK-Ca2+-CAM)
4. Recepteurs guanylyl cyclase
5. recepteurs à activité Histidine-kinase
associée
 Recepteurs tyrosine kinases
Type de recepteurs très fréquents pour les
principales hormones peptidiques, p.ex. EGF, PDGF,
FGF, HGF, IGF-1, VEGF, NGF.
 Recepteurs Cellulaires de surface
3 classes principales recepteurs cellulaires de surface :
I. Recepteurs couplés à un canal ionique
II. Recepteurs à activité enzymatique associée
peuvent possèder une activité enzymatique intrinsèque
ou bien
lorsqu’ils lient un ligand, développent une activité
enzymatique
III. Recepteurs couplés aux protéines-G
sont monomeriques (7TM)
et activent une proteine-G trimèrique
(proteine liant GTP) qui régule des
proteines downstream
III. Recepteurs couplés aux Protéines-G
et protéines-G

Receptor

G-protein
Recepteurs couplés
aux protéines-G
 Recepteurs couplés aux Protéines-G
Ligand: Divers ligands, p.ex. epinephrine

Récepteur: protéine intégrale membranaire avec

7TM (7 domaines transmembrane)

Protéine-G: protéine trimerique (α, β, γ) attachée à

la membrane par un ancre lipidique

Effecteur: proteine cible qui présente une activité

alterée lorsqu’elle interagit avec des sous-unités
activées de protéines-G (α, or βγ)
 Cascade de Signalisation par
Proteine-G
Une hormone (p.ex. epinephrine
ou glucagon) qui active la
formation de cAMP ou IP3, se lie
à la surface de la cellule sur un
recepteur (à 7 ségments en
hélice-α transmembranaires).
Rhodopsine: premier membre de la
famille de recepteurs à 7-helices-α,
dont la structure a été déterminée
par crystallographie aux rayons-X.
Rhodopsin PDB 1F88
Dissociation des protéines-G
L’hydrolyse de GTP termine la signalisation
et induit la trimerisation
 B.- Protéines-G trimériques

Cycle d’activation/déactivation de protéines-G

Varietés de protéines-G

• Gs sont stimulantes
• Gi/0 sont inhibitrices
• Gq agit sur PLC
• G12/13 agit sur canaux ioniques

– 22 α subunits
– 5 β subunits
– 12 γ subunits
Voie ADENYLATE CYCLASE :Gs & Gi
Voies Gs & Gi
 Gs protéines sont stimulantes
Lors de la dissociation, une protéine Gs stimule un
enzyme effecteur, comme
-adenylate cyclase,
-phospholipase Cβ
or
-canal ionique (K+ or Ca2+)
Adenylate cyclase convertit ATP en cAMP

L’augmentation de cAMP stimule les protéine kinases

cAMP-dependantes (PKA), en provoquant la libération
des sous-unités régulatrices (inhibitrices)
VARIETES de G-PROTEINS:
Gα, -β, -γ
 ADP-Ribosylation

 La toxine de Cholera catalyse une modification covalente

de Gsα. ADP-ribose est transferré du NAD+ sur une
residue sur le site actif GTPase de Gsα.
Cette ADP-ribosylation empêche Gsα hydrolyser GTP.
Ainsi Gsα devient activé de façon permanente.
 La toxine de Pertussis (coqueluche=whooping cough
disease) catalyse l’ADP-ribosylation sur une cysteine de Gi
α, ceci rend la Gα (inhibitrice) incapable d’exchanger GDP
contre GTP. Ainsi la voie inhibitrice est blocquée.
ADP-ribosylation est un mechanisme general pour réguler
l’activité de nombreuses proteines, dans les eukaryotes et
prokaryotes.
Figure 19-19 Mechanism d’action de la toxine de cholera .
Toxine de Cholera
composition = AB5
B:103AA / A: 240AA

Activation: clivage en A1 (195AA) + A2(45AA) reliés par -S-S-

A pénètre dans cellule (endocytose) / dirigé dans ER: liaison par séquence KDEL de A2

Effet: ADP-ribosylation de Arg de Gsα

Adenylate Cyclase NNNNNH2OOHOHHHH2CHOPOO-1'3
catalyse:
ATP cAMP + PPi cAMP NH2
Liaison de certaines hormones (p.ex., N
epinephrine) à la surface de la cellule active N
Adenylate Cyclase qui forme du cAMP dans
la cellule.
N N
Cyclic AMP est donc un second messager.
O
C
O
P O
O
O
Protein Kinase A (cAMP-Dependent Protein Kinase)
transfert Pi de ATP sur OH de Ser ou Thr sur une
séquence particulière de 5-résidus d’aminoacides.
Protein Kinase A: au repos (inactif) = complexe :
• 2 sous-unités catalytiques (C)
• 2 sous-unités regulatrices (R) :
R 2 C2
activation de PKA par cAMP
PKA active l’expression de gènes
CASCADE de PHOSPHORYLATION
EXEMPLE: Métabolisme du Glycogène
 CREB =
cAMP responsive
Elements Binding
Protein
 Inactivation de la voie PKA

La voie protéine-G - PKA est inactivèe par:

–desensitisation du Recepteur (phophorylation par
PKA)
–hydrolyse du GTP de la proteine-G (GTPase de la
sous-unité alpha)
–hydrolyse de cAMP par phosphodiesterase
–inhibition de PKA
–action de Phosphatases sur les targets de PKA
–Activation d’une voie antagoniste (Gi)
PHOSPHODIESTERASE
PLCβ & PKC
 Proteines-G et phospholipases

Certaines protéines-G activent

PLCβ (phospholipase Cβ),
enclanchant la formation
d’inositol triphosphate (IP3) et
diacylglycerol (DAG)
DAG, IP3, Ca2+ et transduction de signal
DAG:
•substrat pour la production d’eicosanoids,
(=puissants médiateurs de signalisation,
notamment acide arachadonique)
•active PKC

IP3:
Induit la libération de Ca2+ à partir des réserves
du RE via canaux Ca-IP3-sensibles

Ca2+:
Une élévation de Ca2+ peut activer PKC et CamK.
IP3 : second messager - Phosphatidylinositides
Page 707

Formule moleculaire des

phosphatidylinositides.
 Une phospholipase est appelée selon la
liaison clivée sur un glycerophospholipide
Page 709
 KINASES: RESUME
A/Ser-Thr kinases
–PKA: cAMP dépendantes RRXSX
–PKCα,β,γ XRXXSSRS
–PK-Ca-CAM-I NYLRRLSDSNF
–PK-Ca-CAM-II XRXXSX
–PK-Ca-CAM-III RAGETRFTDTRK
–PKG: cGMP dépendantes RXXSRX
B/ Tyr Kinases
-PKY
 secretion
métabolisme contraction/mobilité

apoptosis Ca2+ fertilisation

proliferation differentiation

croissance
 Ca2+
La concentration cellulaire de Calcium est maintainue faible par
des pompes qui transporte le calcium à travers la membrane
plasmique et du cytosol à l’intérieur du reticulum
endoplasmique (ER). De hautes concentrations de calcium
activent diverses proteines (protéines kinase, phosphatases,
etc).

De nombreux effets du calcium sont réalisés par liaison à des

protéines liant Ca++, surtout calmodulin, qui est activée lorsque
la concentration de calcium cytosolique augmente de 0.1 à 0.5
micromolar.

La Calmoduline, ensuite, lie diverses protéines cibles, p.ex.Ca-

calmoduline kinases (CaMK).
Une des proteines activée par Ca/calmodulin est une
kinase
appelée CaMK
Transduction de Signal par Calcium

mM Ca2+
0.1→10 µM

µM

Target

1 slide
Régulation de Activité Proteine
Kinase par Ca2+-Calmoduline

signal Ca2+

Activation Kinase
Structure de Protein Kinases Ca-
Dependantes:
Activation de Kinase intra-moleculaire
Activation de Proteines
Kinases Calmoduline-
dépendantes

Myosin light
chain kinase
 Ca2+ active PLA2
qui déclanche le Metabolisme de l’Acide Arachidonique

Ca2+
R
PLC G PLA2
AA
InsP3

Ca

Ca
Linoleic Acid

(20:4 Δ5, Δ8, Δ11, Δ14)

Biosynthese de Prostagandines
 Prostaglandines et Leukotrienes
Grande famille de lipides bioactifs.
= hormones paracrines/autocrines
Très faible durée de demi-vie
En general: regulent localement une inflammation, mais chaque
molecule a des effets specifiques:
eg. Prostaglandin E2 - vasodilatation
Prostaglandin F2 - vasoconstriction
Prostacyclin (PGI2) - vasodilatation / inhibe aggregation de plaquettes
Thromboxane A2 - vasoconstriction / stimule aggregation de plaquettes

Differentes prostaglandines sont fabriquées par des types de cellules

differentes.
eg. Thromboxane A2 fabriqués par plaquettes
Prostacycline produite par cellules vasculaires endotheliales
 Acid Arachidonique (AA) comme second-
messager pour l’entrée de Ca2+

administration exogene de faibles concentrations

d’AA (3-8 µM) induit une entrée de Ca2+ sans
depletion detectable des réserves intracellulaires.

 Les enzymes de production d’AA (p.ex. cPLA2) sont

activés à faibles concentrations d’agonistes appropriés.

 L’inhibition de generation d’AA empêche l’entrée

de Ca2+ par de faibles concentrations d’agonists.
 Canaux à Ca2+ régulés par
Ac.Arachidonique
Arachidonate-Regulated Calcium channels

= “ARC” channels
HEK-293 cells
CHO cells (Yoo et al., 2000)
Parotid acinar cells (mouse & human)
HeLa cells
COS cells
RBL cells
DT40 cells
 Recepteurs Cellulaires de surface
3 classes principales recepteurs cellulaires de surface :
I. Recepteurs couplés à un canal ionique
II. Recepteurs à activité enzymatique associée
peuvent possèder une activité enzymatique intrinsèque
ou bien
lorsqu’ils lient un ligand, développent une activité
enzymatique
III. Recepteurs couplés aux protéines-G
sont monomeriques (7TM)
et activent une proteine-G trimèrique
(proteine liant GTP) qui régule des
proteines downstream
CANAUX IONIQUES COUPLES A UN
LIGAND

ION GATED CHANNELS

TRANSDUCTION RAPIDE (msec)
FAST TRANSDUCTION SLOW TRANSDUCTION
•ligand-gated ion channel
• 5 subunits, each subunits has 4TM •G-protein coupled receptor
• very fast membrane • monomeric Receptor with 7TM
depolarization (msec) • activation of second messengers
• Long term changes (minutes to
days) & plasticity changes
Canaux ioniques couplés à un ligand
ION-GATED CHANNELS
(TRANSDUCTION RAPIDE, msec)

Ion Channel Clustering

ION-GATED RECEPTORS IONOTROPIC GLU-RECEPTORS
 Recepteurs Cellulaires de surface
3 classes principales recepteurs cellulaires de surface :
I. Recepteurs couplés à un canal ionique
II. Recepteurs à activité enzymatique associée
peuvent possèder une activité enzymatique intrinsèque
ou bien
lorsqu’ils lient un ligand, développent une activité
enzymatique
III. Recepteurs couplés aux protéines-G
sont monomeriques (7TM)
et activent une proteine-G trimerique
(proteine liant GTP) qui régule des
proteines downstream
Recepteurs à activité enzymatique associée
5 classes principales selon :
•type d’effecteur (p.ex. kinase vs. phosphatase)
•cible (serine/threonine, tyrosine, histidine)
•type de relation entre recepteur et enzyme

1. Recepteurs tyrosine kinase (RTK)

2. recepteurs associés à Tyrosine kinase
3. Recepteurs serine/threonine kinase
(PKA, PKC, PKG, PK-Ca2+-CAM)
4. Recepteurs guanylyl cyclase
5. recepteurs à activité Histidine-kinase
associée
 Recepteurs tyrosine kinases
Type de recepteurs très fréquents pour les
principales hormones peptidiques, p.ex. EGF, PDGF,
FGF, HGF, IGF-1, VEGF, NGF.
Ligand-dependent autophosphorylation and
docking
Autophosphorylation Ligand-dépendente et
docking
 Recepteurs Tyrosine kinase
Recepteur possède une activitè intrinsèque
tyrosine kinase

Lorsque le ligand se lie, le recepteur peut se

dimeriser et devient une tyrosine kinase active

Il se phosphoryle lui-même (autophosphorylation),

conséquences:
1. activité kinase augmentée
2. affinité élevée pour d’autres proteins
Une fois liées, ces “docking proteins” peuvent être
phosphorylées
Autophosphorylation Ligand-dépendente et
docking
Page 686

Recepteurs Tyrosine Kinase

Activation de Ras
 Ras GTPase Cycle

Ras-GTP
GTP H 2O

Exchange Hydrolysis

Pi
GDP Ras-GDP
 Ras GTPase Cycle

Ras-GTP
GTP H 2O

Exchange Hydrolysis
Guanine Nucleotide GTPase Activating
Exchange Factors Proteins
(GEFs) (GAPs)

Pi
GDP Ras-GDP
 Superfamille Ras
Ras Rho Rab Arf Ran
H-Ras RhoA Rab1-N Arf1-6 Ran
N-Ras RhoB
K-Ras RhoC

TC21 RhoG
RhoE
Rap1
Rap2 CDC42

R-Ras Rac1
Rac2
RalA
RalB

Croissance/ Cytosquelette Traffic Vesiculaire

Differentiation Translocation Nucleaire
 Fonctions des Proteines Ras

1) Stimule la Proliferation Cellulaire

-fibroblastes, cellules epitheliales, lymphocytes
-favorise les actions de facteurs de croissance

2) Stimule la Differentiation Cellulaire

- progenitrices cellules neuronales (PC12)
- favorise l’action de neurotrophines

3) Contribue aux Fonctions de Cellules differentiées

-neurones SNC
-module les effets de signalisation du calcium
 Fonction de Ras
Effecteurs Multiples

Tyrosine Kinases Phospholipase C Ca2+

DAG Calmodulin
GRB2 Ras-GRF
SOS Ras-GRP

Ras

Chaque GEF a un motif qui le connecte à un signal signals upstream différent

mais un domaine catalytique similaire qui active Ras
 Fonction de Ras
Effecteurs Multiples

Ras

Ral-GEF
PI3Kinase Raf Ral
PDK1
Mek Exocyst
Akt RalBP
Src
Erk
Voie MAP kinase
Activation de cascade MAPK
cascade MAP kinase
- activée par Ras
Page 696
Scaffolding proteins: assistent pour
organiser MAPKs
Page 699

Scaffold proteins: modulation de cascades MAP

kinase. (a) JIP-1(JNK-interacting protein).
 Scaffold proteins: modulattion de cascades
MAP kinase. (b) MEKK1.
Page 699
Signalisation de Insuline
• 2 chaînes alpha extracellulaires
• Chacune avec un site de liaison pour Insuline
• liés à 2 chaînes beta transmembranaires, avec
chacune un domaine cytosolique tyrosine kinase
• L’insuline lie les chaines alpha, -> le domaine
tyrosine kinase de chaque chaine beta catalyse
l’autophosphorylation de residus tyrosine sur le
domain kinase adjacent.
• Les domaines tyrosine kinase catalysent aussi la
phosphorylation de protéines appelées  « insulin-
receptor substrates » (IRSs).
• Certains effets de la liaison de l’insuline passent par
le systeme second messager de PIP3 (qui regulate
divreses serine-threonine protein kinases.
• La liaison de insuline dans certaines cellules (p.ex.
muscle) provoque une stimulation of cascades
phoshatase entraînant l’inactivation de glycogène
phoshorylase dans la voie de degradation du
glycogène
Recepteurs Non-Tyrosine
Kinases
Page 702

Voie JAK-STAT de transmission

intracellulaire de signaux de cytokines
JAK-STAT
JAK-STAT
Recepteurs intracellulaires
–Steroides
–Vit. D
–Hormones Thyroidiennes T3/T4
–Acide Retinoique
 Recepteurs
= Proteines qui lient un signal
et initient une cascade de
signalisation
recepteurs membranaires
- proteines membranaires
integrales qui lient un signal
extracellulaire et initient
une cascade de signalisation

Recepteurs intracellulaires
-recepteurs d’hormone
nucleaires
 HORMONES STEROIDES
Ces molecules diffusent à travers la membrane
plasmique et se lient sur des Recepteurs dans le
cytoplasme ou le noyau.
Dérivés du cholesterol.

steroides sexuels (oestrogène, progesterone,

testosterone)
corticosteroids (glucocorticoides et
mineralcorticoides)

-Hormone thyroidiennes
-Vitamin D3
-acide retinoique
structures et fonctions differentes
mais même mechanisme d’action

Superfamille de Recepteurs Steroides: facteurs de

transcription - fonctionnent soit comme activateurs ou
represseurs de la transcription.
 Recepteurs Nucleaires
Recepteurs Steroides Recepteurs Class ll Recepteurs orphelins

GR Glucocorticoides VDR, PPAR NGFI-B

PR Progesterone TR, FXR SF-I
AR Androgene RXR, LXR ERR
RAR, PXR ReVERB
ER Oestrogene

SR SR NR RXR NR

Palindrome HREs Direct Repeat HREs Halfsite HREs

AGAACA-N3-TGTTCT GRE/PRE AAA-ACGGTCA NBRE
ACGGTCA-N1-5-AGGTCA
AGGTCA-N3-TGACCT ERE TCA-AGGTCA SFRE
 Action des Recepteurs de
Steroides : liaison directe sur ADN
Cytoplasm
Ligand

Cell specific Nucleus

Response SR

SR SR

Protein 1
SR SR
HRE
1. Liaison directe
sur ADN mRNA
 Action des Recepteurs de Steroides :
Proteine/Proteine
Cytoplasm
Ligand

Cell specific Nucleus

Response SR

SR SR 2
1
Protein SR
SR SR TF TF
1. Interactions directes
HRE
2. interactions proteine- mRNA
proteine indirectes
Recepteur de Steroides
Co-regulateurs
• Proteines qui interagissent avec
receptors steroides non-liguandés ou
liguandés et modulent leur action
– Co-activateurs
– Co-represseurs
 Activation/Repression
ACTIVATION
CBP pCAF
SRC SRC Remodellage de chromosome
acetylation d’histone
SR SR TFII-B Transcription
TBP
α RNA
Pol.

REPRESSION
Sin3 mRPD3
Sin3 condensation de chromosome
NCoR/SMRT deacetylation d’histone
PAS de transcription
SR SR
 Role des Co-activateurs et
Co-represseurs en pathologie
 Tamoxifen: antagoniste d’oestrogènes en
presence de corepresseurs in vitro
 Une baisse de N-CoR detectée dans les
cellules tumorales Tamoxifen-resistantes
MCF-7 (cancer du sein)
 Suggère que le niveau de co-activateurs ou
co-represseurs peut moduler le phenotype
 Quelques données cliniques vont dans ce
sens