3.propriétés Et Techniques
3.propriétés Et Techniques
3.propriétés Et Techniques
Chapitre 3 :
Acides aminés et protéines :
propriétés générales et technique
de purification et d’identification
Extraction/purification
Broyage, homogénéisation, désintégration par ultrasons,
solubilisation par détergents
Dialyse
Force ionique
Influence du
pH et de la
force ionique
sur la
solubilité
Précipitation réversible
d’une protéine
Lyophilisation des protéines
La structure
tridimensionnelle
des protéines est
conservée
Lyophilisateur
b - Filtration moléculaire - chromatographie
tamis moléculaire – évaluation des masses moléculaires
Filtration sur gel ou gel-filtration
Ultracentrifugation préparative
2 types d’ultracentrifugation préparative
Matrice
3 - Désorption
4 - régénération du ligand
d - Charge électrique - électrophorèses
Electrophorèse sur support
Migration dans un champ électrique
Appareils
d’électrophorèse:
- horizontal
- vertical +
Séparation de 3 protéines de
pHi différents
Séparation des protéines du sérum humain par
électrophorèse sur acétate de cellulose
Albumine
%
Globulines
55
5
10
14
16
+ SDS
MM
2 bandes 1 bande
Analyse du protéome
Associations stéréospécifique Ag - Ac
• Marqueurs radioactifs
• Marqueurs enzymatiques
Dosage immunochimique avec
marqueur
Dosage radioimmunologique (RIA)
Mesure de D.O.
kUI/l Ig E
3 - Technique d’électrophorèse
combinée à une immunoanalyse
Electroimmunotransfert ou Immunoblotting
Western blot
1
2
3
PAGE - SDS
Transfert sur membrane
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