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TP N° 01 : TECHNIQUES DE CARACTERISATION EN MYCOLOGIE
1. Règles à suivre durant les travaux pratiques en mycologie

Se familiariser avec un laboratoire, son équipement et son fonctionnement
Visite des locaux :
- Structure
- Présentation des gros matériels (étuves, autoclave etc.)
Présentation d'un poste de travail :
- Matériels (bec bunsen, pipettes, verres, béchers anse, pinces lame etc.)
- Produits (eau, alcool, colorants divers etc.)
Les consignes de sécurité :

- Procéder à un lavage minutieux des mains, avec brossage des ongles avant et après
les manipulations, et avant toute sortie même momentanée de la salle de TP.
- Éviter les ouvertures des fenêtres pendant les manipulations.
- Ouvrir avec précaution les récipients contenant des cultures microbiennes, afin
d'éviter toute projection.
- Flamber, avant et après manipulations, les anses métalliques utilisées pour les
prélèvements, en commençant par chauffer la partie moyenne de l'instrument afin de
dessécher les restes de culture avant de porter l'extrémité dans la flamme, ceci pour
éviter toute projection.
- Prévenir immédiatement le responsable de TP en cas de bris d'un récipient contenant
une culture en cas de contamination accidentelle d'un manipulateur ou tout incident
dispersant le matériel microbien.
-Interdiction formelle de boire, manger et fumer pendant les TP.
-Stériliser tout le matériel à la fin de la manipulation.
-Prendre toutes dispositions indispensables pour la mise à l'abri des souches
microbiennes ainsi que leur destruction afin d'éviter toute contamination.
2. Introduction à la mycologie
2.1. Caractéristiques des champignons
 Organismes unicellulaires ou pluricellulaires dont les cellules possèdent un
noyau (eucaryote)
 Se nourrissent par absorption et utilisent le carbone organique comme source de
carbone (ce sont des hétérotrophes)
 Leur paroi cellulaire contient typiquement de la chitine
 Ils peuvent se reproduire de façon sexuée et/ou asexuée
 Plus de 100 000 espèces connues
 Ils sont pour la plupart saprophytes; moins de 0,5 % sont reconnus pathogènes
2.2. Identification des champignons
2.2.1. Isolement : permet d'isoler une ou plusieurs souches contenues dans un
échantillon, dans un organe ou dans un prélèvement en utilisant des milieux de culture
sélectifs pour les différencier. : il y aura autant de colonies différentes que de souches
différentes.
2.2.2. Purification : permet d’obtenir des cultures pures à partir des souches obtenues
après isolement soit par repiquage successif soit par la technique de culture monospore,
cette dernière permet d'obtenir une culture pure à partir des spores fongiques (figure ci-
dessous).
2.2.3. Etude macroscopique : se fait à l’œil nu, elle se base essentiellement sur :
a) Texture
 laineuse : mycélium aérien abondant
 duveteux : mycélium aérien court
 poudreux : mycélium aérien produisant de nombreuses conidies créant une
surface d'apparence poudreuse semblable à du sucre ou de la farine
 glabre : mycélium aérien peu abondant avec surface lisse
b) Topographie : plane, surélevée, avec stries radiales
c) Couleur : surface, revers, pigment : brun, gris, noir = champignon dématié ou
champignon noir, blanc ou autre couleur (rouge, vert, jaune, mauve, etc.) = champignon
hyalin
d) Vitesse de croissance (diamètre de la colonie à 7 jours)
 rapide : ≥ 3 cm
 modérée : entre 1 et 3 cm
 lente : ≤ 1 cm
2.2.4. Etude microscopique : au microscope avec des liquides de montage tels que : Eau
distillée, Bleu de coton, Bleu de méthylène, fuchsine etc. Elle se base essentiellement sur :
a) hyphes : septés, non septés, larges (> 4 µm), étroits (< 4 µm)
b) conidiophores (organe portant les spores) : absents, simples, ramifiés
c) cellules conidiogènes : ex : phialide.
d) conidies : uni- ou pluricellulaires, solitaires, en amas ou en chaînes, forme (ronde,
ovale, en amas etc.)
e) organes de fructification : périthèces, cléistothèces (sexué), pycnides (asexué)
plus de détails durant le cours

Les principaux milieux de culture utilisé en mycologie :
GÉLOSE SABOURAUD Peptone GÉLOSE PDA GÉLOSE PCA

10 g Pommes de terre 200 g Pois-chiche 20,0 g
Glucose 40 g Glucose 20 g Glucose 20 g
Agar15 g Agar 15 g Agar 15 g
Eau ...........................1000 ml Eau 1000 ml Eau 1000 ml
pH final 5,6 pH final 5,6 pH 6
Milieu Czapex (nitrate de sodium Gélose à l'extrait de Malt GÉLOSE PCB
comme seule source d'azote) Extrait de malt 30,0 g Carottes 20,0 g
Agar 15 g Pommes de terre 20,0 g
pH = 5,5 bile de bœuf 150 ml
Agar 25.0 g
pH 7.2

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