tp1 - KH

République algérienne et démocratique et populaire.
Ministère de l’enseignement supérieur et de la recherche scientifique.

UNIVERSITE M'HAMED BOUGUERRA-
BOUMERDES.
Faculté de technologie
Filière : Génie des procédés
Option : Génie de l’environnement
Tp1. Présentation du laboratoire de microbiologie, matériel

et règles à suivre durant les travaux de microbiologie
Réalisé par :
 Boulerbah khadidja
Année universitaire 2019/2020.

TP N° 1 – Présentation du laboratoire de microbiologie, matériel et règles à suivre durant
les travaux pratiques de microbiologie
Objectifs :
Se familiariser avec un laboratoire de microbiologie, son équipement et son fonctionnement
Visite des locaux :
- Structure
- Présentation des gros matériels (étuves, autoclave, bain marie … )
2. Présentation d'un poste de travail :
- Matériels (bec bunsen, pipettes, verres, béchers anse, pinces lame,...),
- Produits (eau, alcool, colorants divers,….)
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3. Les consignes de sécurité :
- Procéder à un lavage minutieux des mains, avec brossage des ongles avant et après les
manipulations, et avant toute sortie même momentanée de la salle de TP.
- Éviter les ouvertures des fenêtres pendant les manipulations
- Ouvrir avec précaution les récipients contenant des cultures microbiennes, afin d'éviter toute
projection.
- Flamber, avant et après manipulations, les anses métalliques utilisées pour les prélèvements,
en commençant par chauffer la partie moyenne de l'instrument afin de dessécher les restes de
culture avant de porter l'extrémité dans la flamme, ceci pour éviter toute projection.
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- Prévenir immédiatement le responsable de TP en cas de bris d'un récipient contenant une
culture en cas de contamination accidentelle d'un manipulateur ou tout incident dispersant
le matériel microbien.
-Interdiction formelle de boire, manger et fumer pendant les TP
-Stériliser tout le matériel septique à la fin de la manipulation
-Prendre toutes dispositions indispensables pour la mise à l'abri des souches microbiennes
+ainsi que leur destruction afin d'éviter toute contamination.
 Stérilisation :
-La stérilisation est l'opération qui consiste à éliminer les micro-organismes d'un objet, et ce
de manière durable. En microbiologie, le but de la stérilisation est d'une part de maîtriser les
micro-organismes introduits dans le milieu d'étude, et d'autre part d'éviter la contamination du
milieu extérieur et des personnes. Il existe deux grands moyens de Stérilisation :
1. La chaleur
2. La filtration
I. Stérilisation par chaleur :
-La chaleur détruit les bactéries et les spores. On distingue les procédés à chaleur
« Sèche » ou « humide ».
1. Chaleur sèche :
a. Flambage :
-Le passage dans la flamme (bec BUNSEN) de la surface de
matériel non inflammable assure une parfaite stérilisation. On
stérilise de cette façon les fils de platine et les pipettes Pasteurs.
b. Four pasteur :
C'est un four-étuve à air chaud et sec. Il est utilisé à 180°C pendant 90 minutes. Cet appareil n'est
utilisé que pour la stérilisation de la verrerie préalablement nettoyée et séchée ou de matériels
métalliques (instruments de dissection) pouvant tolérer de très hautes températures.
Le matériel ainsi stérilisé sera laissé dans l’étuve jusqu’à son refroidissement complet, puis
stocké à l’abri des poussières.
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2. Chaleur humide :
La stérilisation par la chaleur humide, reconnaît trois modalités:
-la stérilisation à l’autoclave
-La Pasteurisation
-La Tyndallisation
a. Autoclave :
C’est un appareil indispensable dans un laboratoire de microbiologie. Le chauffage a lieu
sous pression de vapeur d’eau, à une température de 120°C pendant une durée qui varie en
fonction du milieu, de la température utilisée et du volume des récipients. Ce procédé tue
toutes les cellules végétatives et les endospores.
a. Pasteurisation :
La pasteurisation est un traitement à chaud de liquides, tuant des pathogènes mais pas
forcément toutes les bactéries. Les températures de la pasteurisation se situent entre
75 à 80°C.
b. Tyndallisation :
La tyndallisation est une série de 3 chauffages brefs à des températures de 70°C à
intervalles réguliers, ceci afin de laisser aux formes résistantes la possibilité de
germer pour les tuer au chauffage suivant.
Par exemple la destruction des pathogènes du lait se fait par un cycle de 63°C pendant 30
minutes suivie de 73°C pendant 15 minutes.
II. Filtration :
La filtration est une technique qui consiste à faire passer un liquide à travers un filtre
dont les pores ont un diamètre de 0,2 µm. Les micro-organismes sont trop gros et sont
donc retenus par le filtre.
Cette technique est intéressante lors d'utilisation de produits thermolabiles comme
certains acides aminés aromatiques, vitamines, hormones de croissance, acides
nucléiques et une bonne partie des antibiotiques.
III. Autres procédés de stérilisation :

Certaines matières (Plastiques, Caoutchoucs …) ne tolèrent pas l’autoclave ou se
détériorent rapidement après des expositions répétées à la chaleur.
 Radiations :
La stérilisation par les U.V. est utilisée au laboratoire pour la décontamination de l’air et
des paillasses situées sous la hotte de protection. Le rayonnement n’agit que de façon
directe et sa pénétration est faible. D’autres radiations (rayons X), peuvent servir pour la
stérilisation industrielle des boites de Pétri en matière plastique et de produit
pharmaceutiques.
 Agents chimiques :
Ils sont utilisés en général pour la désinfection des salles de travail et pour la destruction
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des germes portés par des instruments souillés. Ce mode de stérilisation doit être
systématiquement pratiqué dans le laboratoire pour les lames et pour la verrerie qui ne
passe pas en autoclave.
4. Conseils généraux :
-Le port de la blouse est obligatoire
-Apporter une pince fine et un marqueur permanent (pointe fine)
-Travailler dans des conditions d’asepsie près de la source de chaleur et en reproduisant les
gestes du démonstrateur. Par exemple : comment tenir le tube, le bouchon, la pipette ou
l'anse de platine utilisée pour l'ensemencement.
-Repérer les boîtes de chaque binôme à l'aide de vos initiales sur le fond de la boîte.

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III. Autres procédés de stérilisation :

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