http://www.takween.

com
Techniques-Sommaire : http://www.takween.com/techniques/techniques-biochimie.html
Electrophorèse : http://www.takween.com/techniques/05_Electrophorese.html
Travaux dirigés (TD) : http://www.takween.com/techniques/15_TD.pdf
Travaux dirigés (TP) : http://www.takween.com/techniques/14_TP.pdf
Isoenzymes-mutations : http://www.takween.com/techniques/isoenzymes-mutations.pdf
Isozymes. Principe de détection : http://www.takween.com/techniques/isoenzymes-detection.pdf
Isozymes : loci, allèles : http://www.takween.com/techniques/isoenzymes-loci-alleles.pdf
RAPD : http://www.takween.com/techniques/11_RAPD.pdf
AFLP : http://www.takween.com/techniques/13_AFLP.pdf
SSR (microsatellites) : http://www.takween.com/techniques/microsatellites-SSR-marqueurs.pdf

ETUDE DE LA DIVERSITE GENETIQUE DES POPULATIONS

A L’AIDE DU POLYMORPHISME ENZYMATIQUE

1. INTRODUCTION
Une population est souvent définie comme un ensemble de plantes de la
même espèce, de même niveau de ploïdie, de même mode de reproduction et
occupant le même habitat. Les populations très étendues géographiquement
peuvent être découpées par l’échantillonnage en sous-populations. La définition de
la population reste complexe. C’est souvent un échantillon dont l’expérimentateur
définira selon la manière dont il est constitué.
Le polymorphisme génétique d’une population représente la réserve de
variabilité nécessaire qui permet à la population de s’adapter à de nouvelles
conditions du milieu. La variabilité génétique reste, donc, le garant de la colonisation
d’habitats marginaux par les espèces polymorphes. L’un des facteurs du maintien du
polymorphisme des populations réside dans l’effet de l’hétérosis qui peut être définie
comme l’avantage déterminé par l’état hétérogène de nombreux loci. On parle de
superdominance ou overdominance lorsque l’effet hétérosis est produit par l’état
hétérozygote d’un seul locus.
L’évaluation des distances génétiques entre les populations nécessite, d’abord,
l’étude de leurs polymorphismes, séparément. Ainsi, l’étude de la variabilité
intrapopulation précède toujours l’étude de la variation interpopulation.

2. FREQUENCES GENOTYPIQUES ET FREQUENCES ALLELIQUES

D’UNE POPULATION POUR UN LOCUS DONNE

Pour un locus donné, on détermine les différents génotypes présents dans une
population. Ceci permet de définir les fréquences génotypiques. Si les individus sont
diploïdes, la présence de 2 allèles (identiques ou différents) sera notée pour chaque
locus. S’ils sont tétraploïdes, 4 allèles seront recensés par génotype. Ainsi, les
fréquences allèliques sont déduites des fréquences génotypiques.
Exemple : pour un locus A, les fréquences génotypiques et allèliques d’une
population à N individus diploïdes sont les suivantes :
Génotypes Effectifs * Fréquences génotypiques

A1A1 N11 P11 = N11/N

A1A2 N12 P12 = N12/N
A2A2 N22 P22 = N22/N

* P1 + P2 = 1

Allèles Effectifs * Fréquences allèliques

A1 2 N11 + N12 P1 = (2 N11 + N12)/2N

A2 2 N22 + N12 P2 = (2 N22 + N12)/2N

* P1 + P2 = 1
Les études isoenzymatiques (méthodes électrophorétiques) sont actuellement
plus satisfaisantes pour évaluer les structures génotypiques d’une population
donnée.

3. EXPRESSION DE LA DIVERSITE GENETIQUE AU NIVEAU

INTRAPOPULATION.

- TAUX DE POLYMORPHISME (P)

La proportion de locus polymorphes, encore appelée taux de polymorphisme ou
plus simplement polymorphisme (P), rend compte de la proportion de protéines
variables par rapport à l'ensemble des protéines étudiées. Une population sera dite
polymorphe pour un locus donné, si la fréquence allélique de l'allèle le plus fréquent
est inférieure à 0,95. Ne pouvant traiter différemment les gènes très ou peu
polymorphes et dépendant du critère utilisé (95%, 99%), ce paramètre présente un
intérêt limité.
Les méthodes d’évaluation des états allèliques et des génotypes ne concernent
pas tous les loci. On n’étudie une population qu’à travers les loci pour lesquels les
génotypes sont faciles à distinguer. Ainsi, les méthodes actuelles ne permettent de
révéler les génotypes que d’une fraction d’environ 1% des loci structuraux qui
composent le génome d’une plante.
La signification biologique et adaptative du polymorphisme d’une population est
encore un sujet de controverse scientifique. Il pourrait servir pour l’explication des
facultés d’adaptation des populations à des milieux hétérogènes, dans le temps et
dans l’espace. Le polymorphisme peut être entretenu par des transferts génétiques
récurrents entre populations.

- NOMBRE MOYEN D’ALLELES PAR LOCUS (A)

Le nombre moyen d'allèles par locus (A), appelé également taux d’allélisme ou
richesse allélique, est défini pour ni allèles au locus i et pour L loci comme :
 1 L
A = ∑ ni
L i =1
Exemple : pour 3 loci numéroté 1, 2 et 3 ayant respectivement 2, 3 et 2 allèles,
A = (2 + 3 + 2)/3 = 2,33
Si les paramètres de diversité génétique intra- et interpopulations (diversité de Nei,
distance génétique et paramètres de différenciation génétique) sont estimées sur la
base des différences entre les fréquences alléliques, le taux d’allélisme tient compte
du nombre d’allèles par locus. Par conséquence, la mesure de ce paramètre est
particulièrement importante pour les stratégies de conservation. Il était souvent utilisé
dans la gestion des collectes et des banques de semences (Asins et Carbonell,
1987; Bataillon et al., 1996).

- TAUX D’HETEROZYGOTIE (he et ho)

L'hétérzygotie (diversité génétique de Nei (1973), ho (observed heterozygosity)

peut être calculée à partir de la fréquence mesurée des hétérozygotes (nombre des
individus hétérozygotes divisé par le nombre total des individus de l'échantillon). De
même, dans une population panmictique la fréquence théorique des hétérozygotes
he (expected heterozygosity) à un locus peut être calculée à partir des fréquences
alléliques. S'il y a n allèles avec les fréquences f1, f2, f3, ...fn, la fréquence
théorique des hétérozygotes sera :

(f )
n
h e = 1− + f 2 + f 3 + ... + f n = 1− ∑ f n
2 2 2 2 2
1
n =1
Si plusieurs loci sont considérés, l’hétérozygotie moyenne (He), représentant la
moyenne du taux d’individus hétérozygotes par population, sera la moyenne
arithmétique de toutes les valeurs de he :
He = (∑ he)/L, avec L = nombre de loci.
- INDICE DE FIXATION (FIS)

Le paramètre FIS de Wright, dénommé aussi indice de fixation et appelé

auparavant coefficient de consanguinité (Wright, 1969) est calculé selon la formule :

Fis = (he - ho)/ he = 1 – (ho/he)

avec hO, l’hétérozygotie observée et he l’hétérozygotie attendue, calculée à partir des
fréquences alléliques dans l’hypothèse de Hardy-Weinberg.
Il reflète la différenciation des individus à l’intérieur des populations (FIS = 1 signifie
fixation complète (cas d’autofécondation), FIS inférieur à 1 : hétérozygotie
excédentaire, FIS = 0 : population en équilibre de Hardy-Weinberg. FIS < 0 :
hétérozygotie excédentaire,
4. EXPRESSION DE LA DIVERSITE GENETIQUE AU NIVEAU
INTERPOPULATION ET DISTANCE GENETIQUE.

- PARAMETRES DE DIFFERENCIATION.

Paramètres FST, GST

Wright (1965-1978) a défini l’indice FST (variance standardisée) comme

l’hétérogénéité des fréquences alléliques entre subdivisions d’une population. Il
représente la corrélation entre allèles à l’intérieur d’une sous-population par rapport à
l’ensemble des sous populations. Ce paramètre est utilisé d’une façon hiérarchique.
Soit T, un ensemble formé de S populations dont chacune est composée de I
individus. La différenciation des populations par rapport au total (FST) est calculée en
fonction des paramètres FIS (différenciation des individus à l’intérieur des
populations) et FIT (différenciation des individus par rapport au total). Ils sont liés par
la relation :

(1 − FIT )
FST = 1 − (1 −
FIS)
D’après Wright, 1978 : 0 < FST < 0,05 : différenciation faible
0,05 < FST < 0,15 : différenciation modérée
0,15 < FST < 0,25 : différenciation importante
FST > 0,25 : différenciation très importante

S’il existe une ou plusieurs subdivisions hiérarchiques, elles seront prises en compte
dans l’expression mathématique de la différenciation. Ainsi, par exemple, une
hiérarchie selon la localité permet de réécrire les formules de différenciation comme
suivant :

(1-FIT) = (1-FIS) (1-FSL) (1-FLT).

(1-FST) = (1-FSL) (1-FLT).
avec : FSL, la différenciation des populations à l’intérieur de la localité et FLT, la
différenciation des localités par rapport au total.
Le paramètre FST est souvent remplacé par un paramètre analogue, le GST, défini par
la formule :

G ST
= (HT − HS ) H T
= 1 − (HS H)
T .

HS étant la moyenne (sur toutes les populations) des diversités génétiques

intrapopulation et HT, la diversité génétique sur l’ensemble des populations
considérées comme une seule population (diversité totale). Lorsqu’il s’agit de
plusieurs loci, HS et HT deviennent les moyennes (sur l’ensemble des loci) des
diversités précédentes. Dans la littérature, (HT - HS) est, parfois, remplacée par DST
(diversité entre les populations). Ainsi, on aura :

GST = DST HT .

Donc, la diversité totale peut être subdivisée en une composante

intrapopulation (HS) et interpopulation (DST) : HT = HS + DST. Ainsi, GST représente la
part (%) de la diversité interpopulation par rapport à la diversité totale.
Si les populations peuvent être regroupées (en localités, par exemple) la DST
pourra être, de nouveau, subdivisée en composantes intralocalité (DSL) et
interlocalité (DLT) (DST = DSL + DLT). On aura : HT = HS + DSL + DLT.
Chacune des composantes peut être exprimée comme un rapport à la diversité
totale:

GS = HS/HT, GSL = DSL/ HT, GLT = DLT/ HT avec, GST = GSL+ GLT

Par ailleurs, Il est possible de quantifier le flux de gènes entre populations, dans un
modèle théorique dit ‘en île’, par le calcul du nombre de migrants par génération (Nm)
qui peut être mesuré indirectement à l’aide du GST. L’expression de Nm devient alors
selon Slatkin et Barton (1989) :

(1 − G )
Nm = ST
2
n
4 G ST ( )
n−1
où n indique le nombre de populations.
Plus la valeur de Nm est supérieure à 1, plus l’échange de gènes est important.

Distance génétique (D).

En se basant sur les fréquences alléliques, les degrés de ressemblance et de

dissemblance entre les populations peuvent être évalués. L’indice d’identité de Nei
(1972) est d’abord calculé. Soit un locus donné où xi est la fréquence du ième allèle
dans la population X et yi celle du même allèle au même locus dans la population Y.
La probabilité d’identité des 2 allèles pris au hasard au sein de la population X est :
2 2
Px = ∑ xi . De même pour la population Y, cette probabilité est: Py = ∑ yi . La
probabilité d’identité des 2 allèles pris au hasard, l’un dans X et l’autre dans Y, est:
Pxy = ∑ xi y . L’indice d’identité de Nei entre les 2 populations (sur la base du locus
i
considéré) est :
1
I = Pxy (P xP y ) 2
.

Pour plusieurs loci on calcule la moyenne des probabilités sur l’ensemble des loci
étudiés. La distance génétique est :
D = - Log I
Si les deux populations possèdent les mêmes allèles à des fréquences
identiques on aura :
La détermination des distances génétiques entre populations permet d’évaluer le
degré de ressemblance de leurs structures génétiques. Elle peut servir, également,
pour montrer si des groupes de plantes prétendus appartenir à des espèces
différentes, font partie ou non d’un même complexe d’espèces.

Interprétations de D. Exemples.

1/ Les distances génétiques calculées sur les polymorphismes enzymatiques des

populations naturelles variées d’organismes autres que les Mammifères supérieures
(primates), sont inférieures à 0,02 (différence d’AA par protéine moyenne) pour des
populations appartenant à la même espèce. Les distances entre espèces bien
isolées reproductivement, mais du même genre, sont de l’ordre de 0,10 à 1,00
(même espèce).
Si les distances génétiques testées sur des systèmes enzymatiques non compromis
par la différenciation liée à la domestication, sont faibles (D<0,10), on pourra
suggérer qu’il n’y a pas de barrière reproductive absolue entre les deux populations
étudiées.

2/ Une distance génétique entre 2 populations P et Q égale à 0,20 (DPQ = 0,2)

signifie qu’en moyenne 20% des protéines d’un individu de la population P diffère par
un autre AA des protéines homologues d’un individu de la population Q. Si P et Q
étaient complètement isolées depuis leur séparation, on estime que cette séparation
a eu lieu 0,20 x 106 = 200000 ans auparavant.
La distance génétique entre deux populations non complètement isolées n’augmente
pas indéfiniment au cours du temps.
5
Selon Nei 1971, le temps de divergence (t) est donné par la formule : t = 7,4.10 .D
6
Selon Nei, 1975, t = 7,4.10 .D

3/ Les groupes de gènes dont on peut penser qu’ils sont directement liés au
processus d’adaptation, sont à écarter dans les études de distances génétiques, car
ils seraient suspectés d’accentuer les distances.
Dendrogramme

Un dendrogramme peut être construit sur la base des distances génétiques ou des
bandes des profils électrophorétiques des izoenzymes. Il représente donc une
classification qui a pour but d'obtenir une représentation schématique simple d'un
tableau des données dont les colonnes (variables) caractérisent l'ensemble des
lignes (populations ou espèces). Il permet de visualiser les regroupements possibles
de ces dernières, et en répartissant des entités en groupes (classes) homogènes,
chaque groupe étant bien différencié des autres.
Tous les paramètre de la mesure de la diversité génétique intrapopulation et
interpopulation décrits précédemment, peuvent être déterminés à l’aide du logiciel
Biosys-1 (Swofford & Selander, 1981).

5. STRUCTURATION DE LA DIVERSITE ET CONSERVATION DES

RESSOURCES GENETIQUES.
Structuration de la diversité génétique.

La décomposition de la diversité totale en 2 composantes liées à la diversité de

chaque population et sa différenciation par rapport au reste constitue une approche
méthodologique adaptée à la conservation. La particularité de chaque population
peut, ainsi, être mise en évidence. Une population ayant une diversité génétique plus
élevée n’est pas nécessairement la plus différenciée des autres populations (HT = HS
+ DST).
Dans la littérature, c’est surtout le GST qui est utilisé pour mesurer le degré de
différenciation entre les populations.
Les espèces à large distribution, ayant un flux génétique très élevé, montrent
des GST très faibles, pouvant chuter à moins de 4%. C’est le cas de plusieurs
espèces forestières comme les chênes (Quercus robur (Zanetto et al., 1994) et
Quercus ilex (Michaud et al., 1995)).
A l’inverse, de fortes différenciations entre populations ont été trouvées chez
des espèces à aire de répartition morcelée ou à distribution discontinue, comme
Pinus torreyana (GST = 1,00) (Ledig & Conkle, 1983), Pinus halepensis (GST =
0,30)(Schiller et al., 1986) et Pinus brutia (GST = 0,16)(Conkle et al., 1988).
Une étude synthétique portant sur 322 espèces ligneuses a été faite par
Hamrick et al. (1992) qui ont comparé les résultats des diversités intrapopulation (y
compris les locus monomorphes) et interpopulation. Il s’est avéré que la distribution
géographique de l’espèce est un bon prédicteur de la variation génétique entre les
populations (aires endémique, régionale ou continentale). De plus, les espèces à
large distribution présentent un pourcentage de loci polymorphes et une diversité
intrapopulation plus élevés.