Mémoire Finale Probiotiques 2020 PDF
Mémoire Finale Probiotiques 2020 PDF
Mémoire Finale Probiotiques 2020 PDF
Mémoire
Présenté par :
Fadel Oumayma
Bekhouche Maroua
Adjadj Amina
Boudehane Nour El Houda
Pour l’obtention du diplôme de
Master
Filière : Sciences Biologiques
Spécialité : MICROBIOLOGIE Appliquée
Thème
L’activité antimicrobienne des probiotiques contre les entéropathogènes
Soutenu en ligne le 23/09/2020
Devant le jury :
Mlle. Kerbab Souhila MAA, Batna 2 Président
Mme. Boukhtache Hadjer MCB, Batna 2 Promoteur
Mme. Cheriet Dehbia MCB, Batna 2 Examinateur
Année universitaire 2019/2020
Dédicaces
voir réussir, que dieu te garde dans son vaste paradis, à toi mon Père.
Aux personnes dont j’ai bien aimé, à tous mes frères Mohamed Islam
travail dont le grand plaisir leurs revient en premier lieu pour leurs
Ouidjdane Djamila.
OUMAYMA
i
Dédicaces
Anes.
Romayssa.
A mes enseignants
A vous...
Maroua
ii
Dédicaces
Louiza que j’adore, pour tous ces sacrifices, son amour, son soutien et
l’amour que j’ai pour vous, Votre joie et votre gaieté me comblent de
AMINA
iii
Dédicace
A ma chère Mère
Nour El Houda
iv
Remerciements
mémoire.
chef de département et tous nos enseignants qui nous ont fourni les
du fond du cœur.
v
الملخص
أهم الكائنات، إلظهار فعاليتها ضد الميكروبات، تم دراسة تأثير البروبيوتيك على الجراثيم المعوية،في هذا البحث
. مكوناتها النشطة وكذلك آليات عملها في المختبر وفي الجسم الحي،الحية الدقيقة المستخدمة
:الكلمات المفتاحية
Résumé :
Dans cette recherche, l’action des probiotiques contre les germes entropathogènes est
étudiée, pour montrer leurs effets antimicrobien, les principaux micro-organismes utilisées,
leurs principe actifs ainsi que leurs mécanismes d’action in vitro et in vivo.
Mots clés :
Abstract:
In this research, the probiotics action against entropathogenic germs is studied, to show
their antimicrobial effects, the microorganisms used, their active principles, as well their action
mechanisms in vitro and in vivo.
Keywords:
vi
Liste des abréviations
B : Bifidobacterium.
E : Escherichia.
HT-29 : Lignée cellulaire du cancer du côlon humain largement utilisée dans les
recherches biologique.
PH : Potentiel d’hydrogène.
vii
Table des matières
Introduction ………………………………………………………….…………………….... 1
Pathogènes …………………………………..…………………………………….. 2
viii
Table des matières
Annexes
ix
Liste des tableaux
x
Liste des figures
bactéries pathogènes.
xi
Liste des annexes
xii
Introduction
Introduction
Depuis quelques années, les probiotiques ayant des effets bénéfiques sur la santé,
connaissent une importance croissante vue l’augmentation de la demande des consommateurs
pour des substituts naturels aux médicaments et l’émergence d’évidences scientifiques et
cliniques démontrant l’efficacité de certaines de ces souches (Drouault et Corthier, 2001).
L’utilisation historique des probiotiques en nutrition humaine fait que ces bactéries sont
considérées comme sans risque et sélectionnées essentiellement pour leurs propriétés
technologiques à savoir la survie et la persistance dans l’environnement dans lequel ils doivent
agir, la tolérance à l’acidité gastrique et les sels biliaires, l’adhérence aux cellules épithéliales
et la production de substances antimicrobiennes (Nguyen et al., 2010). Grâce à ces propriétés,
l’utilisation des probiotiques permet de satisfaire les besoins de point de vue sanitaire et
d’inhiber la prolifération des microorganismes pathogènes tels que Bacillus, Clostridium,
Enterococcus, Escherischia coli, Listeria, Pseudomonas, Salmonella, Staphylococcus et
Yersinia ... (Nguyen et al., 2010).
À ce jour, les moyens généralement utilisés pour lutter contre les entéropathogènes sont
l’antibiothérapie et la vaccination. Cependant, la résistance de ces micro-organismes aux
antibiotiques et le manque de vaccins pour plusieurs pathogènes entériques rendent nécessaire
le développement de nouveaux traitements ou alternatifs on l’occurrence les probiotiques d’où
on a tiré l’objectif de notre recherche.
1
Chapitre I : Les probiotiques
Les probiotiques sont des microorganismes vivants qui, lorsqu’ils sont ingérés en quantité
suffisante, confèrent un bénéfice pour la santé. Se sont principalement des bactéries et des
levures présentes ou réintroduites dans la flore intestinale pour réduire les désordres intestinaux
et améliorer l’hygiène digestive (Gaggia et al., 2010). Leur mode d’action et leur efficacité
dépend de la souche et la dose administrées (Rofes, 2014).
Les probiotiques sont disponibles sous différents types de produits. Ils peuvent être
consommés sous forme de suppléments alimentaires en capsules contenant des cultures viables
lyophilisées ou sous forme de produits alimentaires fermentés tels que les yogourts, les boissons
lactées, les jus de fruits et les fromages (Sanders, 2003).
L’utilisation des mêmes substrats présents dans la lumière intestinale aboutit à la baisse
de quantité des nutriments disponibles se qui rend l’environnement peu favorable à la
croissance des pathogènes (Wealleans et Litten-Brown, 2010).
2
Chapitre I : Les probiotiques
Cette priorité est adoptée aux bactéries tels que (Lactobacillus, Bifidobacterium et
certaines espèces d’Enterococcus) ayant la faculté de former des biofilms contribuant à bloquer
l’accès des pathogènes aux sites d’adhésion (Rastall et al., 2000).
Les probiotiques ont démontré leur efficacité à prévenir certaines maladies chroniques
telles que la maladie de Crohn, l'obésité et le diabète (Schultz et al., 2004). D’autres travaux
laissent présager que ces microorganismes pourraient également jouer un rôle important dans
la modulation du système immunitaire (Matsuzaki et Chin 2000) et la prévention du cancer
du côlon (Wollowski et al., 2001).
Les probiotiques sont généralement ingérés avec les aliments et doivent arriver vivant à
l’intestin durant leur transit dans le tube digestif (Piquepaille, 2013). Cette survie commence
d'abord par l’acidité gastrique, leur capacité à tolérer le pH du suc gastrique leur permet de
résister plus longtemps aux conditions de l’estomac (Piquepaille, 2013). De plus, les
probiotiques doivent résister à l’action des sels biliaires produits dans le duodénum sous l’effet
de la BSH (Piquepaille, 2013). Comme ils doivent avoir une résistance aux enzymes digestives
libérées dans l’intestin (Piquepaille, 2013).
3
Chapitre I : Les probiotiques
l’intestin et tenir plus longtemps (Gueimonde et al., 2006). De plus, les probiotiques adhérents
sont en contact direct avec les cellules immunitaires de l’épithélium intestinal, ils peuvent donc
moduler ou stimuler le système immunitaire (Saarela et al., 2000).
Les probiotiques doivent essentiellement maintenir des conditions sanitaires dans le tube
digestif, tout on inhibant le développement des germes indésirables. Pour atteindre cet objectif,
plusieurs mécanismes d’action sont envisagés (Bevilacqua et al., 2003) :
La compétition pour les nutriments, ce qui provoque une diminution de la quantité des
substrats disponibles pour les germes indésirables.
le peroxyde d’hydrogène (H2O2) : qui agit sur la membrane et peut aussi endommager
l’ADN par la formation des radicaux libres (Dobson et al., 2007).
Les acides organiques : L’acidification du milieu agit contre les germes pathogènes se
trouvant dans le tube digestif (Dunne et al., 2001).
Les souches probiotiques doivent être identifiées par des méthodes fiables à l’échelle
phénotypique et génotypique (Holzapfel et al., 2001a) par des techniques moléculaires et
confrontée à une nomenclature internationale (Gueimonde et Salminen, 2006).
Un microorganisme probiotique doit être caractérisé par une innocuité totale pour le
consommateur, c’est-à-dire être non toxique et exempte de toute pathogénicité et ne présente
aucune propriété indésirable possible : résistance aux antibiotiques, cytotoxicité et activité
hémolytique (Butel, 2014).
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Chapitre I : Les probiotiques
I.3.2.3 Origine
Les souches probiotiques d’origine humaine sont plus compatibles avec le tractus
intestinal humain, elles peuvent cependant être d’une autre origine (animale, alimentaire ou
végétale), tant qu’elles ne sont pas nocives (Corthier, 2004).
De nombreux aspects technologiques doivent être pris en compte pour la sélection des
souches probiotiques on citant :
La conservation des propriétés probiotiques pour ne pas provoquer d’effet indésirable sur
la qualité organoleptique du produit (Ouwehand et al., 1999).
5
Chapitre II : Activité antimicrobienne des probiotiques contre les entéropathogènes
Le mode d’action par lequel certains probiotiques exercent des effets protecteurs ou
thérapeutiques ne sont pas complètement élucidés. Toutefois, plusieurs mécanismes ont été
proposés pour prévenir la colonisation et la croissance des bactéries pathogènes lors des
infections entériques et sont basés sur un nombre limité d’études in vivo (essentiellement
murines) et in vitro (Figure 1) (Kaur et al., 2002).
Étant donné que la majorité des infections intestinales sont initiées par l’adhésion des
pathogènes aux cellules entérocytaires de l’hôte, certaines bifidobactéries et lactobacilles
probiotiques ont la capacité de bloquer physiquement l’accès aux entérocytes (Picard et al.,
2005). Ce mécanisme d’action est similaire à celui exercé par le microbiote intestinal résident
face aux infections microbiennes (Liévin-Le Moal et Servin, 2006).
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Chapitre II : Activité antimicrobienne des probiotiques contre les entéropathogènes
Les mécanismes de compétition vis à vis les sites d'adhésion se font de deux manières. Ils
peuvent survenir de façon spécifique par l’intermédiaire des adhésines ou de façon non
spécifique en impliquant des interactions électrostatiques ou hydrophobes des forces passives
et stériques. Deux exemples de ces modes de compétition sont présentés dans la (Figure 2)
(Servin et Coconnier, 2003).
Les études in vivo identifiant le mécanisme de compétition pour l’adhésion utilisent pour
la plupart les lignées cellulaires intestinale Caco-2 et HT-29. Ces cellules sont généralement
appropriées à ce type d’expérience car elles présentent une structure similaire aux entérocytes
que l’on retrouve in vivo (Pinto et al., 1983). Des études pionnières ont démontré que des
souches de bifidobactéries humaines adhérant fortement aux cellules intestinales Caco-2
inhibent l’adhésion de microorganismes pathogènes comme Escherichia coli
entéropathogénique (EPEC) et Salmonella typhimurium à ces mêmes cellules lorsque placées
en compétition (Bernet et al., 1993). Ces auteurs ont également observé une inhibition
proportionnelle à la concentration de bifidobactéries ajoutées. Ils ont suggéré que l’inhibition
pouvait être due à un encombrement stérique par la constitution d’un biofilm qui empêche
l’accès des pathogènes aux surfaces cellulaires et par une exclusion des cellules pathogènes par
compétition aux sites spécifiques d’adhésion sur les cellules entérocytaires (Bernet et al., 1993)
7
Chapitre II : Activité antimicrobienne des probiotiques contre les entéropathogènes
.D’autres études sur des cellules Caco-2 ont démontré que la souche Lactobacillus acidophilus
est également capable d’inhiber l’adhésion de ces deux mêmes pathogènes (Coconnier et al.,
1993).
Par ailleurs, une compétition pour des sites spécifiques de fixation sur le mucus intestinal
a également été évoquée comme un autre mode d’action probable (Mélanie, 2007a). Le mucus
présent sur la surface de l’épithélium intestinal forme une sorte de gel composé de
glycoprotéines, appelées aussi mucines, la sécrétion de ces dernières par les cellules en gobelet
peut être stimulée par des facteurs neurogènes et par des changements environnementaux
incluant le microbiote résident et les infections microbiennes (Gill, 2003). En plus de protéger
l’épithélium d’un contact direct avec le contenu intestinal, le mucus intestinal est un site
important pour la colonisation du microbiote normal mais il peut également servir de site
d’adhésion pour certains microorganismes pathogènes (Gill, 2003).
Les probiotiques ont la capacité de produire des acides organiques qui contribuent à
l'inhibition de la croissance des microorganismes entérovirulants (Servin, 2004). Il s’agit de
l'acide lactique et l'acide acétique, qui sont produits respectivement par les lactobacilles et les
bifidobactéries via la fermentation des hexoses (Servin, 2004). Ces acides organiques, produits
à partir des glucides ingérés lors de la prise alimentaire, contribuent à faire baisser le pH
intestinal (Belhamra, 2017). Leur diffusion passive à travers la membrane bactérienne sous
leur forme non dissociée permet, après leur dissociation, d'acidifier le cytoplasme et donc
d'inhiber la propagation, la croissance et la survie des agents pathogènes acido-sensibles
(Belhamra, 2017).
8
Chapitre II : Activité antimicrobienne des probiotiques contre les entéropathogènes
Figure 3. Mode d’action des acides organiques produits par les probiotiques contre les bactéries
pathogènes. (Mélanie, 2007b).
X-COOH = CH3-CHOH-COOH dans le cas de l’acide lactique ; ou CH3COOH dans le cas de l’acide acétique.
Dans une étude réalisée in vitro, l’activité anti-Salmonella produite par trois souches de
lactobacilles ; Lactobacillus paracasei 8700:2, Lactobacillus plantarum 299v et Lactobacillus
fermentum ME-3, en conditions microaérophiles de même que l’activité anti-Shigella de deux
bifidobactéries ; Bifidobacterium lactis Bb12 et Bifidobacterium longum 46, en condition
anaérobie était associée à un effet du pH. Une corrélation positive entre la production d’acide
lactique et l’activité inhibitrice a été observée (Hütt et al, 2006). Cependant, la quantité d’acide
acétique et l’activité inhibitrice des lactobacilles et des bifidobactéries cultivées en conditions
anaérobiques étaient corrélées de façon négative (Hütt et al, 2006).
La production d’autres agents antimicrobiens, tels que les bactériocines, ont aussi été
rapportés principalement lors des études in vitro (Klaenhammer, 1993). Les bactériocines sont
définies comme des molécules de nature protéique synthétisées par voie ribosomique possédant
des propriétés antibiotiques avec une activité bactéricide contre des espèces proches de la
souche productrice (Klaenhammer, 1993). Toutes les bactériocines produites par les bactéries
lactiques décrites jusqu’à présent ont une activité dirigée contre les bactéries (Gram+) (Dortu
et Thonart, 2009). Aucune bactériocine produite par des bactéries lactiques avec une activité
contre des bactéries (Gram-) n’a été décrite, comme la membrane externe de ces dernières ne
permet pas aux bactériocines d’atteindre la membrane interne, siège de leur activité (Dortu et
Thonart, 2009). Ces molécules agissent sur la membrane externe des bactéries cibles en
formant des pores qui mènent à la libération du contenu intracellulaire et la mort de la bactérie
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Chapitre II : Activité antimicrobienne des probiotiques contre les entéropathogènes
affectée (Luquet et Courrieu, 2005). Les lactobacilles et les lactocoques, contrairement aux
bifidobactéries, sont le plus souvent associés à la production de bactériocines (Luquet et
Courrieu, 2005). Il a été démontré in vivo que Lactobacillus salivarius produit une
bactériocine dirigée contre Listeria monocytogenes (Fooks et Gibson, 2002). La production de
bactériocines par les souches de bifidobactéries est moins documentée, néanmoins, il a été
rapporté que la souche Bifidobacterium bifidum NCFB1454 produit une bactériocine active
contre différents genres bactériens potentiellement pathogènes (Yildirim et Johnson, 1998).
Dans les conditions d’aérobiose, chez la plupart des bactéries lactiques, les molécules de
NAD réagissent avec l’oxygène pour former le peroxyde d’hydrogène (H2O2) qui inhibe de
nombreuses souches bactériennes pathogènes (Ouwehand et Vesterlund, 2004).
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Chapitre II : Activité antimicrobienne des probiotiques contre les entéropathogènes
Grâce aux composants intra ou extracellulaires actifs, les probiotiques sont capables
d’influencer le système immunitaire par contact avec les cellules immunocompétentes, en
transmettant des signaux modifiant la réponse immunitaire de l'organisme hôte (Amrouche,
2005). De nombreuses études ont rapporté que la prolifération des lymphocytes et la production
des cytokines par les cellules du système immunitaire peuvent être sensiblement modifiées par
l’ingestion des probiotiques (Amrouche, 2005).
En résumé, les mécanismes d’action proposés dans cette section présentent l’état actuel
des connaissances sur l’action des probiotiques contre les pathogènes entériques. Cependant,
il est important de noter que les mécanismes associés à des souches particulières ne peuvent
pas être extrapolés à tous les micro-organismes probiotiques, chaque souche doit être étudiée
de façon indépendante (Bahri, 2014). De plus en plus des équipes de recherche travaillent
actuellement pour identifier les mécanismes d’action de probiotiques contre certains
pathogènes (Bahri, 2014).
11
Conclusion et perspectives
Conclusion et perspectives
Le nombre important de publications consacrées aux probiotiques témoignent de l’intérêt
majeur qu’accorde actuellement la communauté scientifique au potentiel thérapeutique de ces
microorganismes. Leur développement est actuellement en pleine expansion et un large panel
de produits à base de probiotiques (médicaments ou compléments alimentaires) est proposé
pour répondre aux besoins de patients de plus en plus à l’écoute de leur corps et de leur santé.
En perspectives,
En peut noter qu’il serait intéressant d’étudier d’une manière plus approfondi et
poursuivre les recherches sur les probiotiques pour mieux comprendre leurs mécanismes
d’action et penser à étudier leurs effets in vivo pour avoir des résultats beaucoup plus précis.
12
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Annexes
Annexe 1. Les principales voies de catabolisme des hexoses chez les bifidobacteries.