Chapitre II Partie 2
Chapitre II Partie 2
Chapitre II Partie 2
Les mycobactéries sont des bacilles légèrement incurvés, se multipliant très lentement.
Leur paroi est très riche en lipides et contient des cires : acides gras en C60 (acides
mycoliques), qui empêchent de « prendre » la coloration de Gram.
Ces bactéries sont dites : BAAR : bacilles acido-alcoolo-résistants. On les appelle aussi
« bactéries sans paroi ».
Les Gram (+) excrètent plutôt les enzymes hors de la cellule. Ce sont alors des
« exoenzymes ». Celles des Gram – sont retenues entres les membranes Interne et Externe.
Elle possède le même type de structure que celle d’une cellule eucaryote (bicouche
phospholipidique) mais avec beaucoup moins de glucides et jamais de stérols (sauf les
mycoplasmes).
D’autres enzymes impliquées dans la synthèse des lipdes et dans la réplication de l’ADN y
sont localisées
4.2 Structure
Les lipides sont à la base de la structure de la membrane. Chaque molécule de lipide est
amphipathique ; formée d’une partie hydrophobe soluble dans l’huile insoluble dans l’eau et
une partie hydrophile ayant des propriétés opposées et portant un groupement phosphate
chargé négativement. Ces deux couches moléculaires induisent une organisation en
double feuillet. Cette organisation n’et pas statique, elle répond au modèle dit en mosaïque
fluide. ( Les molécules peuvent se déplacer latéralement en échangeant leurs places, 1
millions de fois par seconde).
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On distingue deux catégories de protéines : les protéines extrinsèque (périphériques) et les
protéines intrinsèques qui traversent complètement le double feuillet.
4.3 Fonction
a-Rôle de barrière semi-perméable (ou semi sélective): elle permet le passage de molécules
lipophiles et empêche le passage des molécules hydrophiles.
De plus la membrane joue un rôle important dans la détection de composés présents dans le
milieu environnant grâce à la présence de protéines transmembranaires du chimiotactisme.
Ceci permet aux bactéries dotées de flagelles de « nager » vers les endroits qui leur sont les
plus favorables, les plus riches en nutriments par exemple et de s’éloigner des endroits
défavorables comme ceux qui contiennent des substances toxiques. Ces protéines
interviennent dans le sens de rotation des flagelles.
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5.Le cytoplasme
Des organites spécialisés : différents de ceux trouvés dans les cellules eucaryotes. On
trouve des chromatophores (organites spécialisés dans la photosynthèse), des
vacuoles à gaz (permettant aux bactéries aquatiques de flotter à la surface de l’eau).
6. Le Chromosome
6.1 Morphologie
Pendants de nombreuses années, les essais de mise en évidence d’un appareil nucléaire chez
les bactéries se sont révélés difficiles. La présence d’une quantité élevée d’ARN masque
l’ADN.
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Pour distinguer l’ADN de l’ARN, plusieurs méthodes ont été développées :
La morphologie des corps observés est variable selon la phase de croissance et de division de
la bactérie.
Cocci : petite masse sphérique ou ovoïde ou en massue, souvent centrale.
Bacilles : Bâtonnets appariés, situés transversalement dans la cellule.
o Généralement mononucléaire chez les cocci et plurinucléaires chez les
bacilles. Cet aspects est visible chez les bactéries jeunes en phase
exponentielle. L’appareil nucléaire se divise plusieurs fois avant que la
cellule n y parvienne.
o On l’appelle un corps nucléaire.
6.2 Composition
Le sucre : désoxyribose
6.3 Structure
Le chromosome bactérien est une unique molécule d’ADN circulaire fermée et très longue (
environ 1000 fois plus longue que la bactérie : 1360 µm chez E.coli ) libre et pelotonnée dans
le cytoplasme. L’absence de membrane nucléaire conduit à parler d’appareil nucléaire ou de
nucléoide plutôt que de noyau. Cet ADN est associé à des protéines notamment des
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topoisomérases qui interviennent dans le repliement de la molécule d’ADN, par contre on ne
trouve pas d’histones comme chez les eucaryotes. On trouve par contre des polyamines
analogues aux histones, tel que la protéine II riches en Arginine, elle est dimérique de 9.5
kDa.
L’ADN natif est circulaire et torsadé. Structure appelée Super Hélice ou superenroulée.
L’autre forme dite relaxée est observé surtout lors d’ultracentrifugation ou d’électrophorèse
de l’ADN.
L’ADN se réplique, c'est-à-dire qu’il se reproduit lui-même. La séquence sur une chaine
détermine automatiquement la séquence sur l’autre chaine.
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La réplication est bidirectionnelle : Cairns a été le premier à observer un chromosome entier
d'E. coli en cours de réplication. Il a associé des techniques de marquages isotopiques et
d'autoradiographie suivie d'observation en microscopie électronique. Après avoir cultivé des
bactéries dans un milieu contenant de la thymidine tritiée à faible activité spécifique, pendant
un temps dépassant la durée du cycle, il met au point une méthode de lyse de la cellule
permettant de libérer l'ADN directement sur une grille de microscopie électronique, en
minimisant les risques de cassures mécaniques de la molécule.
• - d'après l'observation de ces "fourches" , il est clair que la réplication se fait à partir
des deux brins anciens simultanément (les figures matérialisées par les grains d'argent
seront appelées fourches de réplication).
• - puisque l'on observe deux de ces fourches, c'est que la réplication est
bidirectionnelle.
• - si la réplication est bidirectionnelle c'est qu'il existe une "origine de réplication".
Cette notion n'est pas que topographique, on verra qu'effectivement, seule une
séquence précise de ces molécules circulaires permet le démarrage de la réplication.
Dans la cellule Eucaryote, les chromosomes comportent des molécules linéaires
d'ADN très longues et il existe plusieurs origines de réplication par chromosome,
également caractérisées par des séquences précises.
Un élément quelconque d'un génome, naturel ou obtenu par génie génétique, ne pourra être
répliqué (et donc transmis à une descendance) que s'il possède une origine de réplication, il
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sera alors considéré comme un "réplicon". Ce réplicon est constitué d’un site d’initiation
appelé replicateur et d’un gène codant pour l’initiateur .
C’est au niveau du site réplicateur que se fixe l’ADN polymérase et il se trouve au niveau de
la membrane plasmique.
AD; ligase : unit les extrémité de deux chaines d’ADN en catalysant la synthèse d’un pont
phosphodiester entre un 3’OH et 5’P. Répare les coupures d’ADN, circularise l’ADN
bactérien…
Gyrase ou Topoisomérase II : Le chromosome d’E. coli fait 1360 um (4.106 paires de Nt,
donc 4.105 tours de spires) si la réplication se fait en 30 min, alors la déspiralisation se fait à
10000 Tours/minute. C’est grâce à la découverte de la Gyrase qu’on a pu expliqué ce
phénomène.
La Gyrase fait une coupure au niveau de l’un des brins, ce qui induit la déspiralisation de
l’ADN superenroulée en molécule circulaire enroulée.
Au niveau d la fourche de réplication, l’un des deux brins est synthétisé dans le sens de
déplacement (3’OH libre), catalysé par la DNA polymérase III. Il est appelé brin précoce ou
avancé. L’atre à extrimité 5’ sera synthétisé par fragments d’Ogasaki et est appelé brin
tardif.
Ces fragments de 1000 à 2000 résidus nécessitent une amorce d’AR; synthétisées par une
ARN polymérase DNA dépendante, appelée primase.
Ensuite ces amorces ARN sont excisée par l’AD; polymérase I (activité exonucléasique) et
les délétions sont remplacées par de l’ADN par cette même enzyme.
Enfin l’ADN ligase relie les différentes séquences au niveau de leurs extrémités 3’OH et
5’OH libre.
Durant toutes ces étapes, les d’ADN matrice sont maintenus déroulés et stabilisés par des
protéines appelées AD; binding proteins.
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Fourche de réplication de l’AD; chez E. coli
7. Les Plasmides
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7.1 Structure des plasmides
Comme toutes structures porteuses d’informations génétiques, le plasmide est une molécule
d’ADN. Ces molécules sont généralement de petite taille, 1/100 du chromosome bactérien.
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7-2 Réplication
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Réplication de type rolling cercle
L’incompatibilité plasmidique
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7.3 Mode de Transfert
Le transfert d’un plasmide d’une bactérie dite donatrice à une bactérie dite réceptrice peut se
faire par, Conjugaison, mobilisation, transduction ou transformation.
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Transfert par Transduction
o Le transfert se fait par un bactériophage
o Entre des bactéries de la même espèce
o C’est le mode de transfert de la résistance aux antibiotiques chez les
Staphylocoques et les Streptocoques.
Cuve d’électroporation
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Transformation des Gram- et des Gram+
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