Rpublique algrienne dmocratique et populaire.

Universit Djillali Liabes

Facult de Mdecine
Dpartement de Pharmacie

TP
N 01
Dosage de la
cratinine
plasmatique.
Ralise par:
GHERMI Mohamed.
CHAREF KHODJA Meriem.
TAHRI Mahmoud.
BETTAYEB Mohamed Amine.

4 me anne pharmacie G05.

Anne universitaire : 2008 / 2009

TP N
01

I-

DOSAGE DE LA CREATININE
PLASMATIQUE

Dfinition :
Cra vient du grec kreas qui veut dire chair. Une mesure de la
cratinine donne des informations sur deux points : la fonction rnale
et la masse musculaire. La cratinine est une molcule chimique
gnre par le mtabolisme musculaire. La cratinine est produite
partir de la cratine, une molcule de premire importance pour la
production d'nergie dans les muscles. Environ 2 % de la cratine du
corps sont convertis chaque jour en cratinine. La cratinine est
transporte par le sang vers les reins.
Pour un sujet donn, le taux plasmatique et la quantit de
cratinine limine quotidiennement dans les urines constituent
des paramtres biologiques remarquablement fixes.
Pour ces raisons, la valeur de la clairance de la cratinine revt une
signification smiologique fondamentale lors de l'tude d'une
insufisance rnale. La clairance de la cratinine est indpendante
de la diurse, elle mesure directement la filtration
glomrulaire.
Le taux plasmatique est indpendant de l'apport protique
alimentaire ; il reflte la masse musculaire du sujet et son
mtabolisme propre.
L'limination est exclusivement urinaire, et donc toute variation de
la clairance renseigne directement sur l'tat fonctionnel du rein.

II- Mtabolisme :
1- Rappel physiologique :
a- Origine mtabolique :
La cratinine provient de la dshydratation de la cratine, elle
mme prsente dans le muscle stri o elle permet le
stockage d'ATP sous forme
de cratine phosphate ou phosphagne par une raction
catalyse par la
cratine kinase (CK).
b- Comportement de la cratinine au niveau du nphron
La cratinine subit la filtration glomrulaire ; elle n'est par la
suite ni rabsorbe ni excrte au niveau du tubule. Sa
clairance mesure le volume du filtrat glomrulaire form par
seconde.
Clairance = 2 ml/seconde pour 1,73 m2 de surface corporelle
(voir tables des Dubois).

2- Formation de la cratine phosphate:

1

Le phosphate de cratine est synthtis dans les cellules partir des

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DOSAGE DE LA CREATININE
PLASMATIQUE

acides amins.
Dans sa structure on retrouve la molcule du glycocolle, dont lAzote est
substitu par le noyau guanidinium de larginine et un mthyl provenant
de la mthionine.
Le phosphate et la liaison riche en nergie provienne de lATP.

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DOSAGE DE LA CREATININE
PLASMATIQUE

3- Formation de la cratinine :
Le mtabolisme de la cratine et donc celui de la cratinine
peuvent tre rsums dans ce schma explicatif.

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DOSAGE DE LA CREATININE
PLASMATIQUE

III- Mthodes dexplorations :

1- Dtermination de la cratinine sanguine
Le sang total renferme de la cratine et de la cratinine. La
cratine se trouve surtout dans les globules rouges des taux
faibles, alors que la cratinine est galement rpartie entre les
globules et le plasma. La concentration en cratinine totale du
sang est remarquablement constante chez un sujet
donn, en fonction de sa masse musculaire. Elle ne dpend ni du
rgime, ni de l'exercice physique, ni mme d'autres influences
biologiques. C'est le constituant sanguin dont le taux est le plus
fixe. La cratinine sanguine ne varie pratiquement que dans les
lsions rnales.
Son taux varie, chez l'adulte, de 50 105 pmol/l.

2- Clairance
Elle tablit le rapport entre la quantit de cette substance
apporte par le plasma au niveau du rein et la quantit de
cette substance limine par le rein.
C'est le coeficient d'puration plasmatique ou nombre de
ml de plasma totalement purs par le rein dans l'unit
de temps. Ce volume thorique s'exprime dans le cadre des
units SI en ml/seconde. Il est utile, pour manipuler simplement
les clairances, de retenir que 24 h correspondent 1
440 minutes et 86 400 secondes.
C=
U.V/P
C = clairance = volume de plasma
totalement pur. U = concentration
urinaire par litre.
P = concentration plasmatique par litre.
V = volume d'urines mises en une seconde (ou une minute).
Il sufit donc de doser la cratinine dans le plasma et dans
l'urine, d'exprimer les rsultats dans la mme unit, de connatre
la diurse (dbit urinaire) par seconde, pour calculer sa
clairance. Il est essentiel au cours de l'preuve (3 h ou mieux 24
h) de mesurer exactement la diurse et de faire boire
abondamment le sujet, afin d'avoir une diurse suprieure 1,5
1/24 h. La valeur normale est de 2 ml/s.
De plus la formule C = U.V/P est valable pour le sujet adulte
normal dont la surface corporelle est voisine de 1,73 m2. Chez
l'enfant et le nourrisson il faut tenir compte de la surface
corrige Se :
Ce = C x
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DOSAGE DE LA CREATININE
PLASMATIQUE

1,73/Se

La Se est obtenue grce aux tables de Dubois qui permettent,

en joignant par une droite la taille et le poids, d'obtenir la
surface corporelle recherche l'intersection avec la ligne des
surface corporelles.
Cette clairance correspond au dbit de filtration glomrulaire DFG
qui est un
des lments essentiels dans ltude de la fonction rnale.

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DOSAGE DE LA CREATININE
PLASMATIQUE

Sinon cette mme DFG peut tre calcul par la Formule de

Cockcrott et
Gault (1976).
Clairance de la cratinine = K x Poids (kg) x [140ge(ans)] / Cratinine(mol/l)
K = 1,05 chez la femme
K = 1,25 chez l'homme
Clairance cratinine (homme) = Poids (kg) x [140-ge (ans)] /
Cratinine
(mg/l) x 7,2
Clairance cratinine (femme) = 0,85 x Poids (kg) x [140ge (ans)] / Cratinine (mg/l) x 7,2.

Conditions de l'utilisation de cette

formule : Age : entre 18 et 110 ans
Poids entre 35 et 120 kg
Srum cratinine : 6 et 70 mg/l
IV-

Mthodes de dosages :
Le srum ou le plasma sanguin peuvent tre utiliss indifremment.
Les chantillons de srum ou de plasma ou d'urines peuvent tre
conservs plusieurs jours l'abri de l'vaporation.

Prlvemen
ts :
- S an g
veineux :
Matriel ncessaire :
Garrot, seringue et aiguille, dsinfectant, coton, sparadrap,
tubes avec ou sans anticoagulant, gants.
Mode opratoire :
Le prlvement se fait habituellement au pli du coude, on
peut aussi le raliser en cas de problmes sur la face
dorsale de la main.
Prvoir tout d'abord les tubes ncessaires, mettre ventuellement
l'anticoagulant.
Se munir d'une seringue au volume correspondant aux
analyses totales, en comptant 5 ml par tube.
Garrotter le bras du patient, dsinfecter la zone cutane,
dcoincer une premire fois le piston de la seringue puis le
remettre dans sa position
initiale.
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DOSAGE DE LA CREATININE
PLASMATIQUE

Aboucher la seringue l'aiguille et piquer la veine.

Tirer le piston, retirer tout d'abord l'aiguille, la jeter dans un
rcipient destin aux consommables jetables puis remplir les
tubes en commenant
toujours par le tube sec, boucher immdiatement tous les
tubes et remuer soigneusement ceux contenant
l'anticoagulant.

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DOSAGE DE LA CREATININE
PLASMATIQUE

Ne jamais remplir de tubes avec une seringue sur laquelle on

a pas enlev l'aiguille (risque d'arosols, d'claboussures et
d'expulsion brutale de l'aiguille).

Urine :
Matriel ncessaire:
Un flacon pour analyse d'urine ou dfaut un rcipient ferm
propre et sec.
Mode opratoire :
Pour mesurer la clairance de la cratinine ou exprimer la
protinurie en mg/jour, on pratique un prlvement d'urine
de 24 heures. Il est donc prfrable que le malade reste une
journe et deux nuits proximit du
laboratoire, ou qu'il efectue ce prlvement chez lui, si
on lui a bien expliqu.
Le matin, faire uriner le malades dans les latrines. Il doit boire
normalement pendant l'preuve.
Recueillir ensuite dans une grande jarre (minimum 3 litres)
toutes les urines de la journe, de la nuit et enfin celles du petit
matin au rveil. Boucher la jarre, puis l'agiter. Mesurer
prcisment le volume en ml grce une prouvette gradue
en plastique de 2000 ml.
Procder ensuite un dosage de la cratinine urinaire.

Pour doser la cratinine, plusieurs mthodes ont t mises au point,

parmi celles- ci :

1- Mthodes enzymatiques :
a- Mthode enzymatique lecture UV :
Cratinin
e

>
ATP Cratine +

Phospho-nol-pyruvate +
ADP
ATP

Pyruvate + NADH.H+

> Cratine(P) +
ADP

> Pyruvate +

> Lactate + NAD+.

La cintique dcroissante de disparition du NADH.H+ suivie

340nm est proportionnelle la quantit de cratinine initiale
prsente.
b- Action d'une oxydase spcifique
Cratinin
e
8

> Sarcosine + H2O2

! !

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DOSAGE DE LA CREATININE
PLASMATIQUE

H2O2 + chromogne incolore > H2O + chromogne color

Rmrq:
Chromogne incolore : 4-aminophnazone + acide 3-5
dichloro 2 hydroxybenzne sulfonique.
Chromogne color : complexe quinone-imine rouge
(absorbe 520 nm).

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2- Mthode par rflectomtrie :

Cest le cas des appareillages de chimie sur support solide.
Exemple : plaque VITRAS de dosage enzymatique de la
cratinine sur une plaque.
La plaque contient une srie de couches afin de raliser une
cascade de
ractions enzymatiques. La cratinine est tout dabord
hydrolyse en cratine :
Cratinine +
H 20
Cratine +
H 20

> cratine.

" $&
#

$% #
$

Sarcosine + 02 +
$' #
H 20
H 20 2 +
leucodriv

$' #

> sarcosine + Ure.

2

> glycine + formaldhyde + H 0

> coloration proportionnelle la

concentration en cratinine.
La cratine est alors hydrolyse en sarcosine, elle-mme oxyde
pour produire du peroxyde d'hydrogne (eau oxygne). L'eau
oxygne, en prsence de peroxydase, oxyde un leucodriv qui
se colore, et la vitesse de coloration est alors mesure en
cintique par rflectomtrie. La vitesse de raction est
proportionnelle la concentration de cratinine prsente dans le
srum.
Rmrq :
Ces prcdentes mthodes bien que trs spcifique sont
normment couteuses ce qui limite probablement leurs
application gnrale dans le
laboratoire de biochimie.

3- Mthode colorimtrique cintique de Jafe :

Dcrite pour la premire fois en 1886, dans une solution
alcaline, la cratinine ragit avec le picrate pour former
un produit jaune-rouge.
Cratinine + acide
picrique

(
!

> complexe jaune-rouge

La vitesse de formation de colorant (intensit de la couleur) est

directement proportionnelle la concentration de cratinine de
lchantillon. Elle est dtermine par laugmentation de
labsorbance 512 nm.
Cette mthode a t minutieusement dcrite pour ses
avantages : simplicit de dtermination et faible cot des
ractifs.
Le principal inconvnient de la mthode de Jaff est son manque
de spcificit. Jusqu' 20 % de la couleur gnre lors des
valuations de srum
ou de plasma peut provenir de substances endognes autres que
la

cratinine, appeles chromognes non cratinine. Les

protines, le glucose, l'acide ascorbique, les cphalosporines et
les -cto-acides comme l'actoactate et le pyruvate font
partie de ces chromognes non spcifiques ragissant la
mthode de Jaf. Selon leur concentration, ces composs
peuvent provoquer une surestimation de 18 20 mol/L (0,2-0,4
mg/dL) de la concentration de cratinine.
En mme temps, l'augmentation de la concentration de
bilirubine masque le dveloppement de la couleur, donnant des
rsultats de cratinine erronment bas. Plusieurs mdicaments
couramment employs peuvent galement afecter les rsultats
de l'valuation. Depuis sa premire application, de nombreuses
modifications de la raction de Jaf ont t dcrites,
concernant la composition du ractif ainsi que la procdure de
mesure.
Rmrq :
Plusieurs personnes ont afirm que, ni la mthode de Jaf, ni
la mthode enzymatique ne procure de rsultats acceptables
dans le contexte clinique. Selon Thomas Hostetter, MD, MPH
au National Kidney Disease Education Program du National
Institute of Health (USA) : le rendu de rsultats de
cratinine srique peut varier de 30 % pour des laboratoires
certifis de qualit.
La connaissance de la mthodologie utilise pour la mesure de
la cratinine est donc essentielle du fait que les interfrences
mthodologiques peuvent
altrer significativement les rsultats et influencer ainsi
les dcisions thrapeutiques.

V-

Valeurs normales :
1- Cratininurie :

: 1 1,8 g/24H. (9 - 16 mmoles/24H);

: 0,8 1,2 g/24H. (7 10,5 mmoles/24H).

2- Cratininmie :
: 6,8 13 mg/l. (60 115 moles/l);
: 5,65 11,3 mg/l. (50 100 moles/l).
Enfant : 3,5 7,5 mg/l. (31 66 moles/l).
Nouveau ne / Nourrisson : 2,3 5,6 mg/l. (20 50 moles/l).

3- Clairance de la cratinine :
120 ml /min / 1,73 m2.
Le sang des adultes et des jeunes particulirement muscls
peut contenir davantage de cratinine que celui de la
population moyenne. A l'oppos, le sang des personnes ges
peut contenir moins de cratinine que la normale. Une personne
ne disposant que d'un rein peut prsenter une cratinine

normale d'environ 160 mol/L (1,8 mg/dL).

VI- Application (TP) Echantillon 92 :

La mthode utilise est celle de la coloration de Jafe.

1- Prparation des ractifs :

Acide picrique (17,5
mmol/l) : MM= 229,1
g/mol.
V= 100
ml. M=
X.
X= 17,5 * 10-3 * 229,1
/ 10. X= 0,400925 g.
NaOH (0,29
mol/l) : MM= 40
g/mol. V=100
ml.
M=Y.
Y= 0,29 * 40 /
10. Y=1,16 g.

2- Manipulation :
A
B

Solution de
travail2ml

Echantillo
n

2ml

Etalon
200l

200l

Pour chaque fois on mesure labsorbance 512nm 30

puis 90, la concentration en cratinine est obtenue par
lquation suivante :
C
(chantillon)
=

*+ ,
,
*+ ,

-.

/+

)0!.
)0!

/+ ,

DO 30
A
B

0,50
6
0,52
4
C (chantillon) =

[Etalon]

0,582.0,5
24
0,536.0,5
24

DO 90
0,53
6
0,58
2
[20]

C=38,66
mg/l

3- Interprtation des rsultats :

La concentration obtenue (38,66 mg/l) est de loin suprieur
des normes usuelles comprises entre : 6,8 13 mg/l chez lhomme
et 5,65 11,3 mg/l chez la femme, cette hypercratininmie peut tre
explique par plusieurs processus pathologique dont essentiellement
latteinte de la fonction rnale.

4- Conduite tenir devant une hypercratininmie :

Dans ce chapitre nous nous limiterons la dcouverte dune
insufisance rnale dbutante.
a- Circonstance de dcouverte :
En-dehors de quelques complications bruyantes souvent
trompeuses (syndrome dmateux ou lvation
tensionnelle aigue orientant souvent le malade vers le
cardiologue) ou tardives (anmie, troubles
phosphocalciques), linsufisance rnale chronique se
manifeste par peu de symptmes cliniques. Ceci est
particulirement vrai pour linsufisance rnale
dbutante dont le caractre asymptomatique, indolent,
sont volontiers considrs comme synonyme de peu
grave , la fois par les malades et les praticiens. Cest
pourtant ce stade dbutant que les possibilits
thrapeutiques sont les plus nombreuses et les plus
eficaces pour influer sur le cours volutif de la
nphropathie.
b- Diagnostique (+) de linsufisance rnale :
Linterprtation de la cratinine plasmatique reste un point
important du dpistage et du diagnostic de linsufisance
rnale.
Laugmentation de la cratinine plasmatique nest quun
signe peu
sensible et tardif pour dpister une altration dbutante de
la fonction rnale. En pratique, les valeurs normales de la
cratinine plasmatique ne dfinissent que la distribution
gaussienne de la cratinine plasmatique mesure dans la
population (moyenne 2 SD) mais nindiquent pas les
seuils de valeurs dfinissant linsufisance
rnale. Pour sensibiliser lvaluation de la fonction rnale a
partir de la cratinine plasmatique, il est recommande de
recourir systmatiquement la clairance estime par la
formule de Cockcroft
et Gault (COcr).

Un autre avantage li la cratinine corrige selon

Cockcroft est que les variations de la clairance estime
vont dans le mme sens et sont grossirement corrles
aux variations de la filtration glomrulaire (intrt volutif
+++ pour le suivi de la fonction rnale chez une mme
personne en labsence de variation de la masse
musculaire). Linterprtation de la COcr est la suivante
:
Une COcr > 90 ml/min. correspond une fonction rnale
normale
Une COcr < 60 ml/min. traduit une insufisance rnale
modre.
Linterprtation dune COcr comprise entre 90 et 60
ml/min. doit prendre en compte les signes rnaux
associs et lge
:
Une COcr comprise entre 90 et 60 ml/min. associe des
signes biologiques (protinurie, hmaturie), radiologiques
ou histologiques de nphropathie correspond une
insufisance rnale dbutante.
Une COcr comprise entre 90 et 60 ml/min. sans aucun
autre signe de nphropathie peut correspondre une
fonction rnale normale basse ou une nphropathie
dbutante. Cest lvolution sous surveillance qui tranchera
entre les deux situations. Cette situation est
particulirement frquente chez les sujets gs (influence
++ de lge dans la formule de Cockcroft) et lon parle
volontiers de vieillissement physiologique de la fonction
rnale. Cette notion est cependant errone car la
diminution de la filtration glomrulaire et de la clairance
selon Cockcroft nest pas systmatique avec lge (1/3 des
individus restent stables) et elle est habituellement
associe une HTA et/ou un terrain athromateux
(nphropathie vasculaire a minima probable).
c-

1
0

Diagnostic difrentiel IR chronique

vs. Aigu
Pour afirmer le caractre chronique dune
insufisance rnale, il existe 3 critres
:
Critre anamnstique : antcdent de maladie
rnale, dosages levs anciens de cratininmie
Critre chographique : la taille des reins est diminue
au cours de lIRC
: <10 cm lchographie (ou < 3
vertbres sur un clich dASP).
enfin critres biologiques : deux anomalies orientent
vers une IRC: Anmie normochrome normocytaire
argnrative (secondaire au
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dfaut de production drythropotine)

Hypocalcmie (carence en vitamine D active (calcitriol)
par dfaut dhydroxylation rnale).

1
1

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