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    Le document décrit le bouillon de Rothe, un milieu de culture utilisé pour dénombrer les entérocoques. Il explique son utilisation, sa préparation, son mode d'emploi et ses caractéristiques.

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    Bouillon de ROTHE

    DOMAINE DUTILISATION
    Le bouillon de Rothe est utilis pour effectuer le test prsomptif de recherche et de dnombrement
    des entrocoques dans les eaux dalimentation, les produits surgels et les autres produits
    alimentaires par la mthode du nombre le plus probable. Cette recherche se pratique en deux
    tapes :

    test prsomptif sur bouillon de Rothe,


    test confirmatif sur bouillon de Litsky.

    HISTORIQUE
    Ce bouillon lazide de sodium et au glucose est prpar suivant la formule de Rothe. Il a t
    recommand par Malmann et Seligman pour la numration des streptocoques fcaux dans les
    eaux, les eaux rsiduaires et les aliments. Malmann, Botwright et Churchill ont dmontr laction
    bactriostatique de lazide de sodium sur la flore Gram ngatif, favorisant ainsi la croissance des
    entrocoques.
    PRINCIPES
    - La forte nutritivit du milieu est due la prsence dune forte proportion de polypeptone ainsi que
    de glucose.
    - Le chlorure de sodium maintient lquilibre osmotique.
    - Les phosphates agissent comme substances tampon.
    - Lazide de sodium inhibe la croissance des microorganismes Gram ngatif par son action
    bactriostatique et favorise la culture des streptocoques fcaux.
    - Aprs lobservation de cultures dans les tubes (test prsomptif), il est ncessaire de pratiquer le
    test confirmatif sur un bouillon de Litsky. Cette technique associe leffet de lazide de sodium
    celui dun colorant : lthyl-violet.
    PREPARATION
    Milieu simple concentration
    - Mettre en solution 35,6 g de milieu dshydrat (BK060) dans 1 litre deau distille ou
    dminralise.
    - Agiter lentement jusqu dissolution complte.
    - Rpartir en tubes, raison de 10 mL par tube.
    - Striliser lautoclave 121C pendant 15 minutes.
    Milieu double concentration
    - Mettre en solution 71,2 g de milieu dshydrat (BK060) dans 1 litre deau distille ou
    dminralise.
    - Agiter lentement jusqu dissolution complte.
    - Rpartir en tubes 20 x 200 mm, raison de 10 mL par tube.
    1/3
    Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B.P. 10245 F60002 Beauvais Cedex France
    Tl : + 33 (0)3 44 14 33 33 Fax : + 33 (0)3 44 14 33 34 www.biokar-diagnostics.fr

    - Striliser lautoclave 121C pendant 15 minutes.


    MODE DEMPLOI
    Milieu simple concentration
    Ensemencer les tubes avec 1 mL dinoculum et de ses dilutions dcimales successives.
    Milieu double concentration
    Ensemencer les tubes avec 10 mL dinoculum.
    Incubation
    Incuber tous les tubes 37C pendant 24 et 48 heures.

    LECTURE
    Les tubes positifs prsentent un trouble. Ceux-ci seront obligatoirement soumis au test confirmatif
    sur bouillon de Litsky (BK 061).

    FORMULE - TYPE
    (pouvant tre ajuste de faon obtenir des performances optimales)
    Pour 1 litre de milieu :
    Polypeptone .....................................................................................20,0 g
    Glucose ..............................................................................................5,0 g
    Chlorure de sodium ............................................................................5,0 g
    Phosphate monopotassique...............................................................2,7 g
    Phosphate dipotassique.....................................................................2,7 g
    Azide de sodium.................................................................................0,2 g
    pH du milieu prt--lemploi 25C : 6,8 0,2.

    CONTRLE QUALITE
    - Milieu dshydrat : poudre blanc crme, fluide et homogne.
    - Milieu prpar : solution ambre, limpide.
    - Rponse culturale typique aprs 24 heures dincubation 37C, puis subculture sur bouillon de
    Litsky :
    Microorganismes
    (1)

    Enterococcus faecalis
    + Escherichia coli
    + Pseudomonas aeruginosa

    (1)

    Enterococcus faecalis
    + Salmonella Enteritidis
    + Staphylococcus aureus

    Cultures sur bouillon de Litsky


    ATCC 33186
    ATCC 25922
    ATCC 10145

    positive

    CCM 2541
    ATCC 13076
    ATCC 25923

    positive

    ATCC 25922
    ATCC 6633

    inhibe
    inhibe

    Escherichia coli
    Bacillus subtilis
    (1)

    inoculum <102 microorganismes.


    2/3
    Biokar Diagnostics Rue des Quarante Mines ZAC de Ther Allonne B.P. 10245 F60002 Beauvais Cedex France
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    STOCKAGE / CONSERVATION
    Milieu dshydrat : 2-30C.
    - La date de premption est mentionne sur ltiquette.
    - Milieu prpar en tubes : 6 mois 2-8C ( titre indicatif).

    PRESENTATION

    Code

    Milieu dshydrat :
    - Flacon de 500 g

    BK060HA

    REFERENCES BIBLIOGRAPHIQUES
    Rothe. Illinois State Health Department.
    Mallmann, W.L., and Seligmann, E.B. 1950. A comparative study of media for the detection of streptococci in water and
    sewage. Ann. J. Pub. Health, 40: 286.
    J.O du 19 janvier 1980. Critres microbiologiques auxquels doivent satisfaire certaines denres animales ou dorigine
    animale. Mthodes gnrales danalyse bactriologique. (arrt du 21 dcembre 1979 modifi). Dnombrement des
    streptocoques fcaux.
    Rodier, J. 1984. Lanalyse de leau. Dnombrement des streptocoques fcaux prsums (Mthode par ensemencement en
    milieux liquides). Dunod 7me Ed., 825-828.
    XP CEN ISO/TS 11133-2 (V 08-104-2). Janvier 2004. Microbiologie des aliments. Guide pour la prparation et la
    production des milieux de culture. Partie 2 : Guide gnral pour les essais de performance des milieux de culture.

    Les mentions portes sur ltiquette sont prdominantes sur les formules ou les instructions dcrites dans ce document.
    Les informations et les spcifications contenues dans cette fiche technique ont t tablies la date du 2009-02-10.
    Elles sont susceptibles dtre modifies tout moment, sans pravis.
    Code document : BK060/F/2001-01 : 4.

    3/3
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