Incertitude

Section Sant Humaine
GUIDE TECHNIQUE D'ACCREDITATION

POUR LEVALUATION DES INCERTITUDES DE
MESURE EN BIOLOGIE MEDICALE
SH GTA 14
Rvision 00
GUIDE TECHNIQUE DACCREDITATION INCERTITUDES EN BIOLOGIE MEDICALE

SH GTA 14 rv. 00 Page 2 sur 26
SOMMAIRE

1 OBJET DU DOCUMENT ................................................................................................. 3
2 DOCUMENTS DE REFERENCE ..................................................................................... 3
3 DOMAINE D'APPLICATION ........................................................................................... 3
4 MODALITES D'APPLICATION ....................................................................................... 4
5 SYNTHESE DES MODIFICATIONS ................................................................................ 4
6 LINCERTITUDE DE MESURE ....................................................................................... 5
7 PROCESSUS DANALYSE BIOLOGIQUE : DEFINITION ET ANALYSE ....................... 7
7.1 Dfinition du mesurande ............................................................................................. 7
7.2 Analyse du processus ................................................................................................. 9
8 LES DIFFERENTES METHODES D'EVALUATION DE LINCERTITUDE DE
RESULTATS QUANTITATIFS ...................................................................................... 10
8.1 Mthode GUM ..................................................................................................... 12
8.2 Mthode Intra-laboratoire (CIQ + Matriaux de Rfrence) ................................. 14
8.3 Mthode CIQ / EEQ ............................................................................................ 15
8.4 Mthode CIQ + Etalon fournisseur ...................................................................... 18
9 EXPRESSION DU RESULTAT DE L'ANALYSE .......................................................... 18
10 EXEMPLES DAPPLICATION ...................................................................................... 19
10.1 Mthode CIQ / EEQ ............................................................................................ 19
10.2 Mthode CIQ + Etalon Fournisseur ..................................................................... 23
11 CONCLUSION .............................................................................................................. 24
12 BIBLIOGRAPHIE .......................................................................................................... 25


1 OBJET DU DOCUMENT
Les normes NF EN ISO 15189 [1] et NF EN ISO 22870 [2] (examens de biologie mdicale
dlocaliss) dfinissent les exigences particulires concernant la qualit et la comptence,
pour les laboratoires de biologie mdicale. Ces deux normes se sont appuyes sur la norme
NF EN ISO/CEI 17025 qui dfinit les prescriptions gnrales concernant la comptence des
laboratoires d'talonnage et d'essais ancre depuis plusieurs annes dans le monde de la
mesure.

Les textes rglementaires imposent que les comptes rendus dexamens comportent une
interprtation des rsultats (Cf. SH REF 02). Lobjet de ce document est de dfinir la
mthodologie qui permet de dmontrer la matrise de la qualit des rsultats danalyse
quantitatifs (les rsultats qualitatifs ne sont pas pour linstant abords dans ce document) en
valuant lincertitude de mesure. Lincertitude associe ce rsultat permet une meilleure
valuation en confortant le diagnostic et la prise de dcision thrapeutique.

Le prsent guide technique dfinit des mthodes dvaluation de lincertitude de mesure qui
permettent de rpondre lexigence du paragraphe 5.6.2 de la norme NF EN ISO 15189
qui stipule que : "le laboratoire doit dterminer lincertitude des rsultats, dans les cas o
cela est pertinent et possible. Toutes les composantes importantes de lincertitude doivent
tre prises en compte". Lvaluation de lincertitude sapplique galement aux examens
dlocaliss (norme NF EN ISO 22870), au mme titre que les autres.
Les mthodologies dvaluation de lincertitude de mesure dcrites dans ce document sont
celles reconnues comme tant appropries par le Cofrac pour rpondre aux exigences des
normes NF EN ISO 15189 et NF EN ISO 22870. Le laboratoire est libre d'appliquer dautres
mthodologies dvaluation de lincertitude de mesure sil dmontre que les dispositions
prises permettent de satisfaire cette exigence des normes.
La pertinence dvaluer lincertitude de mesure est dcrite partie 6 (6 lincertitude de
mesure).
2 DOCUMENTS DE REFERENCE
[1] Laboratoire danalyses de Biologie Mdicale Exigences particulires concernant la
qualit et la comptence. NF EN ISO 15189: aot 2007 (AFNOR);
[2] Analyses de biologie dlocalise (ADBD) Exigences concernant la qualit et la
comptence. NF EN ISO 22870: mai 2006 (AFNOR);
[3] VIM - Vocabulaire International de Mtrologie Concepts fondamentaux et gnraux et
termes associs (www.bipm.org);
[4] GUM - Guide pour lexpression de lincertitude de mesure (www.bipm.org).

Les autres documents sur lesquels sappuie ce guide se trouvent lists dans le chapitre 12,
BIBLIOGRAPHIE .
3 DOMAINE D'APPLICATION
Le domaine d'application du prsent guide concerne le cadre spcifique des incertitudes de
mesure en biologie mdicale.

En particulier, le prsent guide s'attache l'valuation de l'incertitude de mesure des
rsultats des mthodes quantitatives, avec prise en compte des composantes influentes de
la phase analytique ainsi que certaines composantes de la phase pr-analytique.

Linfluence de la phase pr-analytique, bien qu'essentielle, ne pourra pas tre quantifie
prcisment, ce qui implique quil appartient au laboratoire de faire une analyse des facteurs
dinfluence pr-analytiques en fonction de ses possibilits.

En revanche, il n'a pas t pris en compte la variabilit biologique, due au patient, puisqu'il
est demand au laboratoire d'tablir les incertitudes lies la phase analytique du processus
de lexamen biologique. Toutefois, la variabilit biologique est prendre en considration
pour l'exploitation du rsultat de lexamen et de son incertitude associe, notamment en
termes d'interprtation et de dcision cliniques/thrapeutiques par rapport un seuil ou un
rsultat antrieur.

Dans le cas des mthodes qualitatives le laboratoire doit procder une analyse du
processus, afin d'tablir les lments de variabilit du processus. Cette analyse doit tre
ralise en prenant en compte l'intgralit du processus analytique, et elle consiste :

identifier et inventorier tous les facteurs susceptibles d'influencer le rsultat, au mme
titre que dans le cas des mthodes quantitatives ;
justifier l'influence juge non significative de certains facteurs non pris en compte ;
montrer comment sont matriss les facteurs dont l'influence est significative, de manire
minimiser les risques et les erreurs.

A l'issue de cette analyse, une estimation des principales composantes d'incertitude sera
conduite ainsi que leur impact sur les rsultats. S'il persiste des facteurs d'influence
significative ne pouvant tre totalement matriss, leur impact sur le rsultat doit tre valu
et le cas chant faire l'objet d'une information au prescripteur si elle est importante pour la
validit des rsultats.

Ce guide s'adresse :
aux Laboratoires de Biologie Mdicale (LBM) et autres structures engags dans une
dmarche d'accrditation Cofrac selon les normes NF EN ISO 15189 et NF EN ISO
22870 ; dans ce cas il reprsente des recommandations fortes, toute autre dmarche
argumente et documente tant cependant acceptable ;
aux valuateurs du Cofrac, et constitue une base d'harmonisation leur usage ;
aux fournisseurs, pour comprendre et aider les laboratoires et autres structures dans leur
dmarche ;
tout laboratoire d'autres domaines engag dans cette dmarche et qui se trouve
confront aux mmes problmatiques.
4 MODALITES D'APPLICATION
Le prsent guide technique daccrditation est applicable compter du 15 octobre 2011.
Dans le domaine de la Biologie Mdicale et au jour de son approbation, ce guide technique
d'accrditation reflte l'tat d'avancement des connaissances en termes dvaluation de
lincertitude des rsultats quantitatifs.
5 SYNTHESE DES MODIFICATIONS
Il sagit de la premire version du document, il porte lindice de rvision 00. Aucune marque
de modification nest indique.

6 LINCERTITUDE DE MESURE
Lestimation des incertitudes de mesure sur les rsultats est une exigence de la norme NF
EN ISO 15189. Dans le paragraphe 5.6.2, il est indiqu : "Le laboratoire doit dterminer
l'incertitude des rsultats, dans le cas o cela est pertinent et possible. Toutes les
composantes importantes de l'incertitude doivent tre prises en compte. Les sources
contribuant l'incertitude peuvent inclure l'chantillonnage, la prparation des chantillons,
la slection des aliquotes d'chantillon, les calibrateurs, les matriaux de rfrence, les
grandeurs d'entre, l'quipement utilis, les conditions exprimentales, l'tat de l'chantillon
et les changements de manipulateurs."

Lors de ladoption/adaptation-dveloppement dune mthode, le laboratoire value
lincertitude des rsultats de mesure dans son environnement, lorsquil estime avoir
suffisamment de donnes. Cette incertitude est revue priodiquement (une rvaluation
annuelle des incertitudes est souhaitable) et rvise si besoin (changement significatif, par
exemple changement dquipement ou lors de la revue priodique des procdures
analytiques , Cf. NF EN ISO 15189 5.5.2).

Que reprsente lincertitude de mesure ?

La dfinition reconnue internationalement (VIM[3]) est la suivante :
Paramtre non ngatif qui caractrise la dispersion des valeurs attribues un mesurande,
partir des informations utilises.

Note 1 du VIM : lincertitude de mesure comprend des composantes provenant deffets
systmatiques, telles que les composantes associes aux corrections et aux valeurs
assignes des talons, ainsi que lincertitude dfinitionnelle. Parfois, on ne corrige pas des
effets systmatiques estims mais on insre plutt des composantes associes de
lincertitude.

Remarque : pour tre applique toute correction dun effet systmatique est documenter.

Lincertitude est un indicateur de la qualit dun rsultat et de la fiabilit qu'on peut lui
accorder, elle est associe tout rsultat de mesure.

Pourquoi quantifier lincertitude de mesure ?

La connaissance de lincertitude constitue une aide pour le clinicien dans sa prise de
dcision diagnostique ou thrapeutique, ou apporte au biologiste mdical un lment
important pour l'interprtation du rsultat, par exemple lorsque ce dernier est compar un
rsultat antrieur ou un seuil de dcision reconnu (Cf. SH REF 02 5.6).

Lvaluation de lincertitude de mesure est une dmarche qui repose sur un besoin de mieux
connatre la qualit du rsultat et ainsi donner confiance dans son utilisation. La demande
peut tre exprime :
- par la rglementation ;
- par le prescripteur ;
-

Lincertitude est un outil daide la dcision et linterprtation. Son valuation va permettre
de prendre en compte une information importante du processus danalyse que le rsultat
seul nintgre pas. Les quelques exemples qui suivent permettent dillustrer cette utilisation.


Cas n1 : Comparaison de 2 rsultats antrieurs de biologie mdicale

Que peut-on dire des deux mesures sur le graphique 1 ?

Mathmatiquement, les deux rsultats sont diffrents. Il manque de linformation et
notamment sur la dispersion autour des rsultats annoncs.

Lorsque lon indique, avec les rsultats, lintervalle correspondant lincertitude de mesure, il
est possible de conclure une diffrence ou non entre les deux rsultats danalyse.

Sur le graphique 2, les intervalles dincertitude se chevauchent (zone grise), les deux
rsultats danalyse ne sont pas significativement diffrents.

Cas n2 : Outil daide la dcision

Lincertitude de mesure permet dapprhender le risque par rapport un seuil dcisionnel
(ligne en pointill sur le graphique 3 ci-dessus).
Rsultat positif
Rsultat ngatif

Nous avons ici diffrents cas de figures de positionnement de rsultats danalyse (ronds)
associs de leurs incertitudes (barre) par rapport un seuil. La prise de risque dans la
dcision mdicale avec la simple analyse du rsultat dpend de son chevauchement avec le
seuil dcisionnel. Lvaluation de cette prise de risque est possible grce lincertitude qui
permet un calcul de probabilit (calcul dune partie de laire sur la courbe).

Remarques : - pour le rsultat 2, le risque de dpassement du seuil dcisionnel existe
(risque de faux ngatifs faible mais rel ; valuer avec les signes cliniques et les autres
rsultats danalyses).
- pour le rsultat 3, lexistence dune non-atteinte du seuil dcisionnel existe
(risque de faux positifs faible mais rel ; valuer avec les signes cliniques et les autres
rsultats danalyses).

Tous ces exemples qui ne sont pas exhaustifs, dmontrent que lincertitude nest pas un
artifice autour du rsultat mais un paramtre qui vient complter ce rsultat pour aider
prendre les bonnes dcisions.
7 PROCESSUS DANALYSE BIOLOGIQUE : DEFINITION ET
ANALYSE
Quatre mthodes de quantification de l'incertitude ont t retenues dans ce guide. Des
exemples illustrent lvaluation de lincertitude dans le chapitre 10.

Il est important, quelle que soit la mthode utilise, que le laboratoire analyse le processus
de mesure en ralisant les deux tapes suivantes :

dfinir le mesurande ;
analyser le processus de mesure.
7.1 Dfinition du mesurande
Dfinir le mesurande, cest dire ce que lon veut mesurer dans le contexte de la biologie
mdicale avec le maximum dinformations ayant un impact sur la mesure (mthode,
environnement, matrice,).

Le tableau ci-dessous reprend des exemples de mesurande.

Prescription Analyte
Type de grandeur
(mesurande)
Matrice Unit Commentaire
Glycmie Glucose
Concentration de
glucose
Sang
total
Plasma
mmol/L
g/L


Troponine
Troponine I ou
I ultra-sensible

Troponine T
Concentration de
troponine I ou I ultra-
sensible selon la
mthode fournisseur

Concentration de
troponine T selon la
mthode fournisseur

Plasma ou
srum

g/L
Chaque fournisseur
ayant dvelopp sa
propre mthode, les
performances et les
seuils sont diffrents
Lipasmie Lipase
Concentration de
lactivit catalytique de
la lipase dans des
conditions dfinies
Srum et
plasma
U/L
(mol/mi
n/L)
katal
Lactivit catalytique
varie en fonction des
conditions (substrat,
temps, temprature,
pH)
CA 19.9 CA 19.9
Concentration de CA
19.9 selon la nature de
lAc et lpitope
reconnu
Srum mUI/L
Selon le fournisseur
lAc et lpitope
reconnus varient
Cratininmie Cratinine
Concentration
mesure par la
mthode Jaff
Concentration
mesure par la
mthode Jaff
compense
Concentration
enzymatique
GC MS (mthode de
rfrence)
Srum ou
plasma
mol/L

Spcificit analytique
variable selon la
mthode
Triglycridmie Glycrol
Concentration de
glycrol aprs
hydrolyse
Concentration de
glycrol aprs
hydrolyse et dduction
du glycrol existant
Srum ou
plasma
mmol/L

Il est ncessaire de ne pas confondre l'analyte et le mesurande. Dans le cas de la glycosurie
la dfinition du mesurande est : "Concentration de glucose urinaire" exprime en mmol/L ou
en g/L ; lanalyte tant le glucose.

Notion de raccordement un talon international

La traabilit mtrologique est un des concepts les plus importants pour la qualit des
analyses. Elle est dfinie dans le VIM (2.41) [3] : proprit dun rsultat de mesure selon
laquelle ce rsultat peut tre reli une rfrence par lintermdiaire dune chane
ininterrompue et documente dtalonnages dont chacun contribue lincertitude de
mesure .

On notera que les rfrences cites dans la dfinition peuvent tre :
une unit de mesure, par exemple la mole, unit du Systme International dunits (SI),
concentration de glucose dans le sang : 6,44 mmol/L, U = 0,64 mmol/L ;
une procdure de mesure par exemple une mthode slectionne par le JCTLM ;

un talon, par exemple pour un dosage de lHCG Gonadotrophine Chorionique, le 4
me

talon international de lOrganisation mondiale de la sant (OMS), 1999, 75/589, 650
units internationales (UI) par ampoule.

La traabilit des mesures au SI (raccordement) est utile pour assurer la fois la
confrontation inter-laboratoires des rsultats, la comparabilit des rsultats sur le long terme
et la dcision par rapport un seuil national ou international unique (ex : diabte).

Pour plus dinformation consulter la norme NF EN ISO 17511 - Mesurage des grandeurs
dans des chantillons d'origine biologique - Traabilit mtrologique des valeurs attribues
aux agents d'talonnage et aux matriaux de contrle.
7.2 Analyse du processus
Lanalyse du processus de mesure (pr-analytique et analytique) permet didentifier les
facteurs dinfluence susceptibles dintroduire une variation sur le rsultat.
L'incertitude de mesure associe un rsultat est la combinaison d'un certain nombre de
composantes ayant une ou des influence(s) sur la valeur trouve pour un mesurande donn.
Il est important avant toute dmarche d'valuation de l'incertitude d'analyser le processus de
mesure de faon identifier le plus exhaustivement possible les facteurs d'incertitude.
Cette analyse est ncessaire quelle que soit la mthode de calcul envisage pour valuer
l'incertitude.
Le diagramme des 5 M peut tre utilis pour identifier les principaux facteurs dincertitude
susceptible dinfluencer significativement le rsultat, y compris ceux dont la quantification se
rvle difficile, voire impossible. Il sagit dun outil daide lanalyse du processus de mesure
qui permet dexaminer le processus laide de 5 lments (Moyens, Milieu, Mthode, Main
duvre, Matire) :

Exemple de facteurs dinfluence :

Pr-analytique :
Moyens : rcipient sous-vide, coulement libre, seringue,
aiguille picrnienne ;
Milieu : types de tubes, condition et dure de transport des
chantillons prlevs, conditionnement avant analyse
(centrifugation, conservation, ) ;
Mthode de prlvement : pli du coude, ordre des tubes,
dure de mise en place du garrot, ;
Main d'uvre : qualification/habilitation des prleveurs
internes et externes ;
Matire : prparation du patient/qualit de l'chantillon
(lipmique, ictrique, hmolys, mdicaments, ).
Rsultat
de mesure
Rsultat
de mesure
MOYENS MOYENS MATIERE MATIERE METHODE METHODE
MILIEU MILIEU MAIN D OEUVRE MAIN D OEUVRE

Analytique :
Moyens : pipette, automate, informatique, ;
Milieu : conditions ambiantes (temprature, pression
atmosphrique), conditions de stockage des
prlvements, conditions de stockage des ractifs, ;
Mthode : mode opratoire de l'analyse, ;
Main d'uvre : qualification/habilitation de loprateur, ;
Matire : lots de ractifs, stabilit des chantillons,

Linterprtation de lexamen tient compte dun certain nombre dinformations :
- le rsultat de lanalyse associ de son incertitude ;
- la variabilit intra-individuelle ;
- les renseignements cliniques ;
-
8 LES DIFFERENTES METHODES D'EVALUATION DE
LINCERTITUDE DE RESULTATS QUANTITATIFS

De nombreuses approches pour la dtermination de lincertitude de mesure ont t
proposes, ce guide rapporte quatre mthodes pouvant sappliquer au domaine de la
biologie mdicale.

Remarque : il est recommand destimer lincertitude plusieurs niveaux de concentrations
de la gamme dutilisation et plus particulirement aux seuils de dcision thrapeutique.

Mthode GUM (mthode de rfrence reconnue internationalement)
L'approche de rfrence de lvaluation des incertitudes GUM est dcrite dans son
chapitre 8 [4]. Elle repose sur l'hypothse de la connaissance du modle de mesure physico-
chimique dcrivant le processus de mesure. Cette approche ncessite davoir au pralable
identifi les composantes dincertitude, de les avoir modlises et quantifies. Le calcul
rsulte de mthodes statistiques prenant en compte toutes les composantes. Celles-ci ne
sont que trs rarement toutes disponibles en biologie mdicale.

Mthode Intra-laboratoire (CIQ + Matriaux de Rfrence)
La fidlit intermdiaire et la justesse peuvent tre calcules partir des donnes de la
vrification/validation initiale de la mthode.

La fidlit intermdiaire peut aussi tre tablie partir des donnes de contrles internes de
qualit (CIQ) qui permettent le calcul dun coefficient de variation (Cf. SH GTA 04).

La justesse peut tre tablie partir soit :
- de Matriaux de Rfrence Certifis (MRC, matriau accompagn dun certificat
fournissant la valeur de rfrence et son incertitude associe ainsi que la dclaration de la
traabilit mtrologique) ou non certifis (MR, matriau suffisamment homogne, stable
avec une valeur connue) ;


- en comparaison avec une mthode de rfrence dincertitude connue. Dans le cas dune
porte de type B, le laboratoire peut tablir la justesse partir dune comparaison avec
par exemple la mthode de rfrence slectionne par le JCTLM (en utilisant une
mthode primaire telle que par exemple la spectromtrie de masse avec dilution
isotopique) ;
- en comparaison avec les rsultats dautres laboratoires experts utilisant la mme
mthode. Cette dernire mthode suppose que les laboratoires participants matrisent
leurs erreurs systmatiques.

En biologie mdicale les MRC ne sont pas dusage courant et sont soit utiliss pour le
raccordement des talons commercialiss par les fabricants de DM-DIV (Cf. SH GTA 01
7.21.1 et SH GTA 04 9.1.3) soit par des laboratoires qui attribuent des valeurs aux agents
dtalonnage, calibrants, (Cf. NF EN ISO 17511 Mesurage des grandeurs dans des
chantillons dorigine biologique Traabilit mtrologique des valeurs attribues aux agents
dtalonnage et aux matriaux de contrle).

Mthode CIQ / EEQ
Cette mthode dvaluation de lincertitude repose sur lexploitation des donnes
internes (CIQ) et des donnes externes telles que les EEQ ou les CIQ externaliss.

Mthode CIQ + Etalon fournisseur
Cette mthode propose, aprs dfinition correcte du mesurande, dvaluer lincertitude de
mesure partir de ces composantes :
incertitude lie la mthode, telle quutilise au laboratoire et reprsente par une
estimation de la fidlit intermdiaire tablie partir des donnes de CIQ recueillies sur une
priode suffisamment longue permettant de reprsenter la variabilit du processus
analytique ;
incertitude lie aux indications fournies avec ltalon du systme analytique (DM-DIV).

Cette mthode propose en 2004 par lAustralian Association of Clinical Biochemists dans le
cadre de laccrditation obligatoire des LBM australiens, et reconnue en 2007 par leurs
instances rglementaires (National Pathology Accreditation Advisory Council), constitue la
base des recommandations de la Socit franaise de biologie clinique publies en 2007.


Le schma suivant prsente les diffrentes approches dvaluation de lincertitude
pour la biologie mdicale :

Dans ce guide, chacune des quatre mthodes dvaluation des incertitudes sera expose
ainsi que les avantages et les limites lis lapplication dans le domaine de la biologie
mdicale. Des exemples illustrent lvaluation de lincertitude dans le chapitre 10.
8.1 Mthode GUM
1

L'incertitude associe chacune des grandeurs d'entre du modle de mesure physico-
chimique est value en appliquant, soit des mthodes de type A (mthodes statistiques),
soit des mthodes de type B (autres mthodes). L'incertitude associe au rsultat est ensuite
value en "propageant" l'incertitude sur chacune des grandeurs d'entre en appliquant la loi
de propagation de l'incertitude. L'incertitude largie est ensuite calcule en multipliant
l'incertitude-type obtenue par un facteur d'largissement k gal gnralement 2, ce qui
correspond un intervalle de confiance d'environ 95 % si la loi de distribution est normale.

1
Note : lors des applications numriques tous les termes sont exprims de faon homogne, soit en valeur relative soit en
valeur absolue.
DEFINITION DU MESURANDE & LISTE DES COMPOSANTES DINCERTITUDE
Choix de la mthode dvaluation de lincertitude

Mthode GUM Mthode CIQ /
EEQ
Mthode Intra-
laboratoire (CIQ +
Matriaux de
Rfrence)
Mthode CIQ +
Etalon fournisseur

Mthode qui repose
sur la mthode de
rfrence dcrite
dans le rfrentiel
guide pour
lincertitude de
mesure

Mthode qui repose
sur lexploitation
des donnes
internes et des
donnes externes :

CIQ
EEQ
CIQ externaliss

Mthode qui repose
sur lexploitation des
caractristiques
values lors de la
vrification/validation
de la mthode
danalyse :

Fidlit
intermdiaire (CIQ)
Justesse (biais par
rapport un MR)
Courbe
dtalonnage

Mthode qui repose
sur lexploitation
des donnes du CIQ
et de ltalon
fournisseur

La mthode est dcrite thoriquement ci-dessous :
Soit C le mesurande et X
i
les diffrentes grandeurs d'entre,
) ,..., , (
2 1 N
X X X f C =
La "loi de propagation de l'incertitude" permet de calculer la variance sur le rsultat l'aide
de l'quation suivante :
( ) ) , ( 2 ) (
1
1 1
2
2
1
j i
N
i
j
N
i j
i
i
N
i
i
X X u
X
f
X
f
X u
X
f
C u

= + = =
|
|
\
|
|
|
\
|
+
|
|
\
|
=
- ) (C u : variance compose de y ;
-
i
x
f
: coefficient de sensibilit de y par rapport x

i
;
- ( )
i
x u
2
: variance de x
i
;
- ( )
j i
x x u , : covariance entre x
i
et x
j
.

Pour cette approche, il est ncessaire de disposer du modle physico-chimique. Exemple de
modle physico-chimique appliqu au glucose, selon la mthode glucose-oxydase aprs
calibrage en deux points de l'analyseur :

-
g
C : concentration de glucose dans lchantillon patient [mmol/L] ;
-
0
C : concentration de glucose d'une solution tablissant le point zro de la courbe de
calibrage [mmol/L] ;
-
s
A : absorbance corrige du blanc du spcimen [AU : unit d'absorbance] ;
-
cal
A : absorbance corrige des solutions dtalonnage dans la cuve [AU : unit
d'absorbance] ;
-
cal
C : concentration de glucose dans ltalon [mmol/L] ;
- V1 : volume de lchantillon (L) ;
- V2 : volume des ractifs (L) ;
-
matrice
f : facteur d la contribution des effets possibles de matrice ;
-
drive
f : facteur d la contribution d'une drive permise dans la sensibilit
d'instrument ;
-
pre
K : correction due la contribution de la phase pr-analytique [mmol/L].

La mthode requiert de modliser le processus et de quantifier les incertitudes-types lies
chaque facteur dinfluence. Lavantage de cette mthode est davoir le poids de lincertitude
de chaque facteur dinfluence et ventuellement davoir des axes damlioration. Cest une
dmarche longue qui ne peut tre applique systmatiquement tous les mesurandes dans
un LBM.

( ) L mmol K f f
V
V V
C C
A
A
C C
pre drive matrice cal
Cal
s
g
/
2
2 1
0 0
|
|
\
|
+ |
\
| +
(
(
+ =

Remarques : cette mthode peut tre un outil damlioration continue pour les rsultats
analytiques en porte de type B ;
lorsque cela est possible, il est pertinent dvaluer lincertitude par une autre
mthode pour confronter les ordres de grandeur.
8.2 Mthode Intra-laboratoire (CIQ + Matriaux de Rfrence)
1

Cette approche utilise les rsultats disponibles au sein du laboratoire (fidlit intermdiaire,
justesse obtenue avec un Matriau de Rfrence (MR), courbe dtalonnage,) permettant
de dmontrer son aptitude et de rpondre aux besoins exprims par le laboratoire.

Le guide Cofrac sur la validation des mthodes en biologie mdicale (SH GTA 04) cite les
principales caractristiques d'une mthode de mesure.

La rptabilit (adapte partir du VIM[3]) est la valeur minimale de la fidlit, elle
s'value par la dispersion (cart-type) de mesures indpendantes obtenues avec des
chantillons identiques par un mme oprateur utilisant le mme quipement et dans un
court intervalle de temps (une mme srie).

Note : c'est la premire caractristique valuer, car l'influence des autres facteurs est
teste par rapport la rptabilit (test de comparaison de variance).

La fidlit intermdiaire (reproductibilit intra-laboratoire), s'value en faisant varier un ou
plusieurs facteurs (c'est trs souvent le temps et/ou le facteur oprateur et/ou le facteur li
aux lots de ractifs, ...). Elle se quantifie partir des donnes du CIQ (contrle interne de
qualit) qui peut sexprimer par un CV (coefficient de variation) en % que lon traduit en
cart-type laide de la formule ci-dessous :

La justesse (dfinie dans le VIM[3]) reprsente ltroitesse de laccord entre la moyenne
dun nombre infini de valeurs mesures rptes et une valeur de rfrence. Pour valuer
cette erreur de justesse, il faut une valeur de rfrence. La valeur de rfrence peut tre
matrialise par :
- un talon ;
- un Matriau de Rfrence (MR) ;
- une mthode de rfrence ;
- des essais inter-laboratoires (essai daptitude).
-

Lvaluation de lerreur de justesse (E
justesse
) se base sur l'estimation d'un cart (biais) obtenu
entre la moyenne des rsultats de mesure ( x ) et la valeur de rfrence (V
rf
).

E
justesse
= x -X
rf

1
valeur absolue.
ermdiaire fidlit CQI
m CV
type Ecart
int
100

=
=

Lincertitude due cette erreur de justesse se quantifie partir de cet cart et du choix dune
loi uniforme :

Courbe dtalonnage des analyseurs automatiques : ltalonnage des analyseurs
automatiques est tabli par le fournisseur partir de la relation entre les solutions talons et
les lectures de lautomate sur un domaine dfini. La qualit de cette modlisation (courbe
dtalonnage) est parfois dcrite par des paramtres dans la fiche technique des
fournisseurs. Lincertitude dtalonnage doit se quantifier partir de lincertitude sur
ltalon laquelle sajoute lincertitude de la courbe dtalonnage (incertitude de
modlisation).

Remarque : le plus souvent la courbe dtalonnage et les informations associes ne sont pas
accessibles lutilisateur final.

Lincertitude sur le rsultat danalyse est obtenue en prenant la racine carre de la somme
quadratique de toutes les composantes de lincertitude selon la formule suivante :

Cette mthode repose sur lutilisation de donnes intra-laboratoires ventuellement
accessibles dans le dossier de vrification/validation. Lorsque lon ne dispose pas de tous
les lments, il est prfrable de choisir une autre mthode dvaluation de lincertitude de
mesure.
8.3 Mthode CIQ / EEQ
1

Cette mthode est fonde sur lexploitation des donnes de contrles internes de la qualit
et des donnes dvaluation externes de la qualit.

Contrle interne de qualit (CIQ) : ralis au sein du laboratoire laide dchantillons de
contrles lors de la mesure dchantillons biologiques de patients pour vrifier la matrise du
processus analytique. Linterprtation se fera en fonction de limites de tolrance prtablies.
Contrle interne de qualit externalis : CIQ ralis par plusieurs laboratoires sur un
mme lot dchantillons de contrles confronts entre eux par tablissement des moyennes
gnralement mensuel permettant destimer la justesse (biais). Le CIQ externalis nest
pas considr comme un EEQ (SH REF 02).
Comparaison inter-laboratoires (CIL) : organisation, excution et valuation de mesurages
ou d'essais de la mme entit ou dentits similaires par deux laboratoires ou plus selon des
conditions prdtermines (ISO/CEI 17043). Le paragraphe 5.6.4 de la norme NF EN ISO
15189 prcise : Le laboratoire doit participer des comparaisons inter-laboratoires, telles
que celles organises dans le cadre de programmes dvaluation externe de la qualit.

1
valeur absolue.
( )
2
int _
2 2
mod
2
ermdiaire fidlit talon lisation justesse

u u u C u + + + =
3
justesse
justesse
E
u =

Evaluation externe de qualit (EEQ) : procdure d'valuation des performances d'un
laboratoire par le biais d'une comparaison inter-laboratoires ralise par un organisateur
respectant substantiellement les exigences de lISO 43-1 (cf. 5.6.4) et la rglementation en
vigueur laide dchantillons de contrle de rsultats inconnus.

quadratique des composantes de lincertitude issues du CIQ et de lEEQ :

( ) ( ) ( ) EEQ u CIQ u C u
2 2
+ =
- ( ) CIQ u
2
: reprsente la variance (carr de l'cart-type) de l'ensemble des rsultats
du contrle interne de qualit (CIQ) ;
- ( ) EEQ u
2
: variance lie la justesse (biais).

Lutilisation de CIQ externaliss est une alternative lvaluation dune justesse lorsquil
nexiste pas dEEQ satisfaisant ou quand lEEQ nest pas exploitable :

( ) ( ) ( )
externalis
CIQ u CIQ u C u
2 2
+ =

- ( )
externalis
CIQ u
2
: variance lie la justesse.
Les limites du CIQ externalis :
- moyenne qui lisse le biais ;

- mme chantillon utilis pour les deux termes ;
- valeur cible connue ;
-

La fidlit intermdiaire se quantifie par le coefficient de variation issu du CIQ. Le coefficient
de variation (CV%) se calcule partir de l'cart-type et de la moyenne des rsultats d'un
CIQ :

100
) (
int
m CV
CIQ u
ermdiaire fidlit
= =

L'indicateur de variabilit (CV ou cart-type du CIQ) sert estimer la variabilit du processus
analytique. Cette variabilit pour tre reprsentative devra prendre en compte des rsultats
de CIQ sur une priode suffisamment longue.


Le laboratoire utilisera les valeurs de plusieurs EEQ ou les valeurs des CIQ
externaliss :
Pour chaque comparaison inter-laboratoires i, on obtient le biais suivant :
( )
ref lab i
X X E =
- x
lab
: rsultat du laboratoire ;
- x
ref
: valeur assigne de la comparaison ;
- E : cart entre le rsultat du laboratoire et la valeur assigne.

Soit n le nombre de comparaisons tudies, la moyenne de l'cart est :
n
) x x (
E
i
i ref lab

=
1
) (
2
n
E E
i
i
E
)

-
E
cart-type des carts entre le rsultat du laboratoire et la valeur assigne.
Lincertitude value partir des valuations externes est obtenue partir de la valeur
absolue de lcart moyen associ de la loi de distribution uniforme (on divise la demi-tendue
par racine de 3) et de lcart-type des carts prcdemment calcul. La formule de calcul est
la suivante :
( )
2
2
3
E
E
EEQ u +
|
|
\
|
=
On obtient :
( ) ( ) ( ) EEQ u CIQ u C u
2 2
+ =
( )
2
2
2
3 100
E
E m CV
C u + |
\
|
+
|
\
|
=

- C : concentration de lanalyte dans lchantillon patient [mmol/L] ou tout autre
mesurande.

Des exemples sont traits au paragraphe 10.

8.4 Mthode CIQ + Etalon fournisseur
1

quadratique des composantes de lincertitude relatives aux rsultats du CIQ dune part, et de
ltalon fournisseur dautre part.

( ) ( ) ( )
r fournisseu
Etalon u CIQ u C u
2 2
+ =

Lincertitude de ltalon est une donne fournisseur.
9 EXPRESSION DU RESULTAT DE L'ANALYSE
Les valeurs numriques de l'estimation C du mesurande et de son incertitude-type u(C) (ou
de son incertitude largie U) ne doivent pas tre donnes avec un nombre excessif de
chiffres significatifs. On retiendra qu'il suffit habituellement de fournir l'incertitude-type ou
l'incertitude largie avec 2 chiffres significatifs diffrents de 0 partir de la gauche et que
pour le rsultat le dernier chiffre retenir est celui qui a la mme position que le deuxime
chiffre significatif dans l'expression de l'incertitude (selon GUM[4]).

U C (k=2) unit

Exemple d'arrondi 2 chiffres significatifs, l'analyse de glycmie d'un patient pourrait
s'exprimer de la faon suivante :

6,44 mmol/L 0,64 mmol/L (avec k= 2)
ou de cette faon,

11,2 mmol/L 1,3 mmol/L (avec k= 2)

On remarque que dans le premier rsultat nonc, l'incertitude indique ne comporte que
deux chiffres significatifs et que la valeur du rsultat a t arrondie au centime de mmol/L,
comme l'incertitude.

Pour une valeur qui s'exprime en pourcentage, par exemple l'hmoglobine glyque, et pour
une incertitude largie (en valeur relative) de 6%, on pourrait exprimer les rsultats de la
faon suivante :

HbA
1c
mesure
Expression du rsultat
5% 5,0 0,3 % (k=2)
7%
7,0 0,4 % (k=2)

1
valeur absolue.

10 EXEMPLES DAPPLICATION
Lobjectif de ce paragraphe est de prsenter les rsultats de diffrentes mthodes de calcul
de lincertitude de mesure.
10.1 Mthode CIQ / EEQ

Application au dosage de lacide urique dans le plasma

Tableau des rsultats observs pour 10 EEQ diffrents pour le dosage
de lacide urique plasmatique

E (biais) cart entre le rsultat du laboratoire et la valeur de rfrence (Vrf)

La moyenne de lcart :

n
) x x (
E
i
i ref lab

=

LOT
Rsultat
(mol/L)
Vrf
(mol/L)
Effectif Ecart-type
E : biais
(mol/L)
Absolue
du biais
Biais en %
10B01 392 395 699 19.2 -3 3 -0.8
10B07 257 272 736 9.1 -15 15 -5.5
10B13 491 496 734 19.8 -5 5 -1.0
10B18 187 199 696 10 -12 12 -6.0
10B22 286 302 711 12.7 -16 16 -5.3
10B27 259 271 678 9 -12 12
-4.4
10B30 384 393 737 20.2 -9 9 -2.3
10B36 559 585 739 23.4 -26 26
-4.4
10B40 293 298 740 13.1 -5 5 -1.7
10B80 199 202 704 10.3 -3 3 -1.5

Rsultats des valuations externes de la qualit pour l'acide urique (2010)
Graphique des carts pour l'acide urique
-30
-25
-20
-15
-10
-5
0
0 2 4 6 8 10 12
Lcart-type de lcart :

1
) (
2
n
E E
i
E


Soit 10 le nombre dEEQ tudies, le tableau ci-dessous rsume les paramtres estims des
carts des EEQ :

Stat descriptive (mol/L) des carts des EEQ
Moyenne -10.600
Ecart-type 7.230
Minimum 3.000
Maximum 26.000
Etendue 23.000
Effectif 10

absolue de lcart moyen associ de la loi de distribution uniforme et de lcart-type des
carts. La formule de calcul est donc :

( )
2
2
3
E
E
EEQ u +
|
|
\
|
=

( ) ( )
2
2
230 , 7
3
60 , 10
+
|
|
\
|
= EEQ u

Exploitation des CIQ :

Rsultats du CIQ (mmol/L)
CV% 2.6
Ecart-type 6.552
Moyenne 252

Lvaluation de lincertitude se rsume dans le tableau suivant :

u :
Incertitude -
type (mol/L)
Incertitude
compose
U (k=2)
mol/L
6.552 6.552
7.230 7.230
-10.600 6.1199
Source de l'information
11.5173 23
Composante de
l'incertitude
Incertitude due la
dispersion intra (CIQ)
Dispersion calcule
partir des CQI
Incertitude due la
justesse
Ecart-type des EEQ
Ecart moyen des EEQ

Application au dosage du cholestrol dans le plasma

Tableau des rsultats observs pour 10 EEQ diffrents pour
le dosage du cholestrol plasmatique

E (biais) cart entre le rsultat du laboratoire et la valeur de rfrence (Vrf)

La moyenne de lcart :

n
) x x (
E
i
i ref lab

=

Lcart-type de lcart :

1
) (
2
n
E E
i
E

Graphique des carts pour le cholesterol
-0.2
-0.1
0
0.1
0.2
0.3
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
E
c
a
r
t

e
n

m
m
o
l
/
L
Graphique des carts pour le cholestrol
LOT
Valeur
(mmol/L)
Vgnrale
(mmol/L)
ngnral Etgnral
Diffgnr
(mmol/L)
Abs(diff) Biais en %
10B04 3.4 3.22 714 0.097 0.18 0.18 5.6
10B09 5.15 5.12 723 0.14 0.03 0.03 0.6
10B13 6.91 6.76 724 0.195 0.15 0.15 2.2
10B14 6.81 6.74 733 0.17 0.07 0.07 1.0
10B18 3.21 2.95 709 0.116 0.26 0.26 8.8
10B19 8.78 8.56 708 0.257 0.22 0.22 2.6
10B22 5.06 5.08 692 0.146 -0.02 0.02 -0.4
10B24 3.29 3.2 719 0.087 0.09 0.09 2.8
10B33 6.64 6.74 702 0.169 -0.1 0.1 -1.5
10B38 8.78 8.58 690 0.23 0.2 0.2 2.3
10B40 5.17 5.09 689 0.149 0.08 0.08 1.6
10B80 3.15 3.04 714 0.114 0.11 0.11 3.6

Rsultats des valuations externes de la qualit pour le cholestrol

Soit 12 le nombre dEEQ tudies, le tableau ci-dessous rsume les paramtres estims des
carts des EEQ :

Stat descriptive (mmol/L) des carts des EEQ
Moyenne 0.106
Ecart-type 0.104
Minimum 0.020
Maximum 0.260
Etendue 0.240
Effectif 12

absolue de lcart moyen associ de la loi de distribution uniforme et de lcart-type des
carts. La formule de calcul est donc :

( )
2
2
3
E
E
EEQ u +
|
|
\
|
=

( ) ( )
2
2
104 , 0
3
106 , 0
+
|
|
\
|
= EEQ u

Exploitation des CIQ :

Rsultats du CIQ (mmol/L)
CV% 3
Ecart-type 0.076
Moyenne 2.52

Lvaluation de lincertitude se rsume dans le tableau suivant :

u : Incertitude -
Type (mol/L)
Incertitude-type
compose
U: incertitude
largie (k=2)
0.076 0.0756
0.106 0.0611
0.104 0.1041
Incertitude due la
justesse
0.142455684 0.28
Incertitude due la
dispersion intra
Dispersion calcule
partir des CQI
Composante de
l'incertitude
Source de l'information
Moyenne des carts des
EEQ
Ecart type des EEQ
Incertitude due la
justesse

10.2 Mthode CIQ + Etalon Fournisseur

Comparaison des mthodes CQI / EEQ et CIQ + talon fournisseur pour le
cholestrol :

Concentration en
cholestrol
(mmol/L)
U : incertitude
largie k=2 (mmol/l)
Incertitude largie
CIQ / EEQ 2.52 0.28 11.3%
CIQ + talon
fournisseur
2.52 0.16 6.3%

Niveau 1 Niveau 2 Niveau 1 Niveau 2 Niveau 1 Niveau 2

11 CONCLUSION
Ce guide a dfini les principales mthodes dvaluation de lincertitude de mesure qui
permettent de rpondre lexigence du paragraphe 5.6.2 de la norme NF EN ISO 15189.

Toutefois, il faut garder lesprit que :
cest laptitude du laboratoire valuer de faon raliste lincertitude de mesure des
rsultats qui sera apprcie. Le rsultat de lincertitude en lui-mme nest pas valu par
rapport un critre de conformit et ne peut donc pas tre compar aux indicateurs issus de
la littrature tels que Ricos, Valtec, ;
les composantes de lvaluation des incertitudes sont maitriser, le calcul nest quune
rsultante de ces composantes ;
le choix des diffrentes mthodes nest pas sans risque et dpend des donnes
disponibles. Lvaluation minimale de lincertitude nest pas un critre de slection de la
mthode.

Lincertitude est un outil daide linterprtation des rsultats pour une dcision
mdicale, minorer lincertitude revient sous valuer le risque et ventuellement
diffrer un diagnostic ou une modification thrapeutique (ajustement). De mme, une
surestimation de lincertitude revient remettre en cause la pertinence de cette
analyse.


12 BIBLIOGRAPHIE

Documentation Cofrac

Document Cofrac SH REF 02, "Recueil des exigences spcifiques pour l'accrditation des
Laboratoires de Biologie Mdicale".

Document Cofrac SH GTA 01, "Guide technique daccrditation en Biologie Mdicale".

Document Cofrac SH GTA 04, "Guide technique daccrditation de vrification (porte A) /
validation (porte B) des mthodes en Biologie Mdicale".

Document Cofrac SH GTA 06, "Les contrles de qualit en Biologie Mdicale" (dans lattente
de sa parution, se rfrer au document Cofrac LAB GTA 06).

Evaluation des incertitudes de mesure en Biologie Mdicale

Approaches to uncertainty evaluation based on proficiency testing schemes in chemical
measurements-Accreditation and Quality Assurance, (2008) 13, 361-366- P. Fisicaro, S
Amarouche, B. Lalere; G. Labarraque, M. Priel.

Exploiting proficiency testing results, a new alternative to the evaluation of uncertainties :
Application in medical biology : dosage of glucose in human plasma- S.Amarouche, M.Priel,
J.De Graeve - Workshop on the Impact of Information Technology in Metrology. BIPM-PTB
Berlin 2007.

Utiliser les rsultats des essais daptitude dernire mthode alternative pour lvaluation des
incertitudes M.Priel, S.Amarouche, J.De Graeve, M.Desenfant- Actes des confrences -
Congrs International de mtrologie Lille juin 2007 CD-ROM EDITION College Franais
de Mtrologie ; 2006.

Estimer l'incertitude, Mesures et Essai. C. Perruchet et M. Priel, 2000, (AFNOR).

Recommandations relatives l'expression de l'incertitude de mesure des rsultats
quantitatifs en biologie mdicale (Document F), Giroud C. et al., Ann. Biol. Clin. (2007), 65
(2): 185-200.

The guide to expression of uncertainty in measurement approach for estimating uncertainty :
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Uncertainty of measurement in quantitative medical testing. G.H. WHITE, I. FARRANCE.
AACB Clin Biochem Rev Vol 25, 2004.

Incertitude de mesure, C. Giroud, J. Arnaud, A. Vassault et les membres du sous-groupe 2
analytique du groupe de travail SFBC Accrditation des laboratoires de biologie mdicale
dans Recommandations pour laccrditation des laboratoires de biologie mdicale , Ann
Biol Cli 2010 ; 68 (Hors srie n1) : 237-246.

Les fournisseurs de DM DIV et la norme NF EN ISO 15189
Position Paper dition mai 2011 (SFRL)


Sites Internet

Cofrac, Comit Franais d'Accrditation, www.cofrac.fr

AFNOR, Association Franaise de Normalisation, www.afnor.fr

BIPM, Bureau International des Poids et Mesures, www.bipm.org

JCTLM, Joint Commitee for Traceability in Laboratory Medicine,
www.bipm.org/en/committees/jc/jctlm/

LNE, Laboratoire National de mtrologie et dessais, www.lne.fr

COMMAR, International database for certified reference, www.eptis.bam.de/en/index/htm

NIST, National Institute of Standards and Technology, www.nist.gov

IRMM, Institute for Reference Materials and Measurement, www.irmm.jrc.be

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