CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE

I - PRINCIPE
La chromatographie est une mthode physique de sparation de mlanges en leurs constituants; elle est base sur les diffrences daffinit des substances lgard de deux phases, lune stationnaire ou fixe, lautre mobile. La chromatographie sur couche mince, ou sur plaque (CCM), est effectue surtout en vue dune analyse dun mlange. La phase stationnaire solide est fixe sur une plaque, et la phase mobile liquide, nomme luant, est un solvant ou un mlange de solvants. On dpose sur la phase fixe une petite quantit du mlange sparer et on met cette phase au contact de la phase mobile. La phase mobile migre de bas en haut, par capillarit, le long de la phase fixe en entranant les constituants du mlange. Cest le phnomne dlution, qui permet la sparation des constituants du mlange analyser. Chaque constituant migre dune certaine hauteur, caractristique de la substance, que lon appelle rapport frontal ou rtention frontale (Rf) :

hauteur de la tache Rf = hauteur du front du solvant

Chaque tache correspond un constituant et on lidentifie par comparaison du Rf avec un tmoin (une mme substance migre la mme hauteur dans des conditions opratoires identiques; mme Rf).

II - ETUDE DE SUBSTANCES COLOREES

1 - But
Le but est de sparer trois colorants alimentaires : - Le jaune de tartrazine; E 102, - Le rouge dazorubine; E 122, - Le vert; E 102 (jaune de tartrazine) et E 131 (bleu patent).

2 - Mode opratoire
- Remplir la cuve chromatographique du mlange de solvants (hauteur 0,5 cm). (60 mL de butan-1-ol + 15 mL dacide thanoque + 15 mL deau) - La recouvrir, afin que latmosphre dans la cuve reste sature en vapeurs dluant. - Sur la plaque chromatographique, tracer au crayon de papier un trait horizontal 1 cm environ du bord infrieur. Ce trait ne doit pas tremper dans le solvant dlution contenu dans la cuve. - Dposer sur le trait, laide de cure-dents, 0,5 cm dintervalle, une microgoutte de : * jaune de tartrazine, * rouge dazorubine, * vert, * mlange des trois colorants. - Laisser scher les taches avant dluer (ou sche-cheveux). - Dposer la plaque verticalement dans la cuve et la couvrir. - Lorsque le solvant a atteint les environ de la hauteur de la plaque (1 cm du bord suprieur), sortir la plaque de la cuve et marquer immdiatement le front du solvant (car le solvant svapore trs vite). - Lorsque le solvant sest vapor, mesurer : * la hauteur du front, * les Rf des substances diffrentes (centre des taches).

III - ETUDE DUNE SUBSTANCE INCOLORE

1 - But
Le but est de raliser une analyse dun produit de synthse : le paractamol obtenu partir du para-aminophnol.

2 - Mode opratoire
- Saturer une cuve chromatographique avec lluant suivant : mlange tolune / thoxythane / acide thanoque / mthanol (60/30/9/1 mL).

- Raliser, dans des petits tubes hmolyse ou sur une plaque godets, les trois solutions dans lthanol : * du para-aminophnol de dpart, * du paractamol brut obtenu, * du paractamol pur obtenu. - Sur la mme plaque chromatographique, faire un dpt de chaque solution. - Dvelopper le chromatogramme. - Rvler en exposant la plaque sous une lampe UV.

IV - IMPORTANCE DE LA GROSSEUR DES TACHES

1 - But
Le but est de tirer des conclusions sur la grosseur des taches dposer sur les plaques CCM.

2 - Mode opratoire
Raliser des essais avec un des colorants alimentaires (jaune ou rouge).

V - INFLUENCE DE LA CONCENTRATION
1 - But
Le but est de tirer des conclusions sur la concentration du produit dposer sur les plaques CCM.

2 - Mode opratoire
Raliser des essais avec du paractamol pur.

Rq : la manipulation de solvants organiques volatils, inflammables et odeur piquante ncessite lutilisation de la ventilation.

CHROMATOGRAPHIE SUR COLONNE / CCM

I - GENERALITES

Les techniques chromatographiques sont utilises pour la sparation de mlanges en leurs constituants. Les deux techniques chromatographiques utilises au cours de cette manipulation sont : - la chromatographie sur colonne, qui permet de sparer un mlange en vue disoler de petites quantits de chacun des constituants spars de ce mlange. - la chromatographie sur couche mince (CCM), qui est destine surtout la sparation en vue danalyse dun mlange.

II - BUT

On veut sparer et rcuprer isolment les constituants dun mlange de deux colorants : la fuchsine et le rouge de mthyle, puis les analyser. Ces substances ont lavantage dtre colores, ce qui permet de suivre facilement la sparation. La sparation seffectue par chromatographie sur colonne et lanalyse par chromatographie sur couche mince.

III - CHROMATOGRAPHIE SUR COLONNE DALUMINE

1 - Principe
La chromatographie est une mthode physique de sparation dans laquelle les composs sparer sont rpartis en deux phases : - une phase fixe, de grande surface, appele phase stationnaire. - une phase mobile, constitue par un fluide, qui traverse la phase stationnaire. Dans notre cas, la phase mobile est liquide et la phase fixe est solide : cest une chromatographie dadsoption. La sparation est due la diffrence dadsorbabilit des divers composants du mlange : ceux-ci, tant plus ou moins fortement adsorbs par la phase stationnaire solide, migreront donc plus ou moins rapidement au travers de la colonne. La phase stationnaire est un solide adsorbant : lalumine. Un tube, contenant ladsorbant, est parcouru par un courant dluant liquide dans lequel on introduira, un instant donn, une certaine quantit du mlange sparer. Ce mlange est entran par lluant et est spar dans la colonne au contact avec ladsorbant. On favorise souvent le pouvoir de sparation en augmentant progressivement le pouvoir luant de la phase mobile; on est donc gnralement conduit modifier la nature de lluant en cours de sparation.

2 - Mode opratoire
a - Prparation de la colonne
Remplir le tube de la colonne (dune hauteur de 6 cm environ) dther de ptrole; puis, laide dun petit entonnoir sec plac en haut de la colonne, introduire lentement de lalumine (jusqu une hauteur de 4-5 cm environ) tout en restant recouvert dther de ptrole. Lalumine verse doit scouler lentement et sdimenter uniformment. La surface suprieure de lalumine sera ensuite nivele lhorizontale en tapotant lgrement le tube. Ouvrir le robinet pour laisser scouler lther de ptrole, jusqu ce que le niveau de ce dernier soit de 1 2 mm environ au-dessus de la couche dalumine; puis refermer le robinet. La colonne est ainsi prte lemploi. Attention : Il faut toujours du liquide au-dessus de la colonne, sinon celle-ci pourrait se fissurer en schant !

b - Utilisation de la colonne pour la sparation

Introduire dans la colonne environ 5-6 gouttes du mlange sparer (fuchsine-rouge de mthyle, 1/1) en dposant ce dernier (prlev laide dune pipette gradue) avec prcautions prs de la surface dalumine : il faut introduire la pipette lentement dans le tube de la colonne, en saidant des deux mains pour viter de toucher les parois internes du tube, jusqu ce que la pointe de la pipette soit quelques millimtres au-dessus de lalumine. Ouvrir le robinet et laisser scouler du liquide jusqu ce que le mlange soit adsorb la surface suprieure de la couche dalumine, puis refermer le robinet. Verser lentement, le long des parois internes du tube, un peu (1 2 mL) dther de ptrole de faon rincer ces parois, et laisser nouveau scouler du liquide jusqu la surface suprieure de lalumine. On fera scouler ensuite, successivement et dans lordre indiqu ci-dessous, les luants suivants, en veillant : - ne rajouter un nouvel luant que lorsque le prcdent ne sera plus qu 1 ou 2 mm au-dessus de la couche dalumine;

- verser les liquides lentement, le long des parois internes du tube, pour viter de perturber par turbulence la couche dalumine. - 5 mL dther de ptrole - 5 mL dun mlange 1/1 dther de ptrole - tolune - 5 mL dun mlange 1/1 de tolune - ther dithylique - 5 mL dther dithylique - 5 mL dun mlange 1/1 dther dithylique - propanone - 5 mL de propanone - 5 mL dthanol - 5 mL deau.

Les deux fractions colores seront recueillies sparment dans des tubes hmolyse. Les fractions non colores (luants) seront toutes collectes dans le mme erlenmeyer : rcupration des solvants uss. Ne pas les jeter lvier !

IV - ANALYSE PAR CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE

1 - Principe
La chromatographie sur plaque est galement une chromatographie dadsorption que lon effectue surtout en vue dune analyse dun mlange.

2 - Mode opratoire
Sur une plaque chromatographique, tracer, au crayon de papier, un trait 1 cm environ du bord infrieur et paralllement ce dernier. Dposer sur le trait, laide de tubes capillaires, 0,5 cm dintervalle, une microgoutte de : - solution de fuchsine tmoin - solution de rouge de mthyle tmoin - solution du mlange tmoin - solution de fuchsine obtenue - solution de rouge de mthyle obtenue - solution du mlange obtenue.

Laisser scher les taches avant dluer. On fait monter le long de la plaque, par capillarit, le solvant dlution choisi : mlange 30% dactate dthyle + 70% de cyclohexane. Couvrir le bac dlution par une plaque de verre, afin que latmosphre, dans le bac, reste sature en vapeurs dluant. Attention : Le trait, dessin sur la plaque, ne doit pas tremper dans le solvant dlution contenu dans le bac ! Lorsque le solvant qui monte a atteint les environ de la hauteur de la plaque (front du solvant), sortir la plaque et marquer immdiatement (car le solvant svapore trs vite) la hauteur du front laide dun crayon de papier, puis laisser vaporer le solvant. Mesurer ensuite, avec une rgle gradue : - la hauteur du front du solvant; - les Rf des substances diffrentes (centre des taches).

Rq : la manipulation de solvants organiques volatils et inflammables ncessite lutilisation de la ventilation.