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    TD Milieu de Culture

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    Le document décrit la composition des milieux de culture utilisés en biotechnologies végétales, notamment les éléments indispensables comme l'eau, le saccharose et les éléments minéraux, ainsi que des éléments facultatifs comme les hormones et vitamines. Il présente également le milieu de culture Murashige et Skoog fréquemment utilisé.

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    Biotechnologies animales et vgtales

    TD1 : Milieu de culture


    Composition du milieu de culture
    lments indispensables (milieu de base) ! ! Eau ! Source de carbone = saccharose

    - Rle pour contrer la dcience de la photosynthse (20 30g/l) - Rle osmotique, il est indispensable pour la culture d'embryon immature (100 120 g/l). Il permet de mettre en vidence la contamination par un pathogne ! lments minraux

    - Macrolments (besoin en grande quantit g/l) Azote : 1 3% de la matire sche. On le retrouve dans les protines, les acides nucliques, hormones... On le donne sous forme de sel KNO3, sous forme d'ammonium NH4+ . On peut mettre des acides amins aussi qui contiennent de l'azote Potassium : 2 4 % de la matire sche, il intervient dans les changes osmotiques. Ncessaire la synthse des hormones, de la chlorophylle, ncessaire la division cellulaire Phosphate (phosphore) : 0,1 0,5% de la matire sche, on en retrouve dans l'ATP et en grande quantit dans les cellules mristmatiques Souffre : 0,6 0,6% de la matire sche. Il est absorb sous forme de sulfate. On en retrouve beaucoup dans la cystine Calcium : 1 2% de la matire sche. Il augmente la rigidit des parois (lment de la pectine) et a un rle dans la permabilit cellulaire au niveau des membranes Magnsium : 0,1 0,7% de la matire sche. Cest un activateur enzymatique et un lment central dans la chlorophylle - Microlments (besoin en petite quantit mg/l) Cobalt : sous forme de CoCl2 (vitamine B12) Molybdne : cofacteur de la nitrate rductase Manganse : lment de la membrane des chloroplastes Zinc : interviens dans la fabrication de l'auxine Cuivre : rle de transporteur dans la photosynthse Borr : dans le mouvement des sucres Le fer est entre les 2 (micro et macrolment) : il n'est pas fourni sous forme de sel, car il prcipite. On le xe l'EDTA sous forme chlate, mais il est indispensable pour les milieux de culture ! Vitamines : gnralement du groupe B (mg/l) sauf pour l'inositol (B7 en 100mg/l)

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    lments facultatifs (que dans certains milieux) ! Hormones vgtales (rgulateurs de croissance) On utilise en milieu de culture l'auxine et la cytokinine Auxine de synthse (ANA) cytokinine de synthse (BAP) La gibbrelline (AG3) pour lallongement des tiges Acide jasmonique pour le mcanisme de dfense des plantes ! Agar LAgar permet la culture en milieu solide, mais il n'est pas trs puri donc si a ne marche pas, on utilise la gelrite qui est plus pure, mais beaucoup plus chre ! Acides amins : glutamine, glycocolle, cystine

    ! Mlanges complexes (utilis pour les cultures dlicates) Le lait de coco 2% riche en rgulateurs de croissance (division cellulaire) Lhydrolysat de casine (lait) Lextrait de levure (vitamines, mais en plus grande quantit) ! Charbon actif Le charbon la capacit d'absorber les molcules inactives. Il est utilis pour la phase d'enracinement en capturant les cytokinines qui empchent l'enracinement. Il permet de capturer la libration de composs toxiques lors dun stress (composs phnoliques qui s'oxydent la lumire et la plante devient marron)

    Composition des lments minraux


    6 macrolments principaux en quantit idale pour le dveloppement pour la plante. On part de milieu existant. Milieu trs utilis (Murashige et Skoog mis au point sur le tabac, car c'est une espce modle). On peut lutiliser soit en concentration x1 ou dans dautres concentrations selon l'espce vgtale considre. Il est riche en azote et lments minraux. Il est prconis dans la culture d'explants sans mristmes Culture de fragments nodaux Murashige et Skoog, mais une concentration 1/2 Les plantes carnivores Murashige et Skoog une concentration 1/4 On peut cultiver avec MS, mais en enlevant un lment toxique pour la plante considre (MS sans KNO3, mais il faut compens l'azote perdu) Parfois les milieux ne sont pas comparables, car la forme des lments qui sont fournis est diffrente parfois. Il faut alors comparer en quivalent-gramme d'ion Exercice : comparaison de 2 milieux de culture (Murashige et Skoog et Heller) en fonction de leur contenue en ion NO3-

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    Si dans le milieu Murashige et Skoog, on enlve NO3 parce quil est toxique pour une plante, on peut remplacer le K (KNO3) et le NH4 (NH4NO3) par du KCl et du NH4Cl par exemple, car le Cl est un ion daccompagnement et nest pas toxique Les milieux de culture ont un pH (5,5 - 5,6), mais d'autres plantes poussent sur d'autres pH comme les plantes carnivores (4,5) ou les fougres (5,2). Pour ajuster ce pH, on utilise des solutions acidiantes (HCl) ou alcalinisantes (KOH). Les solutions sont donnes en normalit

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    Exercice :

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