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    Exposicion-Caracteristicas Tintoriales de Los Hongos

    Cargado por

    Jonathan Urbina
    El documento describe diferentes técnicas de tinción para hongos, incluyendo colorantes como azul de metileno, safranina y eritrocina. Explica cómo realizar tinción de Gram, Ziehl-Neelsen, Schiff-PAS y Gomori-Grocott. También proporciona detalles sobre la composición y uso de varios colorantes y reactivos para tinción de hongos.

    Copyright:

    Attribution Non-Commercial (BY-NC)

    Exposicion-Caracteristicas Tintoriales de Los Hongos

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    Jonathan Urbina
    861 vistas45 páginas
    El documento describe diferentes técnicas de tinción para hongos, incluyendo colorantes como azul de metileno, safranina y eritrocina. Explica cómo realizar tinción de Gram, Ziehl-Neelsen, Schiff-PAS y Gomori-Grocott. También proporciona detalles sobre la composición y uso de varios colorantes y reactivos para tinción de hongos.

    Descripción original:

    LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA GENERAL II

    Título original

    Exposicion-caracteristicas Tintoriales de Los Hongos

    Derechos de autor

    © Attribution Non-Commercial (BY-NC)

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    El documento describe diferentes técnicas de tinción para hongos, incluyendo colorantes como azul de metileno, safranina y eritrocina. Explica cómo realizar tinción de Gram, Ziehl-Neelsen, Schiff-PAS y Gomori-Grocott. También proporciona detalles sobre la composición y uso de varios colorantes y reactivos para tinción de hongos.

    Copyright:

    Attribution Non-Commercial (BY-NC)
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    El documento describe diferentes técnicas de tinción para hongos, incluyendo colorantes como azul de metileno, safranina y eritrocina. Explica cómo realizar tinción de Gram, Ziehl-Neelsen, Schiff-PAS y Gomori-Grocott. También proporciona detalles sobre la composición y uso de varios colorantes y reactivos para tinción de hongos.

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    Attribution Non-Commercial (BY-NC)
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    Equipo 8: Acosta Basilio Jos Arturo Aguilar Lpez Aristteles De la Cruz Jimnez Pedro Urbina Soto Jonathan Uriel

    OBJETIVOS
    Observar y diferenciar hongos de diferentes fuentes, mediante diferentes tcnicas tintoriales. Conocer y aplicar las principales tcnicas de tincin de hongos. Identificar y clasificar los hongos aislados en la practica anterior

    Estructura de las clulas fngicas


    Las clulas fngicas son eucariotas, poseen ncleo, membrana nuclear perfectamente definida, as como mitocondrias y retculo endoplasmico.

    Estructura de la pared de los hongos


    Quitina Glucanos Protenas Polmeros de galactosamina Polmeros de manosas (mananos).

    Tipos de colorantes

    CATIONICOS ANIONICOS

    CATIONICOS
    Son molculas cargadas positivamente (cationes). Se combinan con los cidos nucleicos y los polisacridos cidos. Ejemplos de colorantes catinicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina.

    ANIONICOS

    Son molculas cargadas negativamente (aniones) Se combinan con muchas protenas. Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina cida y el rojo Congo. Otro grupo de colorantes son sustancias liposolubles; su uso es para revelar la localizacin de las gotculas o depsitos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro Sudn.

    Clasificacin de tcnicas de tincin


    Simples (un colorante)
    Azul de metileno. Safranina. Eritrocina. Anaranjado de acridina. Azul se algodn y de lactofenol

    Diferenciales (2 o mas colorantes) Especiales (estructuras especficas)

    Gram. Acido peryodico de Schiff Giemsa Wright

    Tinta china. Gomori-Grocott . Blanco de carcoflour

    Reactivos Reactivo Hidrxido de potasio al 10% Composicin KOH Agua destilada Uso 10g Solucin aclarante para 90mL exmenes en directos. Tambin se usa al 20% 10g 10mL 80mL Solucin aclarante para exmenes en directos. Tarda ms en evaporarse

    Hidrxido de potasio glicerinado

    KOH Glicerina Agua destilada

    Hidrxido de potasio azul Parker

    KOH Agua destilada Tinta azul Parker

    10g Aclarante para exmenes en 90mL directos de pitiriasis versicolor 10mL e infecciones por Pityrosporum sp 0.5mL Para tincin de cido alcohol resistencia en actinomicetos(Nocardia)

    Alcohol cido (modificado de Ziehl Neelsen)

    cido sulfrico Etanol (96) 99.5mL

    Lugol

    KI Agua destilada

    1g 100mL

    Solucin de contraste, para exmenes en fresco de exudados y secreciones.

    Colorantes Colorante Azul algodn actico Composicin Azul de algodn cido actico Agua destilada Azul de algodn(de anilina) Glicerol Fenol(cristales) cido lctico Agua destilada 0.5g 3mL 97mL 0.05g 40mL 20g 20mL 20mL Uso Como colorante de microcultivos

    Azul de lacto-fenol

    Exmenes directos de las cepas

    Azul de metileno

    Azul de metileno Alcohol etlico (95%) Agua destilada


    Azul de tripano Agua destilada

    0.3g 30mL 70mL


    1g 100mL 2g 20mL 0.9g 80mL

    Como colorante de contraste en tinciones de AAR, o para exmenes directos de las cepas
    Colorante de microcultivos Colorante de Gram

    Azul de tripano

    Solucin de cristal violeta Cristal violeta Etanol (95%) Oxalato de amonio Agua destilada

    Eritrocina

    Fucsina bsica o carbn fucsina

    Solucin de Giemsa

    Safranina

    Colorante de Wright

    Eritrocina Alcohol etlico Agua destilada Fucsina bsica Alcohol etlico Fenol (cristales) Agua destilada Giemsa Glicerol Metanol absoluto Safranina Etanol Agua destilada Colorante de Wright Glicerol Metanol absoluto

    2g 1mL 98mL 4g 20mL 8g 100mL 1g 66mL 66mL 0.25g 100mL 900mL 0.30g 3mL 97mL

    Colorante de microcultivos

    Tincin AAR de micobacterias y Nocardia

    Tinciones diversas

    Colorante de Gram Exmenes directos Tinciones diversas

    Etanol Formol

    cido perydico 1%

    Formaldehdo 40% 10mL Etanol absoluto 90mL cido perydico Agua destilada Agua destilada Fucsina bsica HCl 1N Bisulfito de Sodio Carbn activado

    Tincin de PAS

    1g 100mL 200mL 1g 20mL 1g 0.5g

    Tincin de PAS

    Reactivo de Schiff

    Tincin de PAS

    Solucin de metenamina-nitrato de plata

    Metrenamina3% Nitrato de plata al 5% Borato de sodio 5% Agua destilada

    40mL 2mL 3mL 35mL

    Tincin de Gromori-Grocott

    Azul de metileno
    UTILIDAD: Para exmenes en fresco o coloraciones compuestas.

    FUNDAMENTO: Los hongos adquieren un color azul semejante al azul de algodn, aunque el hongo se observa mas intenso que el fondo del campo.
    COMPONENTES

    Azul de metileno 0.3g. Colorante Agua destilada 100ml


    Mucor sp

    Safranina
    UTILIDAD: Para el estudio de cultivos y productos biolgicos lquidos.

    FUNDAMENTO: Los elementos fngicos se tien de color rojo intenso, y el resto del campo toma un tono incoloro o rosa plido.

    Rihizopus sp

    Penicillium sp.

    Aspergillus sp.

    Eritrocina
    til para la observacin de grnulos causados por: Nocardia Madurella grisea Madurella mycetomatis

    Granos de micetoma por Nocardia sp.

    Anaranjado de Acridina
    Colorante vital, que da una fluorescencia verde si el microorganismo est vivo y roja si est muerto.

    Tincin de ascosporas de Sowerbyella rhenana en naranja de acridina

    Composicin
    Etanol absoluto cido actico Anaranjado de acridina Buffer de fosfatos Cloruro de calcio
    Candida albicans

    Azul de algodn
    COMPONEN TES Fenol FUNCIN Destruye la flora acompaante.

    cido lctico Conserva las estructuras fngicas al provocar un cambio de gradiente osmtico con relacin al interior del fngico generando una pelcula por as llamarlo protectora. Azul de lactofenol El colorante es fuertemente cido y se usa para la tincin directa de micelio miclico, el cual toma un delicado color azul claro. Agente humectante.

    Glicerol

    Microsporium canis

    Rihizopus sp.

    Absidia corymbifera

    Aspergillus sp.

    Tincin de Gram
    UTILIDAD: Se emplea para teir: - Productos biolgicos lquidos - Exudados de lesiones - Macerados de biopsias - Todos los hongos son positivos a la coloracin de Gram, excepto Cryptococcus neoformans.

    Candida albicans

    Tincin Ziehl-Neelsen (acido-Alcohol-Resistentes)


    UTILIDAD til en algunos microorganismos cido resistentes como N. asteroides, N. brasiliensis y otros actinomicetes.
    FUNDAMENTO El contenido lipdico de estos organismos esta compuesto principalmente por ceras y fosfolpidos que alcanzan hasta un 40 % de su peso seco total .

    Grano de Nocardia sp.

    Grano de Actinomadura madurae .

    Actinomyces Israelii

    Tcnica de Schiff PAS


    FUNDAMENTO - En la tincin PAS se trata el material con cido perydico, que oxida los 1,2-glicoles formndose grupos aldehdo en los glucanos y mananos de las paredes celulares de los hongos
    Coccidioides immitis

    - Con el reactivo de Schiff, los aldehdos reaccionan dando un color rojo luminoso.

    Reactivo de schiff
    Composicin Reactivos Agua destilada Fucsina bsica HCl 1N Bisulfito de sodio Carbn activado Proporcin 200mL 1g 20mL 1g 0.5g

    Hystoplasma Capsulatum

    Tincin de Giemsa y Wright


    - Utilizada para levaduras intracelulares, que generalmente se encuentran dentro de los macrfagos o monocitos - Forma un halo alrededor de la pared celular - Citoplasma se tie de azul celeste - Un polo se tie de azul oscuro (media luna)

    Blastomyces dermatitidis. Aspirado de tejido de perro, tincin Wrigth

    Hystoplasma capsulatum

    Tincin negativa con tinta china


    Fundamento Es ideal para observar inclusiones refrctiles que no se tien fcilmente, tales como grnulos de azufre, cido poli-B-hidroxibutirico, esporas o capsulas. Componentes: Tinta china de buena calidad (nigrosina, tinta Pelikan India Ink o Parker Black Ink, entre otras).

    Utilidad - Esta tincin especial para visualizar a Cryptococcus neoformans. - La tinta china se emplea en una dilucin de 1:2 con agua destilada (suspensin de coloidal de carbn o nigrosina)

    Tincin de Gomori-Grocott (Metenamina de plata)


    Fundamento Esta basada en que presencia de acido crmico, los grupos hidroxilo de lo polisacridos de la pared celular de los hongos son oxidados a aldehdos; estos a su vez, reducen el complejo nitrato- plata metenamina produciendo la coloracin caf a negra, debido de la plata reducida en los lugares de localizacin de los aldehdos

    Tincin DE GROCOTT-GOMORI
    Con esta tcnica los hongos se tien de color negro al igual que unas bacterias (Nocardia y Actinomices) la mucosa adquiere un color gris oscuro; las partes internas del micelio rosa oro; el fondo aparece de color verde claro.

    C. neoformans

    Blanco de carcoflour
    Fundamento El calcoflor es un flourocromo que se une a polisacridos con los enlaces beta 1-3 y beta 1-4 presentes en polmeros tales como celulosa y la quitina. El colorante fluorece cuando se expone a una fuente de luz ultravioleta de onda corta o capaz de producir la luz azul (longitud de onda 410-450 nm). Es un mtodo de alta sensibilidad para definir claramente los elementos micoticos con microscopio de fluorescencia

    Reactivos - Calcoflour blanco M2R (polysciences) - Azul de Evans

    TINCIN CON SAFRANINA


    Cubrir el portaobjetos con safranina por 30 segundos.

    Lavar con agua y dejar secar.

    Observar al microscopio a 10, 40 y 100x.

    TINCIN AZUL DE METILENO


    Cubrir el portaobjetos con solucin saturada de azul de metileno por 30 segundos. Lavar con agua y dejar secar.

    Observar al microscopio a 10, 40 y 100x.

    TINCIN CON AZUL DE ALGODN-LACTOFENOL


    Colocar una gota de azul de algodn en el portaobjetos

    Con el asa micolgica fragmento de la colonia

    colocar un

    Montar la preparacin colocando un cubreobjetos

    Sellar con esmalte para uas incoloro

    Observar al microscopio a 10 y 40x.

    TINCIN CON ERITROCINA


    Fijar la muestra con alcohol metlico por 10 min.

    Cubrir la muestra eritrocina por 15 min. R

    con

    Pasar por alcohol al 70% y dejar secar

    Lavar con agua de la llave

    Colocar en xilol 15 min. y dejar secar Pasar por alcohol absoluto 5 min. y dejar secar Montar en blsamo de Canad Observar al microscopio a 10 y 40 x.

    TINCIN DE GRAM
    Cubrir el frotis con cristal violeta por 1 minuto

    Aplicar lugol por 1 min.

    Lavar con agua y secar

    Lavar con agua y secar

    Decolorar por 15 seg. Con mezcla alcohol-acetona

    Contrastar con safranina durante 30 segundos

    Lavar con agua y secar

    Lavar con agua y secar

    Observar al microscopio a 10, 40 y 100x.

    TINCIN DE GIEMSA
    Cubrir el frotis con metanol durante 3 min. Dejar secar

    Colocar la preparacin en colorante de Giemsa durante 30 min.

    Secar, y lavar la preparacin con solucin buffer por 3 minutos. Dejar secar.

    Observar al microscopio a 10, 40 y 100x.

    TINCIN CON TINTA CHINA


    Fijar el frotis directo a la flama

    Teir con fucsina bsica durante 1 min.

    Lavar con agua

    Colocar tinta china en un extremo y extenderla. Dejar secar.

    Observar al microscopio a 10 y 40x.

    Referencias
    Lur de Calafell MC, et al, Introduccin al estudio de la micologa. Argentina: Universidad Nacional del Litoral; 1997 Bonifaz A, Micologa mdica bsica. 2ed. Mxico: Mndez Editores; 2000 Arenas R. Micologa mdica ilustrada. 2ed. Mxico: McGraw Hill; 2003 LopezMartinez,MicologaMdicaProcedimientoparaeldiagnosticodel aboratorio,Ed.Trillas,Mxico2006Capitulo10Pag.149-158 F.J.Baker,ManualdeTcnicasdeMicologaMdicaEditorialAcribia,S. AZaragozaEspaa1998pag.18-20;40-41-Dr. Norman F. Connan; Micologa; Editorial Interamericana S.A de C.V 3ra Edicin Mxico 1972 pag. 557-569 Lynch, M; Raphael, S. Mtodos de Laboratorio. Editorial Interamericana. 2edicin. Mxico. 1987. Tomo II pag. 523-530 MURRAY, G. Microbiologa Mdica. Edit. El Manual Moderno. 3edicin Mxico D.F. 1997 pag175-182

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