CULTIVO DE

SECRECIONE
S
DRA. KATIA VERONICVA HUANCA
LUNASCO

MICROBIOLOGIA CLINICA
SEXTO SEMESTRE
Secrecion
 Secreción es un término que tiene su origen en el
vocablo latino secretĭo. El concepto hace referencia al
acto y la consecuencia de secretar.
 El verbo secretar, por su parte, se emplea en el
ámbito de la biología para nombrar a la acción que
desarrollan las glándulas cuando expulsan ciertas
sustancias que han elaborado.
 Una secreción, por lo tanto, puede ser el proceso que
desarrolla un ser vivo para despedir de su organismo
una sustancia. La noción también se emplea para
nombrar a aquello que expulsa.
 El dx etiologico de una enfermedad infecciosa –es
decir, la identificacion objetiva del microorganismo
que la esta causando- puede realizarse mediante
metodos directos que permiten la deteccion del
agente causal en el lugar donde se esta produciendo
la infeccion:
 Por observacion microscopica
 Por cultivo –en el que se constatara el crecimiento el
patogeno-
 Mediante la deteccion de antigenos especificos
 Mediante la deteccion de fragmentos del genoma
propios el microorganismo
 Las caracteristicas biologicas de los diversos
miroorganismos –la morfologia, tama;o,
estructura antigena, metabolismo y los
procesos de reproduccion- son muy variadas,
por lo que las tecnicas de laboratorio
utilizadas para la deteccion y el estudio de
cada grupo microbiano, aunque se ajustan al
patron general que se acaba de se;alar, son
muy heterogeneas.
Medio de cultivo
 Un medio de cultivo consta de un gel o una solución que cuenta
con los nutrientes necesarios para permitir, en condiciones
favorables de pH y temperatura, el crecimiento de virus,
microorganismos, células, tejidos vegetales o incluso pequeñas
plantas. Según lo que se quiera hacer crecer, el medio requerirá
unas u otras condiciones.
 Uno de los sistemas más importantes para la identificación de
microorganismos es observar su crecimiento en sustancias
alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material
alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de
Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se
han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes.
 Para efectuar los estudios en el laboratorio
que permiten la deteccion de un
microorganismo, debe tomarse del foco de
infeccion una muestra clinica. Por ejemplo,
en las infecciones urinarias se toma orina,
en las enteritis, heces, en las meningitis,
liquido cefalorraquideo, y en la septicemia,
sangre.
 En ocasiones, del foco infeccioso se toma un
producto patologico que se ha formado
durante la infeccion, como el pus, un esfacelo
necrotico u otros. Es el material que se toma
del paciente y se traslada al laboratorio. Para
los estudios serologicos, la muestra clinica
siempre es la sangre del paciente que se deja
coagular y de la que se obtiene el suero.
 Historia clinica y Estudio
exploracion hematologico +
Px
(Sospecha de Tecnicas de dx por
infeccion) imagen

Localizacion de la
infeccion (Pulmon, Obtencion de las
Laboratorio
ri;on, cerebro, sist. muestras clinicas
Urinario)

Dx etiologico
 Siempre que sea posible, ha de evitarse el
contagio con la fuente de infeccion, lo que
es de gran importancia para evitar la
difusion de las enfermedades de
transmision sexual y las infecciones
intrahospitalarias. Para evitar las
toxiinfecciones alimentarias, debe
asegurarse de que el agua y los alimentos
no vehiculan microorganismos patogenos.
 Para el diagnostico de las
infecciones en las vias
respiratorias cualquier muestra
que contenga secrecion
respiratoria como el esputo, es
util.
 El esputo debe ser de buena
calidad, ya que si no contiene
secreciones de la via baja y
unicamente esta formado por
saliva no podra obtenerse un
resultado fiable.
 Por ello las muestras de esputo
deben examinarse
atentamente antes de
aceptarlas, rechazando las
formadas principalmente por
saliva.
I. INFECCIONES DE
HERIDAS
Las bacterias infecciosas se reproducen
rápidamente en el organismo y muchas excretan
sustancias químicas llamadas toxinas las cuales
pueden dañar los tejidos.
Las infecciones de piel y
tejidos blandos son, junto
con las infecciones de las
vías respiratorias, las
infecciones más frecuentes
en clínica humana
Tipos:
 Agudas
 Crónicas
Microbiología de las
heridas
El tejido subcutáneo expuesto es un
excelente medio de cultivo para la
colonización y proliferación de los
microorganismos, que dependen de las
características de la lesión.
Los microorganismos
provienen del entorno
ambiental, de la
propia microbiotaflora
de la piel y de la flora
bacteriana comensal
de mucosas.
 Potencialmente patógenos:
Estreptococos beta-hemolíticos,
Staphylococcus. aureus, Enterococcus spp.,
Bacillus anthracis, Pseudomonas aeruginosa
y otros bacilos gramnegativos como las
Enterobacteriaceae, tanto en las heridas
agudas como en las crónicas.

Son factores predisponentes de la

infección la edad, la diabetes, la
inmunosupresión, la obesidad, la
malnutrición y las alteraciones
circulatorias.
INFECCIÓN DE LA HERIDA
QUIRÚRGICA
Infección que se produce en la herida de una incisión
quirúrgica
La infección posoperatoria de la herida
quirúrgica es la mayor causa de morbilidad
infecciosa en el paciente quirúrgico.
Epidemiología

Constituye la segunda causa de

infección nosocomial y la desarrollan
entre el 2-20% de los enfermos
operados, según el tipo de cirugía.

Se ha demostrado que cuando el sitio operatorio

se encuentra contaminado con más de 105
microorganismos por gramo de tejido, el riesgo de
infección de la herida quirúrgica se incrementa
significativamente y la cantidad de gérmenes
requeridos para producir infección es mucho
menor cuando se encuentran materiales extraños
presentes en el sitio operatorio.
 En las heridas sucias
infectadas es frecuente
encontrar como
colonizadores,
microorganismos como la
E. coli, Klebsiella, B.
fragilis, Clostridium
species y estreptococo
anaerobio
En los abscesos e
infecciones
intrahospitalarias la
microflora del sitio
operatorio es diferente; son
gérmenes multirresistentes,
como la Pseudomona sp,
Microorganismo Número de Cirugía limpia Cirugía limpia- Cirugía sucia
aislados (%) contaminada

Enterobacterias 470 (32,5) 110 187 173

Staphylococcus aureus 240 (16,5) 140 51 49

Enterococcus spp. 212 (14,6) 63 70 79

BGNa no fermentadores 197 (9,1) 44 54 99

Staphylococcus epidermidis 118 (8,1) 59 26 33

Anaerobios 69 (4,8) 9 39 21

Otros 59 (4,0) 12 36 11

Levaduras 49 (3,4) 13 16 20

Otros CGPbCGP 42 (3,0) 17 22 3

Total 1456 467 501 488

Infecciones post-parto
Las infecciones que ocurren durante el puerperio
son una causa relativamente frecuente de
morbilidad, y raramente incluso de mortalidad.
Técnica
 Factores que predisponen a
infecciones post parto

 Obesidad.

 Nivel económico bajo.

 Anemia.

 Inmunosupresión.

 Enfermedad crónica ( ejm diabetes mellitus).

 Infección vaginal, especialmente vaginosis bacteriana.

 Complicaciones
ENDOMETRITIS
 Infeccion al utero
 Causa mas frecuente de infeccion despues de una cesarea.
 Estas infecciones usualmente se extienden bastante más
allá de la delgada capa endometrial limitando con el
miometrio adyacente, los tejidos blandos fibroareolares que
se ubican dentro del parametrio, e incluso algunas veces
más allá, con formación de absceso pélvico.
 Pacientes con mayor riesgo de infección: aquellas que
sufren de desnutricion, obesas, trabajo de parto
prolongado, fiebre intraparto, cirugía laboriosa.
 INFECCION DE
HERIDA
 Es poco frecuente
 Fiebre acompañada de dolor, sensibilidad, y eritema alrededor
de la incisión se observa más frecuentemente al tercer o
cuarto días después del parto.
 Se debe obtener el cultivo del sitio de incision, luego del cual
se inicia con frecuencia el tratamiento antibiótico de amplio
espectro.
 Absceso de la herida operatoria el drenaje del
material purulento y el aseo con antisépticos.
 Fasctores que aumentan el riesgo: DM, malnutricion, duracion
de cirugia, material de cirugia, obesidad, uso de corticoides,
anemia
INCIDENCIA
13,823 cesáreas
Organismos comúnmente asociados con infecciones pélvicas

 Staphylococcus  Clostridium
 Escherichiacoli  Proteus
 Streptococcus

 Klebsiella
MATERIALES
Materiales:
 Hisopo de algodón o sintético estéril

 Lámina porta objetos

Materiales:
 Tubocon tapa de rosca estéril
conteniendo medio de transporte

 Medios de cultivo: Caldo Thioglicolato

(CTh)
caldo de
enriquecimiento más
utilizado en
Microbiología
(Caseina, extractos de
Levadura y Carne,
Vitaminas, etc)
Materiales
 AgarSangre (AS), Agar Mac Conkey
(MC), Medio Hipertónico (MH) y Agar
Sabouraud (SAB)
Agar Sangre

Agar base (agar

nutritivo) con el
agregado de 5 %
de sangre ovina,
también puede
usarse sangre
humana, para
cultivos en
una placa de Agar.
usada para ver la
capacidad
hemolítica de los
microorganismos
patógenos
 Agar Mac Conkey
Este medio se utiliza para
el aislamiento de bacilos
Gram negativos de fácil
desarrollo, aerobios y
anaerobios facultativos.
Permite diferenciar
bacterias que utilizan o no,
lactosa en muestras
clínicas, de agua y
alimentos.
Los organismos no
fermentadores de lactosa
producen colonias
Microorganismos Colonias
incoloras
Escherichia coli Rojas con halo turbio
Klebsiella pneumoniae Rosadas mucosas

Salmonella typhimurium Incoloras, transparentes

Shigella flexneri Incoloras, transparentes
Proteus mirabilis Incoloras, transparentes
Enterococcus faecalis Diminutas, incoloras, opacas
Medio Hipertónico

Es un medio de
cultivo conteniendo
6,5% de cloruro de
sodio. Se usa para
identificar la
tolerancia salina de
las bacterias
 Agar Sabouraud

Medio utilizado
para el
aislamiento,
identificación y
conservación de
hongos
patógenos y
saprófitos.
También es útil
Microorganismos Crecimiento
para el cultivo Saccharomyces
Bueno
de levaduras. cerevisiae
Aspergillus niger Bueno
Candida albicans
Bueno
ATCC 10231
PROCEDIMIENTO
 Obtención de la muestra
 Lamuestra fue tomada de
una paciente mujer de 37
años de edad la cual fue
sometida a un parto por
cesárea el 25 de octubre
del presente año, estuvo
hospitalizada durante 5
días debido a la cesárea y
por propias
complicaciones
producidas en el parto.
Obtención de la muestra
 La muestra de la herida que fue obtenida
dos días después de su último día de
hospitalización, todavía presentaba los
puntos realizados tras la operación.
 Se tuvo en cuenta además, que la
paciente no se encontraba en tratamiento
con antibiótico y que la única
recomendación dada por su doctor para el
tratamiento de la herida fue el de higiene
diaria con agua y jabón.
  Para poder obtener una
Obtención de la muestra
muestra de buena calidad se le
pidió a la paciente que no
realizara la limpieza de la
herida 24 horas previas al
examen realizado, para el cual
se empleó un hisopo de
algodón esterilizado, el cual se
humedeció con la secreción y
teniendo el cuidado necesario
para no tocar superficie de piel
evitando así la contaminación
con la microbiotaflora normal.
 El hisopo con la muestra se
colocó dentro del tubo con
medio de transporte y se
conservó a 5°C durante 1 día.
Coloración Gram
 Con el hisopo se hizo un pequeño frotis
en el portaobjetos, al cual luego se le
aplicó la técnica de coloración Gram
Siembra
 Con el hisopo se hizo un pequeño frotis
en un ángulo de cada medio de cultivo,
y luego con el asa de siembra se
distribuyó la muestra por agotamiento.
Luego se incubaron las placas a 37°C
por 48 horas.
  Altubo con el
Siembra
medio de
transporte se le
añadió +/- 3 ml de
caldo thioglicolato y
también se incubó a
37°C.
RESULTADOS

Marycarmen Hidalgo C.
 MUESTRA

Agar Mac Agar Sangre

Conkey

Agar
Agar Sabouraud
Hipertónico
 Agar Mc Conkey
oEn el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para
el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la
mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que
inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.

o Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia.

Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la
absorción en las colonias, y la precipitación de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias
incoloras.
 INTERPRETACION

 Indica:
Fermenta Lactosa o no

Resultado:
Positivo

Posibles bacterias:
Escherichia coli
Klebsiella
 Agar Hipertónico con Manitol

oSe trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentración salina.

oLos estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las

colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa
negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o púrpura. Las colonias
sospechosas, se repicarán en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles,
posteriormente, la prueba de la coagulasa.
oEn el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen
la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales, el manitol es el
hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en
alta concentración) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la
flora acompañante, y el rojo fenol es el indicador de pH.

oLas bacterias que crecen en un medio con alta concentración de sal y

fermentan el manitol, producen ácidos, con lo que se modifica el pH del
medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo.

oLos estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no

fermentar el manitol.
 INTERPRETACION

 Indica:
Metaboliza manitol o no
Desarrolla en medio
salado o no

Resultado:
Positivo

Posible bacteria:
Staphylococcus aureus
 Agar Sangre
oEs una combinación de un Agar base (Agar nutritivo) con el agregado de 5 %
de sangre ovina, también puede usarse sangre humana, para cultivos en una
placa de Agar.

o El Agar sangre aporta muchos factores de enriquecimiento.

oSe usa también para ver la capacidad hemolítica de los microorganismos

patógenos (que es un factor de virulencia).

o Observando los halos hemolíticos alrededor de las colonias se determina el

tipo de hemólisis que posee:
 alfa: halos verdosos
 beta: halos incoloros
 gamma: inexistencia de halos
 INTERPRETACION

 Indica:
Capacidad hemolítica de
microorganismos patógenos

Resultado:
Gamma hemolíticos
( no hemolíticos)

Posibles bacterias:
Streptococcus fecales
 Agar Sabouraud

oMedio selectivo para el cultivo de hongos patógenos y no

patógenos, en particular de levaduras y dermatofitos.

oEl pH acido (5.6) del medio inhibe muchas especies de bacterias.

oLa adición de cloranfenicol hace el medio más selectivo.

o Diagnóstico características tales como estructuras de esporas y la

pigmentación están bien desarrollados en este medio.
 Composición:
40 g / L de dextrosa
10 g / L de peptona
20 g/L agar
pH 5.6 pH 5,6
 INTERPRETACION

 Indica:
Presencia de hongos o no

Resultado:
Positivo

Posibles bacterias:
Candida albicans