EXAMEN DE IDENTIFICACION

DE HONGOS OPORTUNISTAS
Criptococos neoformas
PRÁCTICA 12
 HONGOS OPORTUNISTAS
Muchas levaduras y mohos pueden causar
infecciones oportunistas, que incluso ponen en
peligro la vida de los pacientes
inmunodeficientes.
Estas infecciones rara vez afectan a individuos
inmunocompetentes.

• Las levaduras tienden a provocar fungemia y

compromiso localizado de la piel y otros sitios.
Las micosis oportunistas sistémicas típicas son:
• Candidiasis
• Aspergilosis
• Mucormicosis (cigomicosis)
• Fusariosis
 CANDIDIASIS
• Micosis primaria o secundaria
ocasionada por levaduras endógenas
y oportunistas del género Candida,
albicans.
• Se han descrito más de 190 especies
• Manifestaciones clínicas son
localizadas, diseminadas o
sistémicas; puede afectar piel,
mucosas, estructuras profundas y
órganos internos.
• Las histopatológicas varían desde
inflamación mínima hasta
supuración o granuloma.
• La evolución es aguda, subaguda o
crónica.
 DIAGNOSTICO DE LABORATORIO
El examen directo se practica a partir de:
• Exudado Examen microscópico: se encuentran
• Esputo microorganismos unicelulares esféricos u ovoides,
• Escamas de paredes delgadas, de 4 a 10 micras de
• Raspado de uñas diámetro, gemantes, con seudomicelio o micelio
• Centrifugado de orina. escaso o ausente
Se efectúa con hidróxido de potasio
También se puede realizar frotis y colorearse con
tinción de Gram, de Giemsa o de Wright, y azul de
metileno, o PAS.
• Lo más característico es la presencia de hifas y
grupos de blastosporas en diferentes trayectos
de las mismas.
CULTIVOS:
 Los hongos crecen rápidamente a 37°C y en 24
a 48 horas
 Se obtienen colonias lisas, blandas, brillantes,
de color blanco o ligeramente beige; con el
tiempo se hacen plegadas, rugosas o
membranosas y a simple vista se observa el
micelio sumergido
 DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
Filamentación en suero
• Se toma un inóculo de la colonia y se coloca en 0.5 ml de suero, se
incuba a 37°C; en 2 a 4 horas, se generan tubos germinativos en C.
albicans o C. stellatoidea. Otras especies lo hacen, pero en etapas
tardías.
Sensibilidad a la cicloheximida
• Se practica en medio de Sabouraud adicionado cicloheximida.
• Los resultados se observan en 24 horas.
• Son sensibles: C. tropicalis, C. krusei, C. zeylanoides y C.
parapsilosis.
Agar Crom Candida
• Es un medio de cultivo selectivo y diferencial para el
aislamiento de levaduras patógenas oportunistas del género
Cándida en muestras de origen clínico
 INFECCIONES POR Rhodotorula

• Se origina por el género Rhodotorula, que agrupa ocho

especies, en particular R. rubra, hongo que se aísla de
alimentos, soluciones en hospitales, esputo e incluso piel
y anexos; puede causar enfermedad de pulmones,
riñones, endocardio, sistema nervioso central, o
fungemia.
• En el medio hospitalario, se han aislado de hemocultivos
en leucemia e infección por VIH. Se observa mejor con
blanco de calcolfúor bajo fluorescencia.
• El hongo es una levadura mucoide con pigmento
carotenoide que le confiere color rojo anaranjado.
• Al microscopio se observan levaduras ovoides o
esféricas.
• Utilizan diferentes azúcares, pero no los fermentan.
 CRIPTOCOCOSIS
Enfermedad de Busse-Buschke, blastomicosis Se han informado cinco serotipos y tres variedades biológicamente
europea, torulopsis. distintas:
C. neoformans variedades neoformans (serotipos D y AD)
Micosis oportunista causada por una levadura C. gattii (serotipos B y C)
capsulada: Cryptococcus neoformans, de origen C. grubi (A).
exógeno; se adquiere por vía respiratoria y es
pulmonar en 90% Clasificación
Puede afectar cualquier víscera, músculo, hueso, Pulmonar, meningocerebral, cutánea y mucocutánea,
piel y mucosas, pero tiene afinidad particular por ósea y visceral.
sistema nervioso central (SNC).
La evolución es aguda, subaguda o crónica.
La diseminación ocurre en pacientes debilitados o
con inmunodeficiencia.
• El agente causal es una levadura capsulada, no
micelial, de 20 a 30 micras de diámetro, C.
neoformans,
• Cuyo estado perfecto o teleomorfo es el
Basidiomycete, Filobasidiella neoformans, que
tiene dos variedades: neoformans y
bacillispora
 METODOS DE DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO

Para el examen directo se obtiene:

• Exudado
• Esputo
• Tejido cerebral
• Líquido cefalorraquídeo (LCR) u orina, deben centrifugarse.
• Se realiza con tinta china sola o diluida en agua (1:5) y el
criptococo se demuestra fácilmente como levaduras de 4 a 8
micras de diâmetro, rodeadas por una cápsula mucoide de 1 a
10 micras de espesor, y que no se colorea con la tinta y semeja
un espacio claro; ocasionalmente hay seudofilamentos.
• El examen directo con hidróxido de potasio ayuda a destruir
otros microorganismos, células y artefactos que pueden
confundirse con la levadura.
• Los cultivos deben llevarse a cabo en Sabouraud u otros Cryptococcus no fermenta los azúcares
medios de cultivo sin cicloheximida que inhibe su crecimiento; Es positivo para ureasa,
tienen desarrollo óptimo entre 32 a 37°C y se inhiben a 40°C.
• En hemocultivos crecen en 48 horas, las cuales son blancas o
amarillentas, lisas y brillantes; en 5 a 8 días toman apariencia
mucosa.
 DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
Datos histopatológicos
• Hay reacción celular leve o granulomatosa; se encuentran
linfocitos, eosinófilos, histiocitos y células gigantes.
• Cuando la reacción es granulomatosa, hay pocas levaduras
y, si es poco inflamatoria, son más abundantes.
• En cerebro, predominan las lesiones líticas con cavidades
y, en pulmones, la fibrosis. Con hematoxilina y eosina, las
levaduras se observan rodeadas de un espacio claro que
corresponde a la cápsula, se visualizan más fácilmente con
PAS (ácido peryódico de Schiff), y tinciones de Giemsa,
hierro coloidal, Gomori- Grocott y fundamentalmente con
mucicarmín
• Aquéllas se pueden confundir con los cuerpos amiloides de
la médula espinal
 Zigomicosis
Enfermedades de seres humanos y animales ocasionadas
por hongos oportunistas,, que comprenden dos grupos
• Mucorales =mucormicosis
• Entomophthorales = entomoftoromicosis
• Se han descrito 867 especies de Zygomycetes;
• Mucorales existen 14 familias.
Mucormicosis
• Causada por Rhizopus, Absidia y Mucor.
• Es cosmopolita e infrecuente.
• Puede tener presentaciones rinocerebral, pulmonar,
gastrointestinal, cutánea o diseminada.
• Causa trombosis vascular y es de evolución aguda,
generalmente letal.
 DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
• El examen directo se efectúa en esputo, mucosa
nasal, tejido necrótico o fragmentos de piezas
operatorias y en el aspirado de senos paranasales;
los especímenes deben conservarse húmedos en
solución salina o infusión cerebro.

CULTIVO
• Son colonias de crecimiento rápido que cubren la
superficie del agar con una colonia algodonosa, al
principio blanca y luego grisácea o amarillenta.
• Se caracteriza por la presencia de estolones y
rizoides muy pigmentados, esporangióforos aislados
o en grupos que nacen directamente de los nudos y
están en la parte opuesta a los rizoides
• El esporangio generalmente es globoso con apófisis
y columela muy marcados, después de la rotura, la
apófisis y la columela se colapsan en forma de
sombrilla o sombrero chino.
 DIAGNÓSTICO MICOLÓGICO
Datos histopatológicos
• La imagen determinante es la presencia de
trombosis capilar e hifas fúngicas en la luz de los
vasos o en las lesiones
• La necrosis es supurativa con infiltrados
inflamatorios de neutrófilos y eosinófilos; en
ocasiones, hay células epitelioides y gigantes.
• Los filamentos son largos y gruesos, miden 10 a
25 micras de diámetro, hay pocos tabiques y
adoptan forma de listón
• Se pueden observar clamidoconidios de 15 a 30
micras de diámetro y, en ocasiones, material
eosinófilo rodeando las hifas.
• Es mejor la observación con PAS (ácido peryódico
de Schiff) y tinción de Gomori-Grocott
 ENTOMOFTOROMICOSIS

• Enfermedad de seres humanos y animales ocasionada por

Zygomycetes del orden Entomophthorales, en particular
Conidiobolus coronatus y Basidiobolus haptosporus.
• Es tropical o subtropical e infrecuente. Se manifiesta por
una presentación rinofacial o una subcutánea, con edema e
inifltración.
• En el estudio histopatológico, el hongo presenta un halo
eosinófilo característico.
• viven normalmente como saprobios de plantas o sus restos,
así como en el intestino y las heces de anfibios y reptiles
que se alimentan de insectos infectados; las esporas se
adhieren a las patas de los insectos y éstos actúan como
vectores.
• Los hongos que actúan como patógenos son termotolerantes
a 37°C.
• Se cree que la vía de entrada es un pequeño traumatismo
originado por una espina o por picadura de insecto o
artrópodo,
 MÉTODO DE DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO

• El examen directo se realiza con hidróxido de potasio.

Dado que no hay exudado, es necesario utilizar un
fragmento de tejido; se observan hifas cortas y
gruesas, con pocos tabiques o sin ellos.
• Los cultivos se realizan en los medios habituales, sin
cicloheximida, dado que ésta los inhibe; todos los que
actúan como patógenos crecen a 37°C.
• Las especies de Basidiobolus se caracterizan por
esporoforas con vesícula subesporangial, todas las
células son mononucleadas, hay conidios y
cigosporas, las colonias son planas, glabras, de color
gris a beige, plegadas en el centro, tienen olor
característico a humedad y habilidad para esporular en
un tiempo muy corto.
• Examen microscópico, se encuentran filamentos
gruesos de 8 a 20 micras de diâmetro y pocos
tabiques, cigosporas de 20 a 50 micras de diámetro
con pared lisa u ondulada y una papila o pico que
representa el remanente del tubo copulador
 ASPERGILOSIS
Micosis de animales y seres humanos, causadas
por hongos oportunistas del género Aspergillus,
en especial A. fumigatus, A. niger y A. flavus que
causan 95% de las infecciones.
Pueden dar enfermedad pulmonar alérgica o
invasora, aspergiloma, diseminarse a sistema
nervioso central u otros órganos, o localizarse,
como en otomicosis, onicomicosis, queratitis y
micetoma.
En inmunodeficientes es sistémica y letal.
• Se conoce 185 especies, de las cuales 34 se
han asociado a enfermedad en seres
humanos.
• Estos hongos son anamorfos
 DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
• El diagnóstico se demuestra mediante examen directo, biopsia y
cultivo positivos.
• En sinusitis, las muestras se obtienen por lavado de senos o de
biopsias de tejido necrótico.
• El examen directo con hidróxido de potasio al 10 o 30% se realiza
a partir de esputo, membranas expectoradas o fragmentos de
tejido que se obtienen por broncoscopia y lavado bronquial.
• Un cultivo positivo no es patognomónico de enfermedad y debe
interpretarse con mucha cautela; es necesario obtener varias
colonias o varios aislamientos positivos.
• El cultivo se realiza en los medios habituales sin cicloheximida, a
25 a 37°C; se ha recomendado el medio de Czapek para
estandarizar los aislamientos.
• Las colonias crecen con rapidez 3 a 4 días, son de color blanco,
verde, amarillo, café (marrón) o rojizo y puede haber difusión del
pigmento al medio de cultivo.
• La superficie es aterciopelada, granulosa o pulverulenta los
márgenes pueden ser bien delineados o difusos e irregulares.
• Estos hongos se identifican por el aspecto y la pigmentación de la
colonia.
 MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO

Datos histopatológicos
• Se observan abscesos necrosantes e hifas
gruesas de 2.5 a 4.5 micras de diámetro, en
ocasiones con halos eosinófilos y, casi nunca,
granulomas.
• En el aspergiloma, hay una capa de epitelio y
fibrosis que rodea a una masa de filamentos
gruesos y globosos, con ramificaciones
orientadas en la misma dirección, por lo que
toman aspecto de brocha o dedos.
• Los filamentos no atraviesan las paredes
• Pueden observarse las cabezas aspergilares y los
conidios.
• Los elementos micóticos se aprecian mejor con
PAS (ácidperyódico de Schiff), Gridley y Gomori-
Grocott