Aspectos generales

en Microbiologia
clínica
Definición de microbiología
• Ciencia que estudia los seres vivos que no se
pueden ver a simple vista
– mikros (pequeño)
– bios (vida)
– logos (ciencia)
• Esta definición implica que su objeto de
estudio está determinado por la metodología:
– Microscopio
– Técnicas de cultivo puro en laboratorio
etc.
 Tamaño pequeño:
consecuencias biológicas
•Tamaño pequeño
 intercambio más
eficiente, permite mayor
velocidad metabólica
•La relación S/V es
muy
alta
•Mayor contacto directo
con el medio ( reciben
de modo inmediato las
influencias ambientales)
•Gran tasa de entrada
de nutrientes
•Altas tasas
de crecimiento
• Gran tasade
productos dedesecho
salida de
Ramas que estudia la microbiología:
facilitar su estudio
• Bacteriología
– ( bacterias y arqueobacterias)
• Micología
– Hongos (unicelulares y filamentosos)
• Virologìa ( parasito intracelular)
– Virus, priones
• Parasitologìa
– Protozoos (unicelulares)
– Metazoos (pluricelulares)
• Helmintos (platelmintos y trematodos)
 DIVERSIDAD MICROBIANA
ACELULAR

VIRUS PRIONES

TIPO CÉLULAR

PROCARIOTA EUCARIOTA

BACTERIA ARQUEA HONGOS PARASITOS

PROTOZOOS

METAZOOS
Ilse Valderrama Heller, 2008
 BACTERIAS

VIRUS
PROTOZOOS

Ilse Valderrama Heller, 2008 HONGOS

Helmintos
 TIPOS
CELULARES

PROCARIONTE EUCARIONTE

Protistas
Bacterias Hongos
Arquea Plantas
Animales

Ilse Valderrama Heller, 2008

Ilse Valderrama Heller, 2008
 Característica Procariontes Eucariontes

Membrana nuclear Ausente Presente

ADN Desnudo y circular con histonas

Cromosomas Único Múltiples
División celular Fisión binaria Mitosis o Meiosis
Presentes
Mitocondria Ausente. Los procesos (con ribosomas 70S)
bioquímicos equivalentes
tienen lugar en la en células vegetales
Cloroplasto membrana citoplasmática (con ribosomas
70S)
Ribosoma 70S (50S + 30S) 80S (60S + 40S)
Pared celular De mureína De celulosa (vegetales)
Nucléolos Ausentes Presentes
Sistema de
Ausente Presente
Endomebranas
Órganos de Cilios y flagelos
Ilse VFalldaegrrealmoas (9+ 2)
locomoción
Ilse Valderrama Heller, 2008
 Clasificación Organismos Vivos
• La Teoría de la Evolución y la Teoría Celular nos proveen las
bases para comprender la interrelación entre los seres vivos
• Sistema de Clasificación Jerárquica de Whittaker
(1969) distribuyendo a los seres vivos en cinco reinos:
• Moneras
• Protistas
• Hongos
• Plantas
• Animales

Ilse Valderrama Heller, 2008

 Clasificación Organismos Analizó las
secuencia
Vivos del rRNA
16S,
descubriendo
dominio entero de
un
vida, las
• Carl Woese (1980) construye
árbol
un filogenético a partir de Archeas
y sus
estudios
los del ARNr resultados
ribonucléico
(ácido ribosómico) condujeron a una
clasificación
– Se basa en el estudio de las en tres dominios
diferencias en las secuencias
de ARNr comunes a todos los
seres vivos
• De este tronco común surgirían en
la evolución tres modelos de células
y una clasificación en 3 dominios:
– Bacteria
– Archae
– Eucarya

Ilse Valderrama Heller, 2008

Clasificación Organismos
Vivos
En 1980 se vio la necesidad de modificar la clasificación de
los 5 reinos agregando un sexto que corresponde a las
Arqueobacterias

Ilse Valderrama Heller, 2008

Los tres grandes dominios de la
vida

Ilse Valderrama Heller, 2008

• Árbol filogenético Universal establecido por Carl Woese y su
discípulo Gary Olsen que muestra los tres Dominios
• El termino "dominio" refiere a un nuevo taxón filogenético que
incluye tres líneas primarias:
– Archaea, Bacteria y Eucarya; y en línea descendente siguen seis
Reinos: I-Moneras, II-Arqueobacterias (obviamente separadas de
Moneras), III-Protistas, IV-Hongos, V-Plantas, VI-Animales.

Ilse Valderrama Heller, 2008

La gran profundidad evolutiva de
los microorganismos

Ilse Valderrama Heller, 2008

ARBOL FILOGENETICO UNIVERSAL

Ilse Valderrama Heller, 2008

Características diferenciales entre Bacteria, Archaea y Eukarya

Bacteria Archaea Eucarya

Peptidoglicano Sí No No
Lípidos Enl. ester Enl. eter Enl. ester
Ribosomas 70S 70S 80S
tRNA iniciador Formilme Metionina Metionina
-
tionina
Intrones en tRNA No Sí Sí
RNA polimerasa Una Varias Tres
(4 subun) (8-12 subun) (12-14 subun)
Ribosoma sensible a:
Toxina diftérica No Sensible Sensible
Cloranfenico Sensible No No
l
 Diferencia entre la estructura celular de
Bacteria, Archaea y Eucarya
Propiedad Bacteria Eucarya Archaea
Membrana NO SI NO
nuclear
Organelos NO SI NO
Tamaño 70S 80S 70S
ribosoma
Peptidoglicano SI NO NO
en la pared
Esteroles en NO SI SI
membrana (hopanoides)
Lípidos de Ester unidos a Ester unido a Eter,
membrana gliIclseeVraoldlerram a Hellegr, l2i0c0e8 rol ramificados
Estructura y
fisiología
Bacteriana

Ilse Valderrama Heller, 2008

Estructura y función celular:

PROCARIOTA

BACTERIA ARQUEA

Ilse Valderrama Heller, 2008

 TAXONOMÍA
Rama de la biología que se ocupa de Nombrar,
Organizar y Mostrar Relaciones entre seres vivos
– Funciones:
• 1.Identificar y describir la unidad taxonómica
básica o especie
• 2.Visualizar la forma apropiada de catalogar
esas unidades
• Tiene tres disciplinas de apoyo:
– •La Clasificación
– •La Nomenclatura
– •La Identificación

Ilse Valderrama Heller, 2008

 TAXONOMIA MICROBIANA

CLASIFICACION NOMENCLATURA IDENTIFICACIÓN

REINO Características importantes de un

Es rotular o nombrar unidades
microorganismo
definidas por clasificación
DIVISIÓN GENOTIPICAS
SISTEMA BINOMIAL
CLASE FENOTIPICAS

ORDEN Escherichia coli

FAMILIA

GENERO

ESPECIE

Ilse Valderrama Heller, 2008

Clasificación POLIFÁSICA
Es la tendencia moderna. Consenso en la
integración de distintos tipos de caracteres:
 Fenotípicos: - clásicos (morfología, nutrición, etc)
- marcadores quimiotaxonómicos
- perfil de proteínas totales y enzimas

 Genotípicos: clásicos: % G+C

hibridación DNA-DNA

nuevos: fingerprinting (ej. perfiles moleculares

por restricción o amplificación de ADN)

 Filogenéticos: basados en el gen del ARNr 16S

Ilse Valderrama Heller, 2008
Dominio
Phylum
Clase
Orden
Familia
Genero
Especie

Bacteria
Proteobacteria
Gamma Proteobacteria
Zymobacteria
Enterobacteriales
Enterobacteriaceae
Escherichia
Escherichia coli

Ilse Valderrama Heller, 2008

Treponema pallidum

Clasificación científica
Reino Bacteria
Philo Spirochaete
Clase Schizomycetes
Orden Spirochaetales
Familia Siprochaetaceae
genero Treponema
especie T.pallidum
Nombr
e
binomi
al
Trepon Ilse Valderrama Heller, 2008

ema
• Los agentes causales de enfermedades
infecciosas humanas pertenecen a :
• Bacterias
• Hongos
• Parásitos : protozoos y metazoos
• virus

Ilse Valderrama Heller, 2008

Clasificación de las Bacterias de importancia medica

Ilse Valderrama Heller, 2008

 Las bacterias
• son más grandes y complejas
que los virus (0.1 a 5 ó más µm
de longitud).
• DNA y RNA, pero sin núcleo.
• Corresponde al dominio
bacteria
• algunos requieren célula
huésped y son por lo tanto
parásitos intracelulares
estrictos (p.ej. Chlamydia,
rickettsias, etc.).
• Aunque incluyen muchos tipos
fisiológicos distintos, y por lo
tanto pueden vivir en cualquier
tipo de
ambiente, evidentemente a
nosotros nos interesan las que
pueden colonizar el cuerpo
humano.

Ilse Valderrama Heller, 2008

TAMAÑO: célula eucariota versus
célula procariota

• Por lo general, más pequeño que el de las

células eucarióticas
• Pero existen bacterias
– Gigantes (>0,5 mm)
– Enanas (<0,1 micra)
– Un tamaño “típico”:
– 0,5 x 3 micras

Ilse Valderrama Heller, 2008

Tamaño comparativo de
bacterias, virus y
ácidos nucleicos
Ilse Valderrama Heller, 2008
Diversidad de procariotas: enfoque
biomédico v/s virus

Ilse Valderrama Heller, 2008

 Estructura de la célula bacteriana
• Membrana
citoplasmática
• Pared celular
• Citoplasma o
masa
citoplasmática
• Material nuclear
• E. accesorios
• Cápsulas
• Flagelos
• Pili
• Esporas

Ilse Valderrama Heller, 2008

Ilse Valderrama Heller, 2008
 Morfología bacteriana
• ESFÉRICA O
ELIPSOIDAL :
COCOS
• Son más resistentes a los
cambios adversos del
ambiente como la
desecación.
• CILÍNDRICA:
BACILOS
• Pueden tomar más
fácilmente los nutrientes
en solución diluída
• ESPIRAL:
– ESPIRILOS O
ESPIROQUETA
– Se propagan
rápidamente

Ilse Valderrama Heller, 2008

 Bacilo único

Vibrio

Diplobacilos

Estreptobacilos Espirilo

Cocobacilos

Espiroqueta

Forma estrellada Forma cuadrada

Ilse Valderrama Heller, 2008

Agrupamiento de las bacterias: Agrupamiento de las
a) cocos bacterias:b) bacilos

• Diplobacilos

• Estreptobacilos

• cocobacilos

Ilse Valderrama Heller, 2008

 ESTRUCTURA bacteriana
• Las estructuras bacterianas las
podemos clasificar, por razones
didácticas, en
estructuras constantes o
accesorias.
• Las estructuras • Las estructuras accesorias:
constantes están
son las presentes sólo en algunas de ellas
estructuras y aunque no son
esenciales para la indispensables
vida de la para la vida,
bacteria e incluyen otorgan
– el citoplasma extraordinarias
ventajas
– Cromosoma adaptativas a las bacterias
bacteriano que las poseen.
– la membrana celular y la – cápsula, flagelos ,
pared celular. esporas , fimbrias,
•
Ilse Valderrama Heller, 2008 etc.
 Citoplasma
• Actividad química y biosintética
• Proteínas (enzimas, complejos
enzimáticos, estructurales)
• Ribosomas (70S: 55 proteínas, rRNA
5S, 16S, 23S
• mRNA, tRNA
• Otras macromoléculas, solutos,
agua , nutrientes , etc
• No tienen citoesqueleto.
• Nucleoide bacteriano: ADN
– haploide, Circular, Único
• Material genético
extracromosomal :
– plasmidios

Ilse Valderrama Heller, 2008

 Inclusiones citoplasmáticas
• Algunas bacterias tienen
estructuras internas
• Varian en cantidad y
número
• Difieren en sus
contenidos

– gránulos de
almacenamiento -
polifosfato,azufre,
polihidroxibutirato
(PHBs),
glucogeno
– vesículas de gas –
flotación
– Carboxisomas,
clorosomas.

Ilse Valderrama Heller, 2008

• Gránulos de polihidroxibutirato (PHBs)

vesículas de gas
flotación

Ilse Valderram a Heller, 2008

Ribosomas 80S v/s 70 S

Ilse Valderrama Heller, 2008

 ADN cromosomal:
nucloide bacteriano
• Único
• Monocatenario
• ADN
• Sin histonas
• Funciones celulares

Ilse Valderrama Heller, 2008

 Plasmidios
• ADN
extracromosomal
– Resistencia
antibioticos
– Metales
pesados, UV
• Síntesis de
pigmentos

Ilse Valderrama Heller, 2008

Ilse Valderrama Heller, 2008
 Membrana celular
 Composición química
 Funciones
 Transporte de sustancias
 Barrera de permeabilidad
 En fotótrofas: Estructuras
intracitoplasmáticas(fotosint e
sis)
 Respiración celular
 Agentes reforzantes:
esteroles
 Archaea, membranas
adaptadas a condiciones
extremas - éteres de alcohol
isoprenoide, algunas
monocapas

Ilse Valderrama Heller, 2008

Ilse Valderrama Heller, 2008
 PARED CELULAR
• soporte físico de la célula
• la estructura más externa
cuando no existe cápsula.
• protección física a la
bacteria y también la protege
del shock osmótico, dada la
hipertonicidad celular.
• algunos de sus elementos
participan en la interacción
agente-hospedero,
– facilitando la adherencia
a los tejidos
– protegiendo la
bacteria de los
mecanismos
inespecíficos de
defensas o induciendo
una respuesta
inflamatoria.
• El componente básico
de la pared celular es el
peptidoglicano o mureína.

Ilse Valderrama Heller, 2008

Dos grupos de bacterias carecen de
pared celular:
• Mycoplasma
que poseen
solamente
membrana celular
• las formas L
derivadas de bacterias
que perdieron su
habilidad de sintetizar
su pared celular
• MET de Mycoplasma
• Resistente a la
penicilina G

Ilse Valderrama Heller, 2008

 Paredes de las eubacterias

Esto le da al peptidoglicano su estructura de red, determinando su resistencia.

La unión entre los tetrapéptidos de cadenas vecinas es inhibida por los
antibióticos ß‑ lactámicos.
Existen diferencias en la composición y estructura de la pared celular entre
las bacterias Gram (+) y Gram (-)

Ilse Valderrama Heller, 2008

 Bacteria Gram-
Gram +

Ilse Valderrama Heller, 2008

Estructura del Peptidoglicano

Ilse Valderrama Heller, 2008

 Ejemplos de entrecruzamientos en el
peptidoglucano

Directo (muchas Puente pentaglicina (algunas

Gram- Gram
Ilse Valderrama Heller,positivas
2008
negativas)
 PARED EN GRAM +
• El péptidoglicano en varias
capas grosor (80 –
90%)
• Atraviesan el
peptidoglicano
polisacáridos ácidos,
denominados ácidos
teicoicos.
• Los ácidos teicoicos son de
dos clases:
– poliglicerol
fosfato y poliribitol
fosfato.
• Los poliglicerol fosfatos
están unidos a la membrana
celular y se les denomina
ácidos lipoteicoicos Funciones:
• los poliribitol fosfato o • Estabilización del peptidoglicán
ácidos teicoicos están unidos • Adhesión celular (“Adhesina”)
al peptidoglicano •Le dan la carga negativa a la envoltura
bacteriana
Ilse Valderrama Heller, 2008
 PARED EN GRAM -

• La membrana externa contiene numerosas proteínas, siendo las porinas las más abundantes. El LPS
constituye una endotoxina, que se libera cuando la bacteria se divide o muere.
• Se denominan así, porque forman poros que comunican el exterior con el espacio periplásmico.
• Las porinas constituyen poros de difusión inespecíficos que permiten el paso de sustancias hidrofílicas
y no mayores de 700 daltons (aminoácidos o disacáridos).
• Las porinas más conocidas en E. coli son OmpC y OmpF.

Ilse Valderrama Heller, 2008

 PARED EN GRAM -

• El LPS es una molécula anfipática que contiene tres regiones

diferentes: el lípido A, el core y el antígeno O.
• El lípido A, es un complejo de azúcares, fosfatos, ácidos grasos
y forma una bicapa con los fosfolípidos de la membrana.
• Además, es el responsable de la toxicidad del LPS.
• El core, es un oligosacárido de 4 a 5 azúcares, algunos
infrecuentes como las heptosas y un azúcar de 8 carbonos,
denominado ceto-deoxioctanoico (KDO) . usualmente
específico de especies
• El antígeno O, está formado por cadenas de 25 o más unidades
de azúcares repetidas.

Ilse Valderrama Heller, 2008

Ilse Valderrama Heller, 2008
Ilse Valderrama Heller, 2008
GRAM + GRAM -

Ilse Valderrama Heller, 2008

 Bacterias de importancia medica que no
pueden ser observadas con la tinción Gram

Ilse Valderrama Heller, 2008

 Pared celular de Archaea
• No contiene
peptidoglicano
• Puede ser de
– pseudopeptidoglicano
(pseudomureina) tiñe G+
– pseudomureina cubierta de
proteina,tiñe G+
– monocapa superficial de
proteina o glicoproteina, sin
pseudomureina (alg
halófilos,
alg.metanogénicos y
termoacidófilos) tiñe G-
• Uniones tipo eter acidos
grasos
• Existen Archaea sin
pared

Ilse Valderrama Heller, 2008

características Gram + Gram -

Membrana externa - +

Pared celular Gruesa Delgada

Lipopolisacarido - +

Endotoxina - +

Acido teitoico Presente a menudo -

Esporulacion El algunas cepas -

capsula Presente a veces Presente a veces

Lisozima Sensible Resistente

Antibacteriana penicilina Mas susceptible Mas resistente

Producciom exotoxina Algunas cepas Algunas cepas

Ilse Valderrama Heller, 2008

 Síntesis de Peptidoglicano

•Bactoprenol (C
55 alcohol isoprenoide) -- carrier lipídico que transporta el disacárido-
pentapeptido del citoplasma al periplasma y lo inserta en la pared celular en
crecimiento
•La transpeptidación, es inhibida por penicilina
Ilse Valderrama Heller, 2008
 Transpeptidación

Inhibido por la penicilina G.

Ilse Valderrama Heller, 2008

 Componentes no
•
esenciales
Capsula
• Pili sexual
• Flagelo
• Fimbria
• Esporas
• Plasmidos

Ilse Valderrama Heller, 2008

•
Cubiertas extracelulares
Glicocalix: Material externo a la pared celular
– Cápsulas - Material en la superficie celular
– Capas mucilaginosas - Material adherido, menos
fuertemente
– Capa S: Subunidades proteicas o glicoproteicas. G+,
G- y Archaea. Pueden constituir la pared
• Funciones
– Protección contra defensas del huésped
(fagocitosis)
– Protección contra desecación
– Protección contra virus, toxinas
– Adhesión a superficies (células, objetos inanimados)
formación de biofilms.
– Protegen de protozoos , de ataques por agentes
• La mayoría
antimicrobianos,etc
de las bacterias Gram (+) y Gram (-) sintetiza
una cubierta de naturaleza polisacárida que las rodea.
• Los exopolisacáridos son sintetizados en la membrana
citoplasmática, atraviesan la pared celular y se establecen
afuera.
• Se clasifican de acuerdo a la relación con la superficie
exterior de la bacteria y a su grado de rigidez en cápsulas y
glicocálix.

Ilse Valderrama Heller, 2008

 Cápsulas: exopolisacaridos
 Algunas bacterias segregan materiales mucosos: polisacáridos,
polipéptidos y complejos de polisacáridos y proteínas (glucocálix)
 Cápsula: cuando el material está dispuesto de un modo compacto
alrededor de la célula
 Capa mucosa: si el material es laxo, de modo que forma solo una
capa difusa.

Streptococcus Enterobacter aerogenes

Ilse Valderrama Heller, 2008

Evasión de una bacteria patógena capsulada
del sistema complemento

Ilse Valderrama Heller, 2008

 Fimbria, Pili, Flagelo
• Fimbria - filamento proteico
corto, involucrado en funciones
de adhesión a superficies.

• Pelo sexual - unión a célula

receptora durante la
conjugación.

• Flagelo - filamento proteico

involucrado en la
motilidad.

Ilse Valderrama Heller, 2008

 FIMBRIAS
• también llamadas pili, son
microfibrillas parecidas a pelos,
que rodean en número de 100-200
a algunas bacterias Gram (-).
• Miden 3-7 µm de diámetro, por lo
que se observan sólo al
microscopio electrónico.
• un proteína estructural llamada
pilina, que se dispone en cilindros
rígidos
• responsables de la adherencia
específica de las bacterias a los
tejidos del hospedero, explicando
la especificidad de hospedero y
de tejidos de las bacterias.

Ilse Valderrama Heller, 2008

 CLASIFICACIÓN POR POSICIÓN DEL FLAGELO

A) Monótrico B) Anfítrico

C) Lofótrico D) Perítrico
Ilse Valderrama Heller, 2008
 Endosporas
• Resistencia al calor, radiación,
desecación.
• principalmente por los géneros
Bacillus y Clostridium
• supervivencia en ambientes
desfavorables
• DNA protegido por ácido
dipicolínico y proteínas.
• Luego de la activación por
stress, la disponibilidad de
nutrientes dispara la
germinación y el crecimiento
• La localización de la espora en
la célula puede ser usada para
la identificación

Ilse Valderrama Heller, 2008

Características importantes de las esporas y
sus implicaciones medicas.

Ilse Valderrama Heller, 2008

Ilse Valderrama Heller, 2008
 Células Vegetativas-Endoesporas
Característica Célula vegetativa Endoespora

Contenido de Calcio bajo alto

Ac. dipiconílico ausente presente

Pequeñas proteínas ausentes presentes
solubles en ácido

Contenido de agua 80-90% 10-25%

pH citoplasma 7 5.5-6

Actividad enzimática elevada baja

Metabolismo elevado Bajo o ausente

Resistencia: calor, baja elevada

radiación, compuestos
químicos

Sensibilidad lisozima Sensible Resistente

Ilse Valderrama Heller, 2 008
Ilse Valderrama Heller, 2008
¡Muchas gracias por su
atención!

Ilse Valderrama Heller, 2008