“AÑO DEL FORTALECIMIENTO DE LA SOBERANÍA NACIONAL”

UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURA

FACULTAD DE INGENIERÍA DE MINAS
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA QUÍMICA
TEMA: AISLAMIENTO Y SELECCIÓN DE BACTERIAS
PRODUCTORAS DE AMILASAS
CURSO:
MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL
DOCENTE:
JORGE LUIS BERMEJO BENITES

INTEGRANTES:
 Aguirre More, André Joseth
 Albán Torres, Eliana Nataly
 Aquino Aguilar, María Joaquina
 Arica Mariño, Ángel Eduardo
EL ESTUDIO DEL
AISLAMIENTO Y
SELECCIÓN DE
CULTIVOS NATIVOS DE
BACILLUS SP.
PRODUCTOR DE
AMILASAS A PARTIR
DE AMILÁCEOS DEL
MERCADO LA
HERMELINDA,
TRUJILLO, PERÚ.
 RESUMEN
Primero se recolectaron residuos amiláceos de yuca, papa, camote, olluco y choclo

se cortaron porciones contaminadas de 25g y colocaron en agua destilada estéril, se homogeneizó

manualmente por 5minutos, y calentó a 80°C durante 10minutos.

Se realizaron diluciones seriadas de a y sembró 0.1 ml de las dos últimas diluciones en

Agar Almidón 0.1%.

Las placas fueron incubadas a 37°C durante 24 a 48horas.

Luego se adicionó lugol en las zonas circundantes a las colonias, y

seleccionaron aquellos cultivos con halo neto de hidrólisis.

Se hicieron subcultivos en Agar-Almidón, incubaron a 37°C durante 24 a 48horas, y seleccionaron los

diez cultivos bacterianos que tuvieron mayor halo neto.
 RESUMEN
Posteriormente, en cada biorreactor se colocó 450mL de caldo almidón 0.1% - buffer fosfato a pH 7.0,
suplementado con sales, agregó 50mL del inoculo estandarizado e incubó a temperatura ambiente

Se determinó la producción de amilasas cada 24h por 5 días, extrayendo l0 ml de muestra

de cada biorreactor y centrifugado.

Al sobrenadante, se cuantificó la cantidad de amilasas producidas en relación al tiempo

de incubación y determinó las unidades enzimáticas de amilasas/ml

Finalmente, se aislaron 50 cultivos nativos con capacidad de degradar almidón de los residuos
amiláceos, de los cuales 05 cultivos tuvieron con mayor capacidad hidrolítica sobre el almidón en placa

El cultivo nativo FGM-04P que fue identificada como Bacillus sp. como el mayor
productor de amilasas en sistema agitado con 0,1 % de almidón, pH 7,0 y 25ºC.
 INTRODUCCIÓN
Los autores de este trabajo ven una posibilidad de mejoría en una situación problemática
Ya que
Usualmente en los mercados destacan residuos de papa, yuca, camote, olluco, subproductos de la comercialización
que son eliminados al ambiente, contaminándolo, y favoreciendo la propagación de enfermedades.

He aquí es donde se pretende aprovechar estos insumos y usarlos en la comunidad industrial y

empresarial, ya que aquí se necesita de microorganismos productores de amilasas para obtener jarabes
glucosados y ser aprovechados en la producción de bioetanol a gran escala.

En tal sentido Proponen una alternativa para aprovechar estos residuos amiláceos de papa, yuca, camote,
olluco y choclo, de donde se aislarán e identificarán especies nativas de bacterias
amilolíticas, cuyas enzimas son fácilmente recuperables de los medios de producción.

En este sentido, es necesario aislar nuevos cultivos bacterianos del género Bacillus con altos niveles de
producción de amilasas, que puedan existir en el ambiente a partir de residuos amiláceos, lo cual permitirá
contar con una cepario bacteriano, para producir enzimas a nivel comercial y ser utilizadas en la hidrólisis y
sacarificación del almidón.
 La hidrólisis enzimática o degradación enzimática del almidón por acción de la amilasa a escala industrial ha sido
practicada por muchos años y ha reemplazado considerablemente los procesos tradicionales de hidrolisis ácida.

Este proceso de hidrólisis enzimática consiste en la utilización de enzimas como catalizadores

para romper las moléculas de almidón

obteniéndose productos semejantes a los de la hidrolisis ácida, donde el tipo de enzima más utilizada en
este proceso son las amilasas

siendo las más conocidas la α-amilasa, estas desdoblan el almidón en glucosa y maltosa, y se caracteriza por tener la
facilidad de fragmentar los almidones en dextrinas reductoras, que no dan color en el yodo y la β-amilasa convierten la
totalidad del almidón en glucosa.

Existen dos fases dentro del proceso de hidrólisis

enzimática.
Primero, la licuefacción y segundo, la sacarificación.
 Las amilasas son enzimas extracelulares que catalizan la
hidrólisis de enlaces glucosídicos α-(1-4) con retención
de la configuración del carbono anomérico, a partir de
polímeros de glucosa, como el almidón y glucógeno.
Ventajas de la hidrólisis enzimática:
Las enzimas son específicas para un tipo de Tienen aplicaciones en diversos fermentación
enlace (selectividad), por lo cual, no es usual la sectores:
textil papel panificació producción de energéticos
aparición de productos de degradación.
n
Los rangos moderados de condiciones como preparación de ayudantes digestivos y farmacéuticos.
temperatura y pH en las que transcurre la Su principal aplicación es la producción de jarabes de
hidrólisis enzimática (pH=4-8; T=40-60°C)
glucosa, maltosa, maltotriosa, dextrina y/o fructosa.
No se presentan sustancias extrañas añadidas, se
mantiene el valor nutritivo ya que no se produce Biotecnológicamente, son las enzimas más importantes ya que
degradación de los componentes separados. representan cerca del 30% del mercado mundial de enzimas.
 La habilidad de las especies de Bacillus de formar endosporas altamente resistentes al calor, desecación,
irradiación UV, les confiere una ventaja competitiva muy importante en un ambiente como el suelo.

Bacillus tiene como hábitat natural el suelo y se encuentra ampliamente

distribuido en la naturaleza, entre sus principales características se
encuentran:

 Su capacidad de crecer en un intervalo amplio de temperaturas desde 15 hasta 55 °C.

 Presentar motilidad, aerotaxis y velocidades de crecimiento altas.

 Sobrevivir en concentraciones salinas (hasta el 7% de NaCl).

 Producir una amplia variedad de antibióticos y enzimas hidrolíticas extracelulares.

Las α-amilasas bacterianas del género Bacillus como B. subtilis, B. stearothermophilus,

B. licheniformis y B. amyloliquefaciens, han encontrado una extensa aplicación en
diversos procesos industriales debido a sus amplios rangos de operación de temperatura
(25-90°C), resistencia a pH extremos (1.0-11.5) y altos niveles de expresión.
Materiales y
metodos
 Materiales y procedimientos
Para explicar de manera clara la teoría expuesta , tomaremos de objeto de estudio los residuos amiláceos
del mercado de la Hermelinda del departamento de Trujillo, Peru.

MATERIAL BIOLOGICO

Muestras de residuos amiláceos de Composición de amilosa y amilopectina en almidones naturales

yuca, papa, camote, olluco y choclo,
procedentes del mercado La
Hermelinda, Trujillo - Perú.
Composición Bromatológica de productos naturales
 RECOLECCION DE LA MUESTRA

Lugar de recolección: Trujillo, Perú.

Materia de estudio : residuos amiláceos en el mercado de Hermelinda
Lugar de estudio: Universidad nacional de Trujillo(Laboratorio de Fisiología
Microbiana del Departamento de Microbiología y Parasitología

Procedimiento
Se recolectaron 5 muestras representativas de residuos amiláceos de 250 gr de yuca, camote, papa olluco y
choclo, con su respectiva rotulación en bolsas de polietileno

Composición bromatológica de la yuca

 TRATAMIENTO DE LA MUESTRA

Para el tratamiento se preparo mediante un tratamiento térmico de esterilización para

esterilizar el objetivo de estudio y los resultados sean correctos

En lo cual

De los residuos amiláceos se cortaron porciones contaminadas y se colocaron en un vaso de precipitación de

500 mL de capacidad hasta completar 25 g.

Posteriormente se agrego 225 ml de agua destilada estéril (ADE), e inmediatamente se homogenizo de

manualmente por un tiempo de 5 minutos y se verifica que este este homogéneo

Por siguiente se hará el calentamiento de la muestra por un tiempo prudente de 10 minutos en un rango de
80ºC cuidando a muestra para que no sufra daños
 SELECCIÓN PRIMARIA

se realizaron diluciones seriadas de 0.1 a 0.001 en solución salina fisiológica estéril (SSFE); y a partir de las dos
últimas diluciones, se sembró 0.1 mL por superficie en placas con Agar Almidón (AA) 0.1% (g/L: almidón 1.00;
Peptona, 2.50; Extracto de levadura, 0.25 y Agar, 15.0).

Luego del tiempo de incubación Las placas fueron incubadas a 37

Se adiciona Lugol en las zonas circundantes de las colonias o aquellos cultivos °C durante 24 a 48 horas y se
con que tiene un 1mm de halo neto de hidrolisis alrededor en cada colonia observó el crecimiento de las
colonias cada 24 horas
se sembraron por puntura en AA y se incubaron a 37 °C durante 24 a 48 horas

se adiciona Lugol y seleccionaron los 10 primeros cultivos bacterianos que

tuvieron mayor halo neto de hidrolisis

Además se realizó la diferenciación bioquímica

Los cultivos seleccionados fueron subcultivados en
respectiva de acuerdo a lo establecido en el Manual de
AA 0.1% e incubados a 37 °C durante 24 a 48
Berge’s of Determinative Bacteriology y Mac
horas, y rotulados en orden correlativo
Faddin
 Determinación de la producción de amilasa un sistema agitado

se reactivó por estría en placas conteniendo AA 0.1%

Reactivación del cultivo y preparación del inoculo e incubados a 37 °C por 18 h.

Se construyo 05 biorreactores con frascos de vidrio

Construcción de biorreactores de 1000 mL de capacidad

Se colocó 450 mL de una solución de caldo almidón

0.1 % - buffer fosfato a pH 7.0 suplementado con
Producción de amilasas en un biorreactor (NH4)2SO4, CaCl2, luego se agregó 50mL de
inoculo estandarizado (9.0 x 108 UFC/mL) a cada
uno de los biorreactores

La evaluación de la actividad enzimática realizó

Medida de la actividad enzimática mediante el método de Street- Close modificado
por Cueva.
 RESULTADOS

Fig. 1. Observación de los halos de hidrolisis de almidón en placa producidos por las bacterias aisladas
durante la selección primaria por el método del yodo.
Tabla 1. Características microscópicas y macroscópicas de los cultivos bacterianos aislados y
seleccionados de muestras de residuos amiláceos, procedentes del mercado La Hermelinda, Trujillo-Perú.
Fig. 2. Producción de amilasa (UA/mL) por Bacillus sp. (FGM-02Y, FGM-09C, FGM-05O y FGM-
04B) a pH 7 a temperatura ambiente en relación al tiempo de incubación.
 
Tabla 2. Análisis de varianza de los valores promedio de (UA/mL) producidas por los
cultivos FGM-04P, FGM-02Y, FGM-09C. FGM-05O y FGM-04B
Tabla 3. Resultados de las pruebas bioquímicas para la identificación de bacillus sp. por medio de
MicroScan del cultivo bacteriano seleccionado FGM-04P.
Tabla 4. Pruebas bioquímicas
de identificación del cultivo
FGM-04P seleccionado a
partir de muestras de papa.
CONCLUSIONES Y DISCUSIONES

Según las muestras recolectadas y procesadas de residuos amiláceos

contaminados del mercado La Hermelinda de la ciudad de Trujillo se permitió
aislar colonias de bacterias en placas con Agar Almidón y siguiendo el
procedimiento de la selección primaria de estos cultivos la cual se hizo en base a
su capacidad hidrolítica del almidón en placa mediante la técnica de Lugol. Se
seleccionaron los 5 cultivos bacterianos que presentaron mayor halo de hidrolisis
sobre el Agar Almidón en placa, donde se observa que el cultivo que presento el
mayor halo de hidrolisis fue el FGM-04P con 29 mm mientras que los cultivos
FGM-09C y FGM-04B fueron los que presentaron menor halo de hidrolisis de 25
mm de diámetro.

Esto se debe a que hay microorganismos que producen más enzimas hidrolíticas
que otras, provocado por diversos factores físicos y químicos que influyen en el
fenotipo de un microorganismo.
  
La identificación de los 05 cultivos bacterianos con capacidad
hidrolítica sobre el almidón se realizó por medio de la descripción de las
características morfológicas de las colonias y de acuerdo a sus
características tintoriales, y en base a pruebas bioquímicas se pudo
determinar que el cultivo aislado y seleccionado se trataba de una cepa de
Bacillus sp. De acuerdo al manual de Bergey los microorganismos del
género Bacillus en base a la capacidad que tienen para crecer en presencia
o ausencia de oxígeno se pueden clasificar en: aerobias o anaerobios
facultativos, Gram positivos, formadores de endosporas.

La prueba estadística ANOVA que se aplicó a los valores promedios (UA/mL)

producidas por los cultivos FGM-04P, FGM-02Y, FGM-09C. FGM-05O y FGM-
04B como se ve en la Tabla 2. determino que no hubo diferencia significativa lo
que se concluye que van a producir la misma cantidad de enzimas los 05 cultivos
bacterianos evaluados.
 Teniendo en cuenta las características del crecimiento y producción en medio liquido
se pudo determinar que el cultivo Bacillus sp. FGM-04P fue el mayor productor de
amilasas. Presento la mayor producción de amilasa a pH 7 a la temperatura de ensayo
23-25°C hasta las 120 h de incubación. Otro estudio con Bacillus FGM-A15 reporto
una mayor producción de amilasa a pH 7 a 55°C hasta las 72 h de incubación.
.

Se concluyo que de los 50 cultivos nativos con la capacidad de degradar almidón de los residuos amiláceos y
de los 5 cultivos que tuvieron mayor capacidad hidrolítica sobre el almidón en placa el que destaco fue el
cultivo FGM-04P que fue identificado como Bacillus sp. Y como el mayor productor de amilasas con un pH
7 y temperatura de 23-25 °C.
01
About the
Disease
You can enter a subtitle here
if you need it
 About Bacterial Diseases
Mercury is the closest planet to
the Sun and the smallest
75%
Despite being red, Mars is
actually a very cold place
45%
50% 30%
Venus has a beautiful name, but
it’s terribly hot
60% Mars Jupiter
Mars is full of iron Jupiter is the biggest
Neptune is the farthest planet oxide dust planet
from the Sun
60%
 Concepts and Typology

Type Features Conclusions

Despite being red, Mars is Mercury is the closest planet

Bacterium A actually a cold place to the Sun

Jupiter is the biggest planet in Neptune is the farthest planet

Bacterium B the Solar System from the Sun

Saturn is composed of Venus is the second planet

Bacterium C hydrogen and helium from the Sun
 Pathology

Mars Jupiter Saturn Neptune

Despite being red, It’s It’s a gas giant and the Saturn is composed Neptune is the
a cold place full of biggest planet in the mostly of hydrogen farthest planet from
iron oxide dust Solar System and helium the Sun
 Symptoms of the Disease

Mars
Despite being red, it’s a cold
place full of iron oxide dust

Jupiter
It’s a gas giant and the biggest
planet of them all

Saturn
Saturn is composed mostly of
hydrogen and helium
 234,231
Saturn is the ringed planet

1,500
Mars is a cold place

33,123
Jupiter is a gas giant
 23,000
About 2 million people in the U.S. suffer
from antibiotic resistant infections each
year and 23,000 die due to the condition
A Picture Is Worth a Thousand
Words
 “This is a quote, words full of
wisdom that someone important
said and can make the reader get
inspired.”
—Someone
Famous
 Diagnosis

Mercury Venus Mars

Mercury is the closest Venus is the second planet Despite being red, Mars is
planet to the Sun from the Sun actually a cold place

Jupiter Saturn Neptune

It’s the biggest planet in Saturn is composed of Neptune is the farthest
the Solar System hydrogen and helium planet from the Sun
 Prevention

How to Prevent Bacterial Diseases

● Here you can write what to do to help prevent

bacterial diseases
● Here you can write what to do to help prevent
bacterial diseases
● Here you can write what to do to help prevent
bacterial diseases
● Here you can write what to do to help prevent
bacterial diseases
 Treatment

Jupiter Mercury
Jupiter is a gas giant and the Mercury is the closest planet to
biggest planet in the entire the Sun and the smallest of
Solar System them all
 Recommendations

Dos Don’ts

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patient should do patient shouldn’t do
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● Here you can describe what the ● Here you can describe what the
patient should do patient shouldn’t do
● Here you can describe what the ● Here you can describe what the
patient should do patient shouldn’t do
 Prevalence

1990

2000

2010

2020
 Conclusions
Mercury is the closest planet to the Sun
and the smallest one in the Solar
System—It’s only a bit larger than the
Moon. The planet’s name has nothing
to do with the liquid metal, since
Mercury was named after the Roman
messenger god
 Our Team

Sarah Lee Ava James Jade Smith

You can replace the You can replace the You can replace the
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with your own with your own with your own
 References
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● Doctor injecting vaccine to a patient in clinic
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d
● Coronavirus prevention infographic
● Checking body temperature and stay safe