INMUNOLOGÍA

Pruebas de Laboratorio
Técnicas Inmunológicas

• Se utilizan para detectar, identificar y cuantificar

antígenos en muestras clínicas, así como para
evaluar la respuesta humoral frente a la infección
y los antecedentes de exposición a agentes
infecciosos de un individuo
Pruebas de Laboratorio

• Titulo de un anticuerpo se define como al dilución

mas baja de una muestra que mantiene una
actividad detectable

• Seroconversión: aumento del titulo de

anticuerpos o paso de Negativo a Positivo
Pruebas de Laboratorio
• Sensibilidad: probabilidad de clasificar
correctamente a un individuo enfermo
- Capacidad de la prueba para detectar la
enfermedad

• Especificidad: probabilidad de clasificar

correctamente a un individuo sano
- Capacidad que tiene la prueba para detectar
como no enfermo a aquel individuo que
efectivamente no lo esta
Medición Antígeno-Anticuerpo

• La medición de la interacción Antígeno-

Anticuerpo con fines diagnósticos, se realiza en
dos vías:
1. Utilización de anticuerpos específicos para
detectar antígenos ( Diagnostico Directo )

2. Utilización de antígenos específicos para

detectar anticuerpos ( Diagnostico Indirecto )
Conceptos Básicos

• Las IgM normalmente reflejan una infección

reciente

• El aumento del titulo de anticuerpos indica una

infección reciente

• Los títulos de IgG por si solos suelen indicar una

infección pasada
Pruebas de Precipitación
• Se utilizan con antígenos solubles a los que se
permite difundir en una matriz semisólida
• Fundamento: la unión antígeno–anticuerpo
precipita de forma visible y permite establecer la
presencia de anticuerpos específicos
• Sensibles y especificas
Pruebas de Hemaglutinación
• Esta prueba se basa en la capacidad de algunos
patógenos para causar la aglutinación de
eritrocitos
• Suelen ser pruebas especificas y bastantes
sensibles
Pruebas de Inmunofluorescencia
• Fundamento: se basa en una reacción antígeno-
anticuerpo que se revela con al ayuda de un
anticuerpo marcado con una sustancia
fluorescente
Pruebas de Inmunofluorescencia
• Puede ser Directa o Indirecta
Técnica ELISA
• Enzimoinmunoanálisis de absorción (ELISA)
• Se basan en una reacción antígeno anticuerpo
que tiene lugar sobre un soporte solido
( microplaca de plástico)a la que se ha adsorbido
un antígeno o un anticuerpo

• La reacción final se revela mediante una enzima

que modifica un sustrato que adquiere color

• Son pruebas muy sensibles y muy especificas

Técnica ELISA
• Las diversas modalidades difieren en la forma en
la que capturan o detectan los anticuerpos o los
antígenos
Pruebas de ELISA
a) ELISA Indirecto
b) ELISA de Competición
c) ELISA de Captura
Investigar fundamentos
Western- Blot
• Es una variante de la técnica de ELISA
• Técnica analítica usada para detectar proteínas
especificas en una determinada muestra
mediante una electroforesis en gel.
• Se utiliza para confirmar los resultados de
análisis de ELISA en sujetos con sospecha de
infección por el VIH
Fijación de Complemento
• Se basa en la capacidad del complemento para
unirse a la reacción antígeno-anticuerpo, la
prueba incluye la adición de eritrocitos
sensibilizados con una hemolisina. Si el suero
posee anticuerpos específicos, se fija al
complemento y no puede unirse a la hemolisina
para lisar los eritrocitos.
• Muy especifica
Pruebas de Aglutinación
• Detectan en su mayoría IgM
• Fundamento: se basa en la unión de antígenos
particulados a los anticuerpos, preferentemente
de clase IgM. Son pruebas muy sensibles pero
con poca especifidad
PCR
• Esta técnica se basa en la propiedad natural del
ADN polimerasa para replicar hebras de ADN,
para lo cual se emplean ciclos de altas y bajas
temperaturas alternadas, para separar las hebras
de ADN recién formadas en cada fase de
replicación
MUCHAS GRACIAS