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    ANALISIS CLINICO 11 La Determinación Fotométrica de La Amilasa en Suero

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    Este documento describe un método para determinar la amilasa en suero y orina mediante una reacción fotométrica. La amilasa hidroliza el almidón y el almidón restante reacciona con yodo para dar color, el cual se mide fotométricamente. Se proveen detalles sobre reactivos, muestras, procedimiento, cálculos, advertencias y rangos de referencia.

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    ANALISIS CLINICO 11 La Determinación Fotométrica de La Amilasa en Suero

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    Este documento describe un método para determinar la amilasa en suero y orina mediante una reacción fotométrica. La amilasa hidroliza el almidón y el almidón restante reacciona con yodo para dar color, el cual se mide fotométricamente. Se proveen detalles sobre reactivos, muestras, procedimiento, cálculos, advertencias y rangos de referencia.

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    ANALISIS CLINICO 11 la determinación fotométrica de la Amilasa en suero (1)

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    LA DETERMINACIÓN

    FOTOMÉTRICA DE LA
    AMILASA EN SUERO
    GRUPO: 3

    ◦INTEGRANTES:
    ◦Colquichagua Leon Katherine
    ◦Guillen Pari Liseth
    ◦Larico Yto Edson
    ◦Silva Vásquez Ronal
    Reactivo líquido para la determinación
    fotométrica de la Amilasa en suero y
    orina.

    SIGNIFICANCIA CLÍNICA

    La enzima amilasa es producida por el páncreas exocrino y las

    glándulas salivales. Esta enzima pertenece a las del grupo denominado hidrolasas teniendo por

    función la hidrólisis de algunos polisacáridos

    como el almidón y el glucógeno. Su aumento está relacionado en la

    mayoría de los casos con pancreatitis aguda, elevándose bruscamente

    la concentración de la enzima en la sangre y orina, permaneciendo elevada por más tiempo en la

    orina que en el plasma, siendo por ello de gran valor el estudio de la actividad en suero y orina

    para saber

    sobre el curso de la enfermedad.


    FUNDAMENTOS DEL MÉTODO


    Inicialmente, la amilasa se determinaba cuantitativamente según el método

    iodométrico de Wohlgemuth. Posteriormente, Somogyi estandarizó las cantidades de

    almidón e iodo, siendo estas modificaciones las bases de los métodos amiloclásticos

    y iodométricos introducidos posteriormente por Caraway. El método utilizado por

    VALTEK® se basa en la capacidad de la amilasa para desdoblar el almidón. El

    producto de esta hidrólisis está compuesto básicamente por dextrina y maltosa. El

    almidón remanente reacciona con el reactivo de iodo para dar un color azul que se

    lee fotométricamente.
     
    REACTIVOS

     Conservados entre 2° y 8°C en frasco cerrado y



    protegidos de la luz, estables hasta la fecha de caducidad
    indicada en la etiqueta.
    Reactivo 1 Medida

    Almidón soluble 550 mg/l

    Buffer fosfato pH 7.0 100 mmol/l

    Preservantes y estabilizantes c.s.

    Reactivo 2 Medida
    10 mEq/l
    Iodo
    HCl 20 mmol/l
     MUESTRA
     Suero o plasma heparinizado libre de hemólisis, y orina.


    La amilasa es estable por 7 días a temperatura ambiente
    y varios meses a 4°C.
     
     MATERIALES NECESARIOS NO SUMINISTRADOS
     Espectrofotómetro manual o fotocolorímetro de filtros
    con cubeta termoestable, capaz de medir absorbancia a
    600 nm (rango 580-620 nm), baño termoregulado,
    cronómetro, pipetas.
    TÉCNICA
    Referencia Desconocido
    Reactivo 1 (mL) 0.50 0.50
    Preincubar 3 a 5 minutos a 37°C.
    Muestra (mL) ----- 0.010

    Incubar EXACTAMENTE 7 1/2 minutos a 37° C.
    Agua desionizada (mL) 4.00 4.00
    Reactivo 2 (mL) 0.50 0.50

    Mezclar suavemente por inversión y leer a 600 nm (rango 580-620 nm.)

    contra blanco de agua dentro del plazo de una hora.


    CÁLCULOS
    ■  

    ■ Para orinas se recomienda trabajar con muestra de 24


    horas.
    ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES

    ■ Es conveniente analizar junto con las muestras sueros controles


    valorados para este método.
    ■ Utilizar sólo plasma heparinizado puesto que los otros
    anticoagulantes interfieren con la reacción.
    ■ Evitar la contaminación del sustrato con saliva dada la alta
    concentración de amilasa que ella contiene.
    ■ Utilizar material muy limpio para evitar la contaminación de los
    reactivos.
    ■ 1 U/dl corresponde a la cantidad de enzima que es capaz de hidrolizar
    10 mg de almidón en treinta minutos en las condiciones del ensayo.
    RANGOS DE REFERENCIA
    Cada laboratorio debe establecer sus propios rangos de referencia en
    función de la población de pacientes.

    Los rangos de referencia que se enumeran a continuación están tomados de


    la bibliografía existente.

    Suero (U/dl) Orina (U/24h)


    Normal 16-118 <6.000
    Pancreatitis aguda 250-10.000 >20.000
    Pancreatitis cronica <250 >7000

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