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    Exposicion de Forense Inmunoensayos FRIA

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    Alfonso Luis
    Este documento describe la técnica de inmunoensayo por polarización de fluorescencia (FPIA). FPIA mide la rotación de moléculas marcadas con fluorescencia en una solución, donde moléculas más grandes rotan más lentamente que moléculas más pequeñas. Esto permite distinguir entre un antígeno marcado y el mismo antígeno unido a un anticuerpo más grande. FPIA se usa comúnmente para medir drogas terapéuticas, drogas de abuso y hormonas.

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    Exposicion de Forense Inmunoensayos FRIA

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    Alfonso Luis
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    Este documento describe la técnica de inmunoensayo por polarización de fluorescencia (FPIA). FPIA mide la rotación de moléculas marcadas con fluorescencia en una solución, donde moléculas más grandes rotan más lentamente que moléculas más pequeñas. Esto permite distinguir entre un antígeno marcado y el mismo antígeno unido a un anticuerpo más grande. FPIA se usa comúnmente para medir drogas terapéuticas, drogas de abuso y hormonas.

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    Este documento describe la técnica de inmunoensayo por polarización de fluorescencia (FPIA). FPIA mide la rotación de moléculas marcadas con fluorescencia en una solución, donde moléculas más grandes rotan más lentamente que moléculas más pequeñas. Esto permite distinguir entre un antígeno marcado y el mismo antígeno unido a un anticuerpo más grande. FPIA se usa comúnmente para medir drogas terapéuticas, drogas de abuso y hormonas.

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    de 13

    Inmunoensayos por Polarización de

    Fluorescencia– FPIA

    Química forense
    Alfonso Luis Alfaro Rodríguez
    Programa de química
    Universidad del Atlántico

    1
    ¿Que es un inmunoensayo?

    Figura 1. representación de microplacas para un inmunoensayo enzimático.

    2
    Técnica de inmunoensayo
     Posee especificidad y
    afinidad de los
    anticuerpos por sus
    antígenos específicos.
     se usan los anticuerpos
    monoclonales o sueros
    policlonales.
     la
    sensibilidad y especificida Figura 2. técnica de inmunoensayo
    d(cuantificación de
    compuestos presentes en
    líquidos orgánicos)
    3
    Tipos de inmunoensayos
    los inmunoensayos se pueden clasificar atendiendo a
    distintos factores:
     Por la técnica de medición:
     Competitivo y No competitivo
     Por el medio donde se realiza la medición:
     Homogéneo y Heterogéneo
     Por el marcado
     Radioinmunoensayo (RIA).
     Enzimoinmunoanálsis (EIA) o ELISA.
     Fluoroinmunoanálisis:  FPIA.
     Ensayo Inmunoquimioluminiscente:

    4
    Inmunoensayo por Polarización de
    Fluorescencia

    Figura 3. inmunoensayo competitivo por polarización de fluorescencia (FPIA)

    5
    Aplicaciones de la FPIA

    Pueden ser en:


     Droga terapéuticas.
     las drogas de abuso.
     Toxicología y algunas
    hormonas.

    figura 3. uso de drogas de abuso y terapéuticas

    6
    Los conceptos claves en FPIA
    Fluorescencia.
    rotación de moléculas en la solución
    luz polarizada

    7
    Fluorescencia
    Es la propiedad de una sustancia de absorber energía
    lumínica y luego emitir parte de esta energía.
     La fluoresceína : absorción(490nm) y emisión(520nm)
    como luz fluorescente

    Figura 4. detección de fluorescencia en complejos de conjugado de fluoresceína.

    8
    rotación de moléculas en la solución
    Las moléculas más grandes rotan más
    lentamente en la solución que las moléculas
    más pequeñas.
    antígeno-fluoresceína: AgF, que rota
    rápidamente,
    y los complejos Ab-AgF más grandes ,
    que rotan lentamente en la solución.

    9
    luz polarizada
     Esta técnica distingue la marca antígeno-fluoresceína
    (AgF) del antígenofluoresceína (Ab-AgF) unido al
    anticuerpo por sus diferentes propiedades de
    polarización por fluorescencia cuando se expone a luz
    polarizada

    Figura 5. medición de grandes complejos usando fluorescencia, rotación, y luz polarizada en FPIA

    10
    luz polarizada
    Cuando la luz polarizada es absorbida por la molécula más
    pequeña AgF, la AgF tiene la capacidad de rotar su
    posición en la solución rápidamente antes de que la luz
    sea emitida como fluorescencia

    Figura 6. los complejos mas pequeños en FPIA dan como resultado una señal de fluorescencia mas baja.

    11
    Los resultados de FPIA

    Figura 7. FPIA da como resultado una relación inversa de analito.


    12
    ¡Gracias!

    13

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