ANDROLOGIA

JUNIO DE 2019
VÉLEZ - SANTANDER
AULA MOVIL DE BIOTECNOLOGÍA
REPRODUCTIVA
SENA
REGIONAL ANTIOQUIA
 ANDROLOGIA
CONTENIDO
• Evaluación del reproductor
bovino
• Obtención del material
seminal
• Congelación de semen
bovino FOTO
EVALUACION DEL REPRODUCTOR
BOVINO
 EVALUACION DEL REPRODUCTOR
BOVINO
FOTO

• Valoración fenotípicas de la
raza
• Examen Físico
FOTO
• Circunferencia Escrotal
• Evaluación Sanitaria
• Habilidad de monta
FOTO
 VALORACION FENOTIPICA
• Determinada según las
características de la explotación:
1. Carne
2. Leche
3. Doble propósito

• El seleccionamiento de las
características que ayuden al
mejoramiento genético de la
producción
 VALORACION FENOTIPICA

Carne
• Porte grande, cabeza ancha, perfil recto.
• Constitución robusta
• Cuello corto y grueso con papada desarrollada.
• Giba es arriñonada mediana bien implantada, dirigida
hacia atrás apoyándose en el dorso.
• Las costillas son arqueadas, el vientre voluminoso
denotando una gran capacidad corporal.
• El tronco es cilíndrico con caderas amplias y musculosas,
ancas ligeramente inclinadas.
• El prepucio, ombligo pronunciados
• El patrón de peso establecido para el animal macho
adulto es de 800 a 1300 Kg.
 VALORACION FENOTIPICA
Leche

• Formas angulosas
• Constitución firme y fina, con buena composición ósea
• Frente ancha, cara corta
• Amplia capacidad torácica
• Borla y mucosidades oscuras, lo que le confiere una alta
adaptabilidad a climas cálidos.
• Caderas descarnadas y anchas
• Hueso fino y excelentes patas.
• Descarnada de pezuñas
• Los machos tienen un peso promedio de 800 a 1000 Kg
 EXAMEN FISICO
• Condición corporal FOTO

• Órganos de los sentidos

• Sistema Locomotor
• Genitales Externos FOTO

• Genitales Internos
• Defectos
FOTO
 CONDICION CORPORAL
• Carne: 1 a 9
• Leche: 1 a 5
• Los animales que reciben dietas balanceadas van a ser
más precoces que individuos que se consideran
subalimentados.
• El peso corporal ayuda a predecir la edad de pubertad
en razas cebuínas.
• Dietas altamente energéticas, generan mayor
deposición de grasa y aumentan su circunferencia,
aunque su tono es deficiente, lo que indica que no va a
tener una muy buena calidad seminal; ya que la
tonicidad, la calidad seminal y la producción espermática
están estrechamente relacionadas. (Cook et al, 1994;
Coulter, 1997)
 CIRCUNFERENCIA ESCROTAL
• Indicador utilizado para determinar el tamaño
testicular de los toros.
• Está directamente relacionado con el
potencial de producción de espermatozoides.
• El tamaño de los testículos se correlaciona
positivamente con la producción espermática
e influye en la maduración sexual más
temprana de sus hijos (machos y hembras)
lo que determina que sea el factor de mayor
importancia en evaluación y selección de
reproductores.
 CIRCUNFERENCIA ESCROTAL
• Es un factor altamente heredable.
• Toros por debajo del mínimo recomendado de
CE para la raza al año, deben ser descartados
• Se realiza con una cinta métrica escrotal
conocida como orquidómetro
• Se toma rodeando el cuello del escroto con una
mano y usando los dedos para empujar los
testículos dorsalmente hacia caudal eliminando
los pliegues de la piel del escroto.
• La cinta se debe ubicar en la región de mayor
diámetro y la medida se toma en centímetros
(Pedersen 1997, Vélez JS 1992)
CIRCUNFERENCIA ESCROTAL
 CIRCUNFERENCIA ESCROTAL

• La circunferencia escrotal (CE) aumenta

progresivamente con la edad de los
toros jóvenes, siendo indicador de
pubertad y de madurez sexual y tiene
relación positiva con el crecimiento del
toro y en algunos casos con ganancias
de peso
(Randel 1993, Botero 1999, Torres 2002).
IRAC,2000
GENITALES INTERNOS
 EVALUACION SANITARIA
Enfermedades reproductivas
• Brucelosis
• Leptospirosis
• Prepucio y Pene
• IBR
• Trichomonas sp.
• Campylobacter sp.
• Semen
• Diarrea Viral
• Leucosis
 OBTENCION DE MATERIAL
SEMINAL Y EVALUACION DE
SEMEN
SEPTIEMBRE DE 2019
 OBTENCION DE MATERIAL SEMINAL

• Colecta de semen por

Vagina artificial

• Colecta de semen por

Electroeyaculador

• Evaluación de calidad
seminal
 VAGINA ARTIFICIAL

• Grupo de colecta:
– Encargado del toro
– Encargado del
señuelo
– Colector

• Área de colecta
• Manejo del toro
• Estimulación y falsas
montas
• Preparación de la vagina
• Manejo del eyaculado
 VAGINA ARTIFICIAL

• Cilindro con un aislante térmico que permite la

introducción de agua a mas o menos 41 a 42ºC, y que
simule la vagina de la hembra, para permitir la colecta del
eyaculado de manera higiénica y protegida. (Liège,
2003).

• Una vagina artificial de 6.5 X 40cm, a la cual se le adapta

una bolsa plástica estéril para la recolección del semen.

• La temperatura adecuada para la especie es de 40 ºC,

aunque es igualmente importante la presión, vale aclarar
que debe evitarse cualquier tipo de contacto del
eyaculado con el agua (espermicida).

• Debe realizarse bajo condiciones higiénicas.

 VAGINA ARTIFICIAL

• Para la estimulación del animal se requiere de la

presencia de una hembra en celo o si el animal está
acostumbrado el uso de un fantoma.

• Una vez el animal intenta montar a la hembra y la

abraza, se toma del prepucio y se introduce el pene
dentro de la vagina.

• Todo el tiempo el operador acompaña el pene hasta que

el animal haga el “golpe de riñón”.

• La muestra debe ser protegida del la luz y cambios de

temperatura y debe ser inmediatamente analizada
(Barth, 1997).
 ELECTROEYACULADOR
• Es la técnica de colecta más utilizada
en ovinos y bovinos.
• Consiste en provocar la emisión de
esperma por medio de la excitación
eléctrica de los nervios encargados de
la erección y eyaculación.
• Permite extraer semen a toros sin
previo acostumbramiento. Importante
para la evaluación de los toros a
campo.
• Existen diferencias en el modo de
operar y en cómo los toros responden
a los distintos tipos de
electroeyaculadores.
 ELECTROEYACULADOR
• Terminales réctales de un buen
diámetro producen una respuesta
mayor . Este tipo de terminales
producen una apropiada protrusión del
pene y electroeyaculación con una
mínima estimulación de otros
músculos.
• Se realiza por medio de un electrodo
bipolar que se introduce rectalmente.
Los impulsos eléctricos son de 0.3A
en intervalos de tiempo de mas o
menos 1.5 segundos, en un periodo
total de 5 a 10 minutos
aproximadamente, dependiendo del
animal. (Liège, 2003).
 ELECTROEYACULADOR

• Destacar que la cantidad de estimulación debe ser

estimada a través de la respuesta del toro y no
prestando atención al voltaje del aparato.
• Es importante estimular la micción antes de colectarlos,
para que durante el estímulo eléctrico no orinen.
• Una vez colectado debe mantenerse a 37 ºC y protegido
de la luz. (Terry et al., 1996).
 ELECTROEYACULADOR
Factores que afectan la Colección de Semen
• Técnica de Electroeyaculación
• Presencia de aire/ materia fecal
• Falta de previa estimulación manual
• Efectividad del equipo de Electroeyaculación
• Un buen contacto de las terminales
• Carga del electroeyaculador
• Respuesta individual de los toros al estímulo
• Toros asustados o de mal carácter
• Inadecuada estimulación
• Animales tranquilizados
• Toros que han eyaculado varias veces en las últimas 24
horas
 EVALUACION CALIDAD SEMINAL
Características generales del semen
Bovino

• Volumen: 3 a 15 ml
• Concentración:500 a 1500
millones/ml
• Color: Marfil opaco
• MIP: Mas de 50% de los spz con
movimiento progresivo
• Morfología: Mas de 80% de spz con
morfología normal
 CONCENTRACION
• CAMARA DE NEUBAUER
• Medición con semen diluido 1:200, se hace
conteo manual del numero de spz en las
cámaras.
• El resultado es numero de spz por ml.

• CLASIFICACIÓN
• Muy buena (VG) : Cremosa con 750 a mil
millones de spz por ml.
• Buena (G): Lechosa con 400 a 750 millones
de spz por ml.
• Aceptable (F): Leche aguada con 250 a 400
millones de spz por ml.
• Pobre (P) : semen traslucido con menos de
250 millones de spz por ml. FOTO
(A.D Barth)
 MOTILIDAD
• Es una estimación subjetiva
• Parámetros
 Porcentaje de spz en movimiento
 Porcentaje de spz con motilidad
progresiva.
 Velocidad espermática
 Longevidad de la motilidad
espermática
 Los patrones de motilidad se
correlacionan con infertilidad o
subfertilidad en machos
(Hafez,1996)
 MOTILIDAD MASAL

• Se usa semen fresco sobre una lamina,

sin laminilla.
• Clasificación
Muy buena: Movimiento de ola rápido
Bueno : Movimiento de ola lento
Regular: Oscilación generalizada
Pobre: Oscilación esporádica.
(SFT. 1992)
 MOTILIDAD INDIVIDUAL
• Clasificar la población espermática según a su capacidad
de moverse en el plasma seminal.
• Se observan los % de spz con:
• Movimiento progresivo (MP)
• Movimiento en el sitio (MS),
• e Inmóvil (I)
Clasificación
• Muy buena: <70%
• Bueno: 50-69%
• Regular: 30-49%
• Pobre: < 30%
(SFT.1992)
 MORFOLOGIA
• AN Primarias
Subdesarrollados Contorno anormal
Formas dobles Cabezas sueltas AN
Defectos acrosomales Cabezas pequeñas AN
Cabezas angostas Gotas proximales
Diadema Flagelo enrollado proximal

• AN Secundarias
Cabezas pequeñas Terminación del flagelo pegado
Cabezas anchas Membrana acrosomal suelta
Gotas distales Membrana acrosomal suelta
Implantación abaxial Cabezas normales libres
MORFOLOGIA
 CONGELACION DE SEMEN
•Su propósito es garantizar la
supervivencia del material genético.
FOTO

•Previene la difusión de enfermedades

venéreas

•Disemina efectivamente el material

FOTO
genético deseable

•Maximiza el número de
inseminaciones artificiales que pueden
ser llevadas a cabo con un único FOTO
eyaculado de un toro aprobado.
 CONGELACION DE SEMEN

Procesado De La Muestra

• Mantener el semen a temperatura 35ºC

• Evaluar el semen
• Realizar la dilución 1:1
• Mantenerlo en baño María a 35 ºC.
• Evaluación de la concentración.
• Cálculos para la dilución final.
• Colocar el diluyente calculado en un recipiente seco y
estéril.
 CONGELACION DE SEMEN
Procesado De La Muestra
• Colocar el semen taponado sobre
el diluyente y no homogeneizar.
• Dejar 10 min. a temperatura de
laboratorio (24ºC)
• Homogeneizar suavemente y
envasar en pajillas a temperatura
ambiente.
• Curva de enfriamiento 24ºC a 4ºC
durante 1 hora y media
• Equilibrar en 4 Cº por un mínimo
de 5 hrs.
• Vapores de nitrógeno
• Almacenamiento
 CONGELACION DE SEMEN
Conteo Cámara de Neubauer
• Se toma una muestra del semen de 0.05
ml en 10 ml de agua destilada.
• Se homogeniza el semen con el agua
• Con un capilar deposite una gota en la
cámara (entre la cámara y el cubre
objetos).
• Se observa con microscopio de contraste
de fase con objetivo de 400X.
• Se cuentan los espermatozoides que se
encuentran dentro de los 5 cuadrados
señalados
• Se hace el conteo de las dos cámaras y se
saca el promedio.
• El valor total se da de la siguiente
ecuación
# de spz. x 5x 200 x 10-4= Conc. Final
 CONGELACION DE SEMEN
Cálculos Dilución Final
VS (vol. semen) x CS (conc. semen) = DF (dilución final) x CF (conc.
Final)
Ejemplo:
Vol: 5 ml
Concentración: 1700 millones spz/ml
Concentración de las pajillas: 30 millones de spz
VS (ml) X CE1 (spz/ml) = DF (ml) x CF (spz/ml)
5 x 1700 millones = DF x 60 millones
DF = 8500 millones/ 60 millones = 141.6 ml = volumen total diluido
(VTD)
VTD – eyaculado = volumen de diluyente a agregar
141.6 ml – 5 ml =131.6 ml.
Diluyente A= Diluyente B
• 131.6 / 2 = 65,8 de Diluyente B
• Diluyente A = 65,8 – 5 ml= 60,8 de Diluyente A
 CONGELACION DE SEMEN
Marcaje de pajillas
Consiste en identificar las pajillas que se van a procesar
Se puede realizar manual o mecánicamente (minitub easy coder ®)
Descripción:
HO RUDOLF ATILA REG No 1674
CGR 009 COL 23-06-04 LOTE 01 HOLSTEIN
CGR Tel 091-852-2628 e-mail [email protected]

HO: corresponde a la sigla internacional de la raza Holstein

RUDOLF ATILA: El nombre del toro
REG: Corresponde al numero del registro
CGR009: corresponde al código del toro en la Central de congelación
COL: El país de ubicación de la central
06-06-04: día/mes/año de congelación
LOTE01: Corresponde al lote de congelación de la pajilla
HOLSTEIN: El nombre de la raza del toro
CGR Tel 8522628 Corresponde a los datos de la central
 CONGELACION DE SEMEN
Envasado de pajillas
Manual.
• Poner la pajilla sobre una punta amarilla para acoplar a
una jeringa de insulina.
• Sumergir las pajillas en una cuba con semen
• Aspirar 0.8 ml para dejar un espacio considerable de
aire hasta que toque el algodón
• O vaciar la punta de la pajilla con una punta para que el
sobrante vuelva a la cuba con el semen
• Secar bien la punta de las pajillas
• Sellarlas
• Secar nuevamente las pajillas
• Poner las pajillas en una bolsa de nylon y sellarla bien.
• Colocar la bolsa de nylon con las pajillas en un
recipiente a temperatura ambiente.
• Y hacer el descenso crioscopico correspondiente
 CONGELACION DE SEMEN
Sellado de pajillas
• Manual
1. Con polvo alcohol polivinílico:
• Secar las pajillas
• Tomarlas del extremo del algodón y sellarlas sobre el recipiente de
polvo
• Secar nuevamente las pajillas para remover sobrantes de polvo
Verificar que hallan quedado selladas perfectamente
Colocar el extremo de las pajillas selladas con polvo polivinílico en un
recipiente con agua a temperatura de laboratorio
2. Con esfera:
• Colocar un esfera en el extremo libre haciendo la presión suficiente
para que queden bien selladas
• Dejando un espacio de aire considerable.
3.Con calor:
Colocar sobre la plancha térmica solo la punta de la pajilla
Mantener la punta por 10 seg, evitando que el calor haga
contacto directo con el material seminal
Mantener el espacio de aire
 CONGELACION DE SEMEN
Envasado y sellado de pajillas
Mecánico.
A diferencia del proceso anterior el proceso de
empaque y sellado se realiza por un sistema de
vacío automático y sellado por ultrasonido.
Se realiza con una maquina MRS1 de IVM®.
El proceso posterior y descenso crioscopico debe ser
realizado de igual forma que el método manual
 CONGELACION DE SEMEN

Vapores de nitrógeno
• Todo el proceso desde ahora hasta el congelado de las pajillas debe
ser hecho a 4 grados.
• Colocar en un recipiente de icopor nitrógeno líquido de manera que la
altura a la que deben quedar las pajillas en el catre de congelado sea
de (Aproximadamente a 4 cm)
• Controlar con la termocupla.
• Realizar una evaluación previa al congelado.
 CONGELACION DE SEMEN

Vapores de nitrógeno
• Colocarlas en la rejilla portapajillas.
• Llevarla a la cuba de congelado durante 10 min.
• La temperatura de congelado se debe mantener entre -70 y -110
• Después de los 10 min. volcar las pajillas en nitrógeno líquido
• Almacenar las pajillas en Goblets con el algodón hacia abajo.
• Guardarlas en un termo
• Evaluar definitivamente a las 48 h.
 CONGELACION DE SEMEN
Curva de frío o descenso crioscopico

Semen dilución 1:1 (35 ºC)

Semen dilución final (24ºC) por 10 min.

(20ºC a 4ºC) lentamente durante 1 hora y ½

(4ºC) por mínimo 5 horas

Vapores de nitrógeno (4ºC hasta -110ºC) por 10 min

(-129ºC) nitrógeno liquido

EVALUACION POST CONGELADO
•A las 48 horas después de congelar el semen, se retiran dos
pajillas por lote para evaluar.
•Se descongela las pajilla en agua a 37ºC durante 1 min, se seca
la pajilla
•Se coloca el semen dentro de un recipiente de 1cc.
•Se mantiene la muestra a la temperatura adecuada (35ºC).
•Se evalúa su motilidad individual progresiva con la laminilla
•Se evalúa igualmente la morfología
•El movimiento progresivo se debe evaluar inmediatamente
después del descongelado y luego de 2 horas de incubación a 37
ºC.
•El mínimo aceptable de motilidad es de 25 % de células mótiles
un 15 % de células mótiles luego de 2 h. de incubación a 37 ºC.
•Para la morfología el mínimo aceptable es 70 % de los
espermatozoides normales.
EVALUACION POST CONGELADO
MINIMO ACEPTABLE
Motilidad progresiva:
0 h = 25 % con grado 3 FOTO
2 h = 15 % con grado 2
Acrosoma:
0 h = 60 % intactos
2 h = 40 % intactos
70 % normales
no más del 15-20 % de defectos de
cabeza
no más del 25 % de defectos de
acrosoma y cola
En número ideal es alrededor de 10
millones de células viables por dosis