FACULTAD DE MEDICINA,

ENFERMERIA, NUTRICIÓN Y
TECNOLOGÍA MÉDICA

FIJACIÓN
JEFA DE INTERNADO: LIC. VERONICA FRANCIA
INTERNA: JESSICA CORTEZ ARANDA
FIJACION
 Es la fase de la técnica histológica cuya finalidad es conservar la morfología y la
composición química de los componentes del tejido de modo que su observación
corresponda a lo que existía cuando los tejidos formaban parte del ser vivo.
Objetivos de la fijación
 Evitar la autolisis (muerte celular)
 Evitar la putrefacción (descomposición del tejido)
 Inmovilizar la célula
 Conservar exactamente todas las partes constitutivas.
 No hacer aparecer artificialmente otros detalles en la estructura.
Principios generales de la fijación
 No existe un método universal de fijación
 No todos los fijadores conservan indefinidamente los tejidos
 Un defecto de la fijación jamás puede ser corregido
 Es imposible realizar un estudio histológico sobre un material con defectos de fijación
 Intervalo de tiempo.- Entre la colecta del material y la fijación debe ser lo más pronto
posible para evitar los procesos autolíticos o procesos post morten.
 Volumen de liquido fijador.- Debe ser como mínimo 10 veces más el volumen de la pieza,
otros indican que debe ser 20 veces más que el vol. De la pieza y algunos indican inclusive
50 veces más que el volumen de la pieza.
 Espesor de la pieza.- Debe ser de 2 – 6 mm. Como mínimo por que siendo de mayor espesor
la penetración del fijador es tardía cuanto más delgada más rápida será la fijación.
 Tipo de fijador.- Esta en relación directa con las coloraciones que se van a practicar con la
urgencia del examen con el fijador previamente usado y en algunos casos con la toma de
fotografías.
Característica de un fijador ideal

 Tiene que ser económico

 Deberá ser incoloro e inodoro (sin olor)
 Deberá ser de amplio espectro
 Deberá fijar en un tiempo muy corto
 No toxico
 Poderes de la fijación
 Poder de penetración.- Característica que le permite al fijador
alcanzar la profundidad de los tejidos esta se realiza en forma gradual
empezando en la periferia y terminando en la parte central.
 Poder de conservación o coagulación.- Característica que le permite
al fijador conservar a los tejidos y células por tiempos prologados
mediante el mecanismo de la coagulación de las proteínas celulares.
 Poder de insolubilidad.- Le permite evitar que los tejidos sufran los
efectos de la solubilidad causada principalmente por el manipuleo.
 Poder mordiente.- Facilitando la adaptación de los colorantes y
simultáneamente fijando los tejidos.
 Poder de Inclusión.- Facilita el manipuleo debido al endurecimiento
para la inclusión en parafina.
 Poder bactericida.- Evitar la proliferación bacteriana o sea destruir
bacterias y gérmenes que pudieran encontrarse en ellos.
Clasificación de los fijadores

• Fijadores Físicos
• Fijadores Químicos
 Agentes físicos
 Desecación: Se lo utiliza en extendidos de sangre, líquidos de punción.
Si se efectúa rápidamente detiene los procesos de post – mortem y
permite el empleo posterior de fijadores químicos o calor seco para
completar la fijación.
 Calor seco: Es utilizado a menudo en bacteriología sobre extendidos
desecados, poco empleado en histología.
 Frío: No es un verdadero fijador, pero detiene los procesos vitales y los
cadavéricos de necrosis y autolisis, pero en cuanto deja de actuar, se
reanudan las actividades vitales si la célula no ha muerto, o se
desarrollan los procesos de post – mortem.
 Congelación: La congelación de los tejidos frescos parece ser a priori,
un detestable procedimiento histológico. El aumento de volumen de los
líquidos que los llenan y la formación de agujas de cristales no puede
evitar la producción de verdaderos deterioros. Su única ventaja es la de
no precipitar los albuminoides y de no alterarlos.
Agentes químicos

 Los más usados en patología

 FORMOL, FORMALDEHÍDO, O
 FORMALINA
Es el líquido más usado en histotecnia y se le considera como el
fijador universal. Se emplea al 10% y el tiempo de fijación es de 24-
48 horas. Debe lavarse rápidamente en agua y luego pasar la pieza a
los alcoholes.
 Es excelente para fijar el sistema nervioso y conservar las apetencias
colorantes durante muchos años
 TIEMPO DE FIJACION Depende mucho del tamaño de la muestra,
el volumen utilizado es de 10 a 20 veces más el volumen de la pieza
el tiempo de fijación con formol neutro amortiguado puede variar a
partir de las ocho horas y a acelerar por agitación en menos tiempo.
Para acelerar la fijación también se puede recurrir a calentar el formol
neutro amortiguado mediante unos minutos hasta que cambie de color
y se note que el tejido ha endurecido por efecto de la penetración.
FORMOL, FORMALDEHIDO
 Solución salina formolada al 19%.-
 AGUA DESTILADA............................................900 mL.
 CLORURO DE SODIO.........................................8,5 g
 FORMALDEHIDO O FORMALINA.................100 mL.
 Solución de formol amortiguado (tamponado) al 10%
 AGUA DESTILADA.....................................................900 mL.
 FOSFATO DE SODIO MONOBÁSICO (Na H2 PO3)......3,5 g.
 FOSFATO DE SODIO DIBÁSICO (Na2 H PO3).............6.5 g.
 FORMOL COMERCIAL AL 40%.................................100 mL.
Esta preparación o esta fórmula son adecuadas para la mayoría de los trabajos habituales,
se lo utiliza de rutina a parte del formol al 10% que es el ideal para trabajos de rutina en
un laboratorio de patología.
 ALCOHOL ETILICO ABSOLUTO

96%.-
Es un fijador coagulante, no aditivo y suele emplearse solo. Penetra
lentamente el tejido produciendo contracción de la muestra y
endureciéndola. Provoca la precipitación de las proteínas.
 La acción más potente corresponde a las soluciones más concentradas
(96º ó 100º). Para fijar fragmentos de 5 mm de espesor es suficiente con
6 horas de acción. Si el tamaño de la muestra es mayor se corre el riesgo
de que las capas superficiales se endurezcan demasiado y éste no pueda
penetrar aún más como para alcanzar las capas más profundas, no es
recomendable prolongar el tiempo de fijación para evitar la contracción
del tejido. Si la pieza ha de permanecer más tiempo en el alcohol, es
preferible pasarla a alcoholes de más baja graduación (80 o 90 grados);
pero antes de colorear e incluir en parafina debe de llevarse nuevamente
al alcohol absoluto
ALCOHOL METILICO
 Es un fijador no aditivo. Y, por tanto, se lo
recomiende para la fijación de ácidos
nucleicos y en la impregnación argéntica
de regiones organizadoras del nucléolo.
Es poco usado, si se exceptúa se emplea
para la fijación del tejido sanguíneo
ÁCIDO PÍCRICO
 Es un reactivo muy penetrante que no se los emplea solo, sino formando parte
de mezclas, como el liquido de Bouin.
 Las soluciones, de color amarillo, no deben calentarse a fuego vivo por sus
propiedades explosivas.
 El tiempo de fijación es de 1-24 horas, según el tamaño de la pieza.
 Después de fijarse se pasan directamente al alcohol de 70 grados.
 El lavado en agua no es recomendable porque el tejido conjuntivo se hincha
demasiado.
 Se usa preferentemente para fijar cartílagos, huesos embrionarios, epitelios y
glándulas
 GLUTARALDEHIDO
 Fijador más usado para microscopía electrónica, por su mayor
capacidad de fijación que la del formaldehido, ya que es una molécula
con dos grupos aldehídos
 Fué introducido por Sabatini en 1963.,también es un buen fijador
estructural para la infiltración en parafina.
 en comercios se encuentra en disolución al 25%. Mecanismo de
actuación es el mismo que el formaldehído y como fijador se emplea
en concentraciones entre el 1 y el 3%.
 La penetración en tejidos es menor que la del formaldehido; por tanto
hay que permitirle más tiempo ara la fijación.
FIJADORES QUÍMICOS
ACIDO ACETICO TETRÓXIDO DE PARAFORMALD BICLORURO DE BICROMATOS
OSMIO EHIDO MERCURIO
Nunca se utiliza en forma Es un fijador aditivo que El formaldehido solo, o una En solución acuosa precipita Los bicromatos alcalinos,
pura por que solo fija núcleo, preserva, preferentemente mezcla que contenga enérgicamente los (potasio, sodio, magnesio,
proteínas por precipitación, proteínas y lípidos. formaldehido y albuminoides, estroncio, zinc) fijan bien los
produce hinchamiento en los Colorea de negro el ácido glutaraldehido, es bueno principalmente los del citoplasmas pero destruyen
tejidos en especial en oleico y las oleínas; El para la inmunolocalización o núcleo. Estas propiedades se los núcleos. Los bicromatos
colágeno este ácido acético tetróxido de osmio no hibridación in situ. Provee al exaltan por la adición de de Bario, Calcio, Cobre,
precipita muchas mucinas está recomendado para tejido de una gran acido acético, que vuelve mas fijan bien las mitosis pero no
con excepción de las que se propósitos generales de estabilidad. Los tejidos penetrante el fijador. los citoplasmas. El mas usado
encuentran en el microscopía de campo fijados en esta mezcla son Provocan buena fijación de de los bicromatos es el de
estómago.Conserva la claro penetrables por anticuerpos y citoplasmas y los Potasio, gruesos cristales de
cromatina. Retrae los tejidos. pruebas de ácidos nucleicos componentes nucleares color rojo anaranjado,
Es más un conservante que con un tratamiento mínimo adoptan una malla poco fácilmente solubles en agua.
un fijador de proteasas. uniforme.
FIJADORES COMPUESTOS
LÍQUIDO FIJADOR DE BOUIN
 Es de uso corriente y reporta grandes ventajas para la fijación de
embriones y cartílagos
 Debe pasarse directamente al alcohol de 70 grados.
 Tiempo de fijación: 1-24 horas, según el tamaño de la pieza, las cuales no
debe ser mayores de 5-6 milímetros de espesor.
 SOL. SATURADA DE ÁCIDO PÍCRICO…...........................75 mL.
 FORMOL CONCENTRADO (37 o 40%)...............................25 mL.
 ÁCIDO ACÉTICO GLACIAL (CH3-COOH)……....................5 mL.
LÍQUIDO FIJADOR DE ZENKER
 Es un excelente fijador para las estructuras celulares.
 Tiempo de fijación: 1-24 horas, según el tamaño de la pieza.
FÓRMULA DEL LÍQUIDO DE ZENKER:
 CLORURO MERCÚRICO..............................................50g
 DICROMATO DE POTASIO K2Cr2O7.........................25 g
 SULFATO DE SODIO..................................................10 g.
 AGUA DESTILADA.................................................1000ml.
FIJADORES COMPUESTOS
FIJADOR DE PICROFORMOL FIJACION EN LIQUIDO FIJADOR SOLUCIÓN AL 10% MAS
ALCOHÓLICO DE BRASIL CLORURO MERCURICO
ALCOHOL FLEMMING
FORMALDEHIDO DEL 37 AL LIQUIDO FIJADOR DE CARNOY • ÁCIDO CRÓMICO AL 1% EN • CLORURO
40%...................1000 mL. • ALCOHOL ETÍLICO AGUA DESTILADA...............15 MERCÚRICO................30 g.
ABSOLUTO............60 mL. mL. • AGUA DESTILADA...............900
ÁCIDO PÍCRICO.......................80 g. • CLOROFORMO.....30 mL. • TETRAÓXIDO DE OSMIO AL mL.
• ACIDO ACÉTICO 2% EN AGUA • FORMOL AL 37 O 40%..................
ALCOHOL GLACIAL...............10 mL. DESTILADA...............4 mL. .100 mL.
ETÍLICO.....................6000 mL. LIQUIDO FIJADOR DE GENDRE • ÁCIDO ACÉTICO
• ALCOHOL ETÍLICO AL GLACIAL..................1 mL.
ÁCIDO TRICLORO 59%.......................80 mL.
ACÉTICO......................65 g. • ÁCIDO PÍCRICO SATURADO
EN ALCOHOL AL
95%.................80 mL.
• FORMALDEHIDO 37 AL
40%......................15 mL.
• ÁCIDO ACÉTICO
GLACIAL................5 mL.