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    VIH

    Cargado por

    Jacson Segales
    Este documento describe los métodos de diagnóstico de la infección por VIH. Para adultos y niños mayores de 18 meses, se requiere una prueba confirmatoria positiva o cumplir con los criterios de SIDA. En niños menores de 18 meses, dos pruebas positivas o detección de ácido nucleico/aislamiento viral son necesarios. Las pruebas de laboratorio incluyen métodos directos como PCR y métodos indirectos como ELISA y pruebas confirmatorias como Western Blot.

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    VIH

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    Jacson Segales
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    Este documento describe los métodos de diagnóstico de la infección por VIH. Para adultos y niños mayores de 18 meses, se requiere una prueba confirmatoria positiva o cumplir con los criterios de SIDA. En niños menores de 18 meses, dos pruebas positivas o detección de ácido nucleico/aislamiento viral son necesarios. Las pruebas de laboratorio incluyen métodos directos como PCR y métodos indirectos como ELISA y pruebas confirmatorias como Western Blot.

    Descripción original:

    laboratorio clinico

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    Este documento describe los métodos de diagnóstico de la infección por VIH. Para adultos y niños mayores de 18 meses, se requiere una prueba confirmatoria positiva o cumplir con los criterios de SIDA. En niños menores de 18 meses, dos pruebas positivas o detección de ácido nucleico/aislamiento viral son necesarios. Las pruebas de laboratorio incluyen métodos directos como PCR y métodos indirectos como ELISA y pruebas confirmatorias como Western Blot.

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    VIH

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    Jacson Segales
    Este documento describe los métodos de diagnóstico de la infección por VIH. Para adultos y niños mayores de 18 meses, se requiere una prueba confirmatoria positiva o cumplir con los criterios de SIDA. En niños menores de 18 meses, dos pruebas positivas o detección de ácido nucleico/aislamiento viral son necesarios. Las pruebas de laboratorio incluyen métodos directos como PCR y métodos indirectos como ELISA y pruebas confirmatorias como Western Blot.

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    de 44

    PRUEBAS DIAGNÓSTICAS

    PARA VIH
    DEFINICIÓN DE INFECCIÓN
    POR VIH
     ADULTOS Y NIÑOS > 18 MESES:

    Prueba confirmatoria positiva.


    Cumpla con los criterios de caso SIDA.
    DEFINICIÓN DE INFECCIÓN
    POR VIH
    NIÑOS < 18 MESES:

     Prueba positiva para anticuerpos no es definitiva.

    Se considera positivo:


     Tiene resultados positivos en dos momentos diferentes.
     Técnica recomendada: detección de ácido nucleico o aislamiento viral
    Cumple con los criterios de caso SIDA.
    DIAGNÓSTICO DE INFECCIÓN
    POR VIH
     Personas con ITS.
     Personas con pareja que muestran comportamiento de riesgo.
     Trabajadores sexuales.
     Farmacodependientes.
     Pacientes multitransfundidos.
    Compañeros sexuales de seropositivos.
     Hijos de madre VIH positivas.
     Pacientes con síntomas sugerentes.
     Donantes de sangre o de órganos o tejidos.
    PRUEBAS DE LABORATORIO

    Métodos Directos:
     Evidencian/cuantifican la
    presencia de antígenos en
    la muestra.
    ◦ PCR cualitativa,
    ◦ PCR cuantificada
    ◦ Cultivo y aislamiento viral,
    ◦ Antigenemia P-24.
    PRUEBAS DE LABORATORIO

    Métodos Indirectos:

    ◦ Evidencian la presencia o
    ausencia de anticuerpos
    totales en la muestra.

    ◦ Son los más utilizados.


    Pruebas laboratoriales

     Screening (tamizaje):
     Prueba rápida
     ELISA
     Confirmatorio:
     Western Blot
     IFI
     Pruebas complementarias
     Recuento de Linfocitos CD4/CD8
     Carga viral
     PCR
    1. MÉTODOS INDIRECTOS

    a. Pruebas de screening serológicas


    • Aglutinación
    • Dot blot
    • Inmunocromatografía
    Pruebas rápidas disponibles en el mercado

    Multispot
    HIV-1/HIV-2

    Uni-Gold
    Recombigen

    OraQuick
    Advance

    Reveal
    G2
    1. MÉTODOS INDIRECTOS

    a. Pruebas de screening serológicas

    I. Técnicas inmunoenzimáticas (EIA)


    • EIA indirecto con antígeno obtenido de lisado vírico (primera generación)
    • EIA indirecto o competitivo con antígeno obtenido de proteínas recombinantes y/o
    péptidos sintéticos (segunda generación)
    • EIA de tipo sándwich o de inmunocaptura, con antígeno obtenido de proteínas
    recombinantes y/o péptidos sintéticos y detección conjunta de anticuerpos
    específicos de clase IgG, IgM e IgA (tercera generación)
    • Detección combinada de anticuerpos específicos y antígeno de VIH (cuarta
    generación)
     PRUEBAS DE ELISA:
    Primera Generación: Los antígenos
    utilizados provienen del lisado viral de
    un cultivo
    Segunda Generación: Los antígenos
    corresponden a proteínas
    recombinantes o Péptidos sintéticos.
    Tercera Generación: Péptidos
    recombinantes sintéticos de VIH-1, 2, 0.
    Cuarta Generación: Se adicionó el p24.
    b. Pruebas confirmatorias

    I. Western blot
    II. Inmunofluorescencia indirecta (IFI)
    III. Radioinmunoprecipitación (RIPA)
    IV. Inmunoensayo lineal (LIA)
    Pruebas de Detección
    ELISA: Detección de Anticuerpos (resultado en horas)

     PRUEBAS RAPIDAS: Resultado en minutos

    Nos dan RESULTADOS PRELIMINARES, requieren prueba


    confirmatorias
    Morfología
    y Estructura del HIV
    Conceptos Básicos Envelope
     Familia: Retroviridae

     Género: Lentivirus

     Forma esférica

     ≈110nm

     RNA Capsíde
    viral

    TR integrase
    e protease
    HIV1
    ciclo de vida del HIV
    Western Blot
    Prueba de confirmación
    Principio: Ensayo
    inmunoenzimático
    Detecta anticuerpos contra
    proteínas específicas del VIH 1
    Interpretación: visual
    Muestras: suero y plasma
    Volumen: 20 µl
    Tiempo: 3.5 hrs
    Sensibilidad: 100%
    Especificidad: 100%
     Nomenclatura de las bandas en Western Blot

    Gen Proteína Denominación CDC OMS


    env Precursora de la gp160 gp160 Al menos 2
    envoltura bandas
    Glucoproteína externa gp120 gp120
    Glucoproteíina gp41
    transmembrana

    gag Precursora del core p55


    Precursora del core p40
    Proteína principal p24 p24
    Proteína de la matriz p17

    pol Transcriptasa inversa p66


    Transcriptasa inversa p51
    Endonucleasa p32
    WESTERN BLOT

    Antígeno

    E Anticorpo
    1ario
    E
    Conjugado

    Legenda
    Esquema
    WESTERN BLOT
    WESTERN BLOT
    Incubacion con la muestra
    WESTERN BLOT
    Substrato - revelación
    Criterios de interpretación del Western blot para infección
    por el VIH, según algunos organismos internacionales
    INMUNOFLUORESCENCIA
    INDIRECTA
     Usa material humano de Células T infectadas que
    expresan antígenos de VIH-1.
     Las células se fijan a la superficie de una laminilla de
    vidrio, se utilizan células no infectadas como control.
     Cuando los anticuerpos del VIH están presentes en suero
    o plasma se unen a las células infectadas pero no a las
    células no infectadas.
    Inmunofluorescencia indirecta

    Antígeno tisular
    Inmunofluorescencia indirecta

    suero de paciente(IgG)
    Inmunofluorescencia indirecta

    + anti-IgG humana con


    marca fluorescente
    Inmunofluorescencia indirecta

    Microscopio
    de luz UV
    Fluorocromo: molécula química q absorbe luz a una longitud de onda
    (energía) y emite a una longitud superior (menor energía)

    Fluoroforos mas comunes: Isotiocianato de Fluoresceína.


    Rodamina

    HO O O

    O
    C
    OH

    R2

    R1
     La inmunofluorescencia indirecta se ha utilizado
    ampliamente como prueba confirmatoria para la infección
    por el VIH-1 y lo siguen haciendo laboratorios con amplia
    experiencia con la prueba.

     Su desempeño es bueno pero requiere de personal


    debidamente entrenado para su lectura y de microscopio de
    fluorescencia
    LIA: inmunoensayo lineal
     Incorporan en un soporte plano ,equivalente a
    la tira de nitrocelulosa , varias proteínas
    recombinantes o péptidos sintéticos
    correspondientes a diferentes proteínas del
    VIH-1 y en algunos casos del VIH-2

     Su sensibilidad es similar al WB y presenta


    menos reacciones cruzadas.
    LIA: inmunoensayo lineal
     Estas pruebas que son sensibles y especificas pueden
    considerarse como pruebas confirmatorias y en algunos
    sitios reemplazan al WB.
    Causas de resultado falso-
    positivo:
    Relativas al suero:
     Relativo a la calidad y manipulación de la muestra:
     Calidad, extracción, almacenamiento y contaminación de la misma,
    estabilidad y calidad de los reactivos.

    Relativas a la presencia de auto anticuerpos:


     Presencia de enfermedades autoinmunes (AR, LES).
    Relativas a otras condiciones:
     Vacunaciones, Enf. Virales, I Renal, Cirrosis, Enfermedades
    hemato -oncológicas, alcoholismo, embarazo, etc.
    Causas de resultado falso-
    negativo:
     Periodo de ventana
     Pobre respuesta inmune
     Tratamiento con inmunosupresores
     Procesos malignos
     Trasplante de médula ósea
     Pérdida de estabilidad de los reactivos
    Selección de pruebas rápidas de
    VIH apropiadas

    Es necesario tomar en cuenta tres factores:


    ◦ El objetivo de hacer la prueba.
    ◦ Sensibilidad y especificidad de la prueba.
    ◦ Prevalencia de la infección de VIH en la población que será
    tamizada con las pruebas.
    Elección de Pruebas rápidas de VIH

    Los tres objetivos para hacer un tamizaje de anticuerpos


    contra VIH son:

    ◦ Tamizaje de donadores de sangre u órganos.


    ◦ Para fines epidemiológicos
    ◦ Diagnóstico de personas infectadas.
    Sensibilidad y especificidad de la
    prueba
     Estos dos factores son críticos para diferenciar entre una
    persona infectada y una que no está infectada.
     Pruebas altamente sensibles disminuyen la posibilidad de
    obtener resultados falsos negativo.
     Las pruebas altamente específicas disminuyen la posibilidad de
    tener resultados falsos positivo.
     La mejor elección dependerá del objetivo de hacer la pruebas.
     Los estándares mínimos son: Sensibilidad >99%y especificidad
    >95% preferiblemente validadas en nuestra población.
     Detección de anticuerpos
    contra el VIH
    Pruebas de Pruebas de
    Confirmación
    Tamizaje

    Sensibilidad Especificidad

    Falsos negativos es bajo Falsos positivos es bajo


    Algoritmo de diagnóstico por laboratorio para
    la infección por el VIH
    GRACIAS

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