Ruptura Celular

RUPTURA CELULAR
PRESENTAN:
• FLORES SOBERANES CELESTE
• GONZALEZ JARDINEZ STEPHANY MONTSERRAT
INGENIERÍA DE LAS FERMENTACIONES
GRUPO: 8IBT1
INTRODUCCIÓN
• El rompimiento celular es una operación unitaria de gran
importancia industrial. Algunos de los productos biotecnológicos
producidos a escala industrial son extracelulares y no requieren
ser extraídos de la célula. Cuando el producto de interés es
intracelular una vez realizada la cosecha de células una operación
necesaria para la liberación del producto es el rompimiento de la
célula misma.
Tabla 1 Productos que requieren de ruptura celular
Tipo de producto Ejemplo
Proteínas recombinantes Insulina, HC, Proteína A, Proteína G
Enzimas Glucocinasa, Invertasa
Vacunas Tétanos, Meningitis
Otros DNA, Mitocondrias, Esporas,

Toxinas
La técnica de rompimiento celular seleccionada determine el tamaño de los

desechos resultantes y la influencia que estos tendrán en las operaciones
que se utilicen para su separación. Así mismo, la técnica es función del tipo
de microorganismo que contiene el producto de interés , particularmente en
relación a su estructura externa.
MÉTODOS DE ROMPIMIENTO CELULAR
• Una gran variedad de técnicas de rompimiento celular son usadas

en el laboratorio, pero solo algunas a escala industrial. Los métodos
de rompimiento celular pueden ser divididos en métodos químicos y
métodos mecánicos. Dentro de los químicos se encuentra: El choque
osmótico, la dilución lipídica, la digestión enzimática y el
tratamiento alcalino. Dentro de los mecánicos se encuentras la
agitación con abrasivos y la homogeneización.
Métodos químicos
CHOQUE OSMÓTICO
• El rompimiento de células por medio del choque osmótico se fundamenta en el
conocimiento de la osmosis
• El rompimiento celular por choque osmótico consiste en la carga de un
volumen dado de células dentro de agua pura (con frecuencia se utiliza el
doble del volumen de las células por volumen de agua).
• La célula se expande debido a que contiene solutos que ocasionan un flujo
osmótico del agua hacia su interior, esta expansión puede conducir a su lisis o
rompimiento.
• Se puede calcular la presión necesaria para romper células a partir de la ley
van´t Hoof. La cual se deduce desde la condición de equilibrio :
ΔP = - R*T*c1
Donde:
• c1 : Concentración de solutos en el interior de la célula.
• En el caso de una célula que contiene una concentración de solutos del orden
de 0.2 M, calculando la diferencia de presión alcanzaravalores del orden de
-5 atm (dentro mayor presión que afuera).
Métodos químicos
DISOLUCIÓN LIPÍDICA
• Esta técnica es relativamente simple. Se añade a la suspensión

celular un volumen de tolueno aproximadamente igual al 10% de
la biomasa. El tolueno es absorbido dentro de los lípidos de la
pares celular, lo que produce la expansión de la pared la ruptura
de esta. El contenido celular es liberado y entonces puede ser
separado el producto de interés.
Métodos químicos
DIGESTIÓN ENZIMÁTICA
• Consisteen el empleo de enzimas que atacan la pared y provocan el
rompimiento celular.
• Una de las enzimas as utilizada en la digestión enzimática de bacterias es la
lisozima. Esta enzima rompe el enlace β 1-4 entre el acido N-acetilmurámico
y a la N- glucosamina de la capa de peptidoglucano de la pared celular,
provocando el rompimiento de la pared y consecuentemente la ruptura de la
célula.
• El alto costo de las enzimas no permite que esta técnica sea usada
ampliamente en el rompimiento celular a nivel industrial a pesar de sr
altamente selectiva.
MÉTODOS MECÁNICOS
• En el rompimiento de las células a gran escala se han preferido los métodos

mecánicos. Las técnicas empleadas son: La molienda húmeda en molinos de
perla agitados a alta velocidad y la homogeneización a alta presión.
MÉTODOS DE PERMEABILIZACIÓN
• Estos métodos consisten en alterar la estructura de la pared y la

membrana celular para facilitar la difusión del producto hacia el
exterior de la célula.
• Debido a los problemas asociados con la purificación de
productos obtenidos por rompimiento celular, existe un gran interés
en el empleo de estos métodos alternativos a la ruptura mecánica
empleada a nivel industrial.
Figura 1. Comparación grafica de rompimiento celular y
permeabilización celular
EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR
La operación de rompimiento celular a nivel industrial actualmente

se realiza en tres tipos de equipos de rompimiento mecánico:
• Molinos de Perlas de alta velocidad.
• Homogeneizadores de alta presión
• Microfluidizadores
MOLINO DE PERLAS DE ALTA PRESIÓN
• Losmolinos de perlas de alta presión constan fundamentalmente

de un cilindro en posición horizontal o vertical llamado cámara de
molienda, un agitador que consiste de una flechas giratoria sobre
la que se monta un sistema de discos, barras o anillos que provoca
el movimiento del contenido del molino, y una gran cantidad de
pequeñas perlas de vidrio que son los elementos activos de
molienda.
VELOCIDAD DEL AGITADOR
• La Velocidad Periférica Normalizada de los Anillos agrupa varios
parámetros relacionados con la velocidad del agitador
• ω : velocidad angular del agitador (rpm)

• Dm : diámetro
En impulsores concéntricos, D m = diámetro del impulsor (mm)
En impulsores excéntricos, D m = diámetro promedio (mm)
El flujo permisible en un molino de perlas depende:

• Del volumen del molino
• De la carga de perlas
• Velocidad del agitador
El comportamiento de un molino de perlas depende del patrón de
flujo y mezclado que produce la agitación. La cual es un agitado
intermedio a los dos modelos ideales: Flujo tapón (sin mezclado
axial) y tanque continuo agitado (100 % agitado)
• El rompimiento celular con perlas agitadas a altas velocidades sigue una

cinética de primer orden. El balance de masa de proteína liberada
puede ser expresado mediante la ecuación:
Donde:
VM= Vol. Libre del molino (𝐿3 )
Rm: [ ] máxima de proteína obtenible (M/𝐿3 )
R: [ ] de proteína liberada en el tiempo
t: tiempo de operación
K: constante de velocidad específica de primer orden que depende del tipo de célula
HOMOGENEIZADOR DE ALTA PRESIÓN
Estos son equipos de más ampliamente utilizados para el rompimiento celular a gran
escala.
La desintegración celular en un homogeneizador de alta presión a una presión fija puede
ser descrita mediante una cinética de primer orden respecto al número de pasos, de tal
manera que:
Donde :
R: [ ] de proteína liberada (células rotas) después de N pasos (M/𝐿3 )
Rm= [ ] máxima de proteína que puede ser liberada (M/𝐿3 )
N: número de pasos a través de la válvula del homogeneizador
K´: Constante cinética del primer orden (1/pasos)
• La desintegración celular se inicia cuando la suspensión celular

pasa a alta presión por la válvula de descarga, donde las células
se someten a turbulencia, cavitación y esfuerzos de corte liquido.
La fuerza de choque sobre el anillo es directamente proporcional
a la presión de operación es la causa principal del rompimiento
PARÁMETROS OPERACIONALES DE EL
HOMOGENEIZADOR DE ALTA PRESIÓN
Parámetros operacionales
Presión de operación
Diseño de la válvula
Concentración celular
Temperatura
MICROFLUIDIZADORES
• Este equipo es un homogeneizador de alta presión que tiene mecanismo de
rompimiento celular diferente al del homogeneizador Manton-Gaulin. Su
mecanismo de rompimiento utiliza una bomba de alta presión manejada con
aire y una cámara especial de rompimiento conectada a un dispositivo de
contrapresión
• La suspensión celular se divide en dos corrientes haciéndola pasar a presión a
través de dos microcanales de sección transversal 2x100μm. Seguidamente
las corrientes son impactadas a alta velocidad y mezcladas en una pared
estacionaria de la cámara de rompimiento. Mediante este mecanismo la
energía de entrada se disipa casi instantáneamente produciéndose la ruptura
celular
• En el caso del microfluidizador la cinética de rompimiento presenta una cierta
dependencia no lineal con el número de pasos expresada mediante la
ecuación:
R: [ ] de proteína liberada (células rotas) después de N pasos (M/𝐿3 )

Rm= [ ] máxima de proteína que puede ser liberada (M/𝐿3 )
N: número de pasos a través de la válvula del homogeneizador
K´´: Constante dimensional de rompimiento (𝑀−𝑎 𝑡 2𝑎 𝐿2𝑎 /pasos)
P: Presión de operación (M/tL)
a: Parámetro constante en rangos limitadas de presión
b: Exponente que varia con el tipo de célula y toma valores de entre 0,28 y 1,00
APLICACIONES DE LA RUPTURA CELULAR
• Industria alimenticia: Elaboración de lácteos, aderezos, helados, gelatinas y

jugos
• Industria cosmética: Elaboración de lociones, cremas, shampoos y fragancias
• Industria química: Elaboración de cera, parafina, liposomas
• Industria farmacéutica y biotecnológica: En suspensiones, bacterias, células y
levaduras
EJEMPLO
Las cianobacterias son capaces de acumular sales de bajo peso molecular en respuesta a un
medio con alta presión osmótica. Pueden ser cultivadas en medios con 0.11 M NaCl o en
medios con 0.49 M NaCl y 0.01 M CaCl2. Cuando las células son crecidas en el medio más
salino y transferidas a agua pura se permeabilizan liberando los carbohidratos y aminoácidos
intracelulares en 2 min. Estime la diferencia de presión osmótica para permeabilizar las células
a 25 ⁰C (donde: R = 82 cm 3 atm mol-1 K-1).
ΔP = - R*T*c1

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Proteínas recombinantes Insulina, HC, Proteína A, Proteína G

Enzimas Glucocinasa, Invertasa

Vacunas Tétanos, Meningitis

Otros DNA, Mitocondrias, Esporas,

La técnica de rompimiento celular seleccionada determine el tamaño de los

• Una gran variedad de técnicas de rompimiento celular son usadas

• Esta técnica es relativamente simple. Se añade a la suspensión

• En el rompimiento de las células a gran escala se han preferido los métodos

• Estos métodos consisten en alterar la estructura de la pared y la

La operación de rompimiento celular a nivel industrial actualmente

MOLINO DE PERLAS DE ALTA PRESIÓN

• Losmolinos de perlas de alta presión constan fundamentalmente

• ω : velocidad angular del agitador (rpm)

El flujo permisible en un molino de perlas depende:

• El rompimiento celular con perlas agitadas a altas velocidades sigue una

• La desintegración celular se inicia cuando la suspensión celular

R: [ ] de proteína liberada (células rotas) después de N pasos (M/𝐿3 )

• Industria alimenticia: Elaboración de lácteos, aderezos, helados, gelatinas y

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