Introducción A La Ingeniería Genética

INGENIERÍA GENÉTICA
INGENIERÍA GENÉTICA
 Disciplina que se inicia en la década de los 70s, se
refiere a un grupo de técnicas usadas para la
manipulación de la información genética de los
organismos.
 Se emplea la transferencia de genes para producir
organismos con características que naturalmente no
poseen.
 Tiene como base principal a la tecnología del ADN
recombinante.
 Posibilita la creación de nuevas especies, la corrección
de defectos genéticos y la fabricación de numerosos
compuestos de interés.
TECNOLOGIA DEL ADN RECOMBINANTE
Se conoce como tecnología del ADN recombinante a una

serie de etapas que permiten aislar, cortar, pegar y
multiplicar fragmentos específicos del ADN de cualquier
organismo.
Clonación molecular es la técnica central del ADN

recombinante. Se refiere al aislamiento y propagación de
moléculas idénticas de ADN, término surgió de la genética
bacteriana donde se considera una colonia de bacterias
como un clon (individuos genéticamente idénticos).
Las moléculas producidas durante la ligación

deberán ser introducidas en células de Escherichia
coli (cepa K12). Para ello las células deben estar en
un estado especial, denominado “estado de
competencia”, durante el cual permiten el ingreso del
ADN desnudo en su interior.
La frecuencia usual de transformación da lugar a
10 5-10 6 transformantes por µg de ADN plasmídico, la
mayor parte de las células no son transformadas.
IN VITRO IN VIVO
E. coli K12 portadora Célula que contiene el E. coli K12 a ser

del vector DNA de interés transformada Células
competentes
1
4
PURIFICACIÓN
DEL DNA TRANSFORMACIÓN
2
DIGESTIÓN
3
5 6
LIGACIÓN SELECCIÓN DE
DETECCIÓN DE
CLONES
CLONES
TRANSFORMANTES
RECOMBINANTES
MÉTODO DE -COMPLEMENTACIÓN
VECTORES
ENZIMAS DE RESTRICCIÓN
Tipo I Tipo II Tipo III
Restricción y metilación Restricción Restricción y metilación
Corta en sitios distintos El corte es efectuado en el sitio de El corte efectuado de 25 a 27 pb

arriba o abajo al sitio de reconocimiento o en una zona de distancia del sitio de
reconocimiento (hasta 1000 muy próxima y de forma reconocimiento.
pb de distancia). específica.
Extremos cohesivos. Extremos cohesivos y romos Extremos cohesivos
ATP y cofactores: SAM (S- Cofactores: Mg++ y no ATP ATP y cofactores: SAM (S-
adenosil-metionina) y Mg++ adenosil-metionina) y Mg++
h7uATP y cofactores: SAM (S-
adenosil-metionina) y Mg++
SISTEMAS DE TRANSFERENCIA GENÉTICA
1. Agrobacterium : Uso de la bacteria como "Ingeniero
Genético". La bacteria conteniendo el inserto, infecta
las células de la planta produciendo la recombinación
genética.
2. Acelerador de Partículas (Gene Gun) : Un cañón
artificial bombardea micropartículas con el inserto,
sobre la célula.
3. Electroporación : Uso de cargas eléctricas para que el
ADN atraviese la membrana nuclear.
4. Polietilenglicol : Exposición de las membranas al PEG,
facilita el movimiento de las moléculas de ADN.
5. Silicon Whiskers : Inyección con fibras microscópicas,
que atraviesan las membranas llevando los insertos.
GENES REPORTEROS
Son secuencias que codifican para proteínas de fácil

detección, se colocan en una misma construcción
genética con el gen de interés que se quiere analizar.
El producto del gen reportero permite visualizar
fácilmente la expresión, y por lo tanto, si se expresa el
gen reportero se debe estar transcribiendo el gen de
interés, ya que ambos genes estan bajo el control de un
mismo promotor, produciéndose un sólo ARN mensajero
con ambas secuencias de los genes.
GENES REPORTEROS
Genes reporteros Abreviatura Origen Detección
 - glucuronidasa gus/uidA E. coli Fluorométrico (cuantitativo)
o histoquímico ( in situ
in situ
), ),
no radiactivo
Proteína de fluorescencia GFP Aequorea victoria Fluorescencia,

verde
verde no destructiva
Cloranfenicol
Cloramfenicol Cat E. Coli Ensayo radiactivo
acetiltransferas
acetiltransferasa a sensitivo, semicuantitativo
semi cuantitativo
Luciferasa Luc Photinus pyralis Luminiscencia
Luciferasa luxA, luxB Vibrio harveyi Luminiscencia

SALUD
 PRODUCCION DE PROTEINAS TERAPEUTICAS :
Numerosas proteínas que antes se producían solo en

pequeñas cantidades, pueden elaborarse en grandes
cantidades.
En la actualidad existen muchas proteínas aprobadas para

su uso clínico, y cientos de genes de proteínas terapéuticas
que se han expresado a nivel de laboratorio y que están
intentando demostrar su adecuación clínica.
INSULIN
A
 El gen cromosómico de la
insulina no puede ser
utilizado para el clonado
de la insulina en la
bacteria, puesto que
codifica la pre-proinsulina.
 La obtención de insulina
humana en bacterias se
consigue produciendo las
cadenas A y B en dos
cultivos separados que
posteriormente se unen
para producir insulina.
INSULIN
A
Nombre comercial: Humulina

(recombinant human insulin)
Compañía: Eli Lilly &

Corporation.
Autorizado en el tratamiento de
la diabetes Tipo I
(insulino dependiente )
DNAasa RECOMBINANTE
HUMANA
La fibrosis quística es una enfermedad genética de
herencia autosómica recesiva ( mutación en el gen CFTR), que
afecta principalmente a los pulmones, y en menor medida
al páncreas, hígado e intestino, provocando la acumulación de
moco espeso y pegajoso en estas zonas. Es también conocida
como “mucoviscidosis”.
Los nuevos avances en la salud demuestran que la

administración por
vía inhalatoria de DNasa Recombinante Humana escinde las
secreciones y favorece su eliminación, debido a que el ADN
liberado por los leucocitos destruidos en el foco inflamatorio
constituye un factor determinante en la viscosidad del moco .
DNAasa RECOMBINANTE
HUMANA
DNAasa RECOMBINANTE
HUMANA
VACUNAS DE ADN
 Consisten en la inyección directa de ADN a través de un vector

plasmídico. Este ADN codifica una proteína viral antigénica de
interés, que inducirá la activación del sistema inmune.
 La expresión in vivo del antígeno patógeno de interés induce una
fuerte inmunidad, tanto humoral como celular, siendo esta última de
mayor memoria y eficacia.
 La expresión antigénica en células del músculo es larga y puede
inducir inmunidad de larga duración sin necesidad de
reinmunizaciones.
 Los plásmidos de ADN empleados llevan su propio adyuvante
(repeticiones CpG), por lo que se pueden evitar adyuvantes tóxicos
y minimizar sus daños aumentando así la calidad del producto.
 Tienen menor costo cuando se producen a gran escala.
TERAPIA GÉNICA
Es la parte de la terapéutica que utiliza material genético en el

tratamiento de enfermedades, intenta modular la función celular,
pudiendo corregir la deficiencia causada por la pérdida o
alteración de un gen al modificar la expresión de proteínas.
Así, secuencias codificadoras de proteínas, sondas antisentido,

ADN triples y ribozimas pueden ser considerados los fármacos
de la terapia génica.
Los problemas más importantes con los que se encuentra este

conjunto de técnicas son de distribución de estos «fármacos»,
es decir, la transferencia de este material a las células diana .
XENOTRANSPLANTES
Es llamado también Heterotransplante o Transplante
Heterólogo.
La compañía PPL Therapeutics ha producido 9 cerdos

transgénicos cuyas características inmunitarias han sido
alteradas.
Mediante la estrategia antisentido se inhibe la expresión

del gen GGTA1 que produce la enzima -1,3 galactosil
transferasa (forma un azúcar que se deposita en la
superficie de las células del cerdo), la finalidad es evitar
el rechazo inmunológico que es el principal problema
que aparece en el post-operatorio.
XENOTRANSPLANTES
AGRICULTURA
1. MEJORADAS EN CARACTERÍSTICAS DE RESISTENCIA:
 RESISTENTES A HERBICIDAS:
Soja, maíz y canola resistente al glifosato (RR), algodón
resistente al bromoxinil, maíz y canola resistente al glufosinato
de amonio (LL).
 RESISTENTES A INSECTOS:
Variedades de papas, maíz y algodón, conocidos genéricamente
como cultivos Bt.
 RESISTENTES A VIRUS:
Variedades de papas y zuchinis.
Maíz híbrido con un gen Bt (izquierda) y un híbrido
sensible al barrenador europeo del maíz (derecha).
 RESISTENTES A CONDICIONES AMBIENTALES
EXTREMAS:
Las bacterias pseudomonas syringae y erwinia herbicola , cuyos

hábitat naturales son las plantas, son en gran parte
responsables de los daños de las heladas y el frío en
muchos vegetales, al facilitar la producción de cristales de
hielo con una proteína que actúa como núcleo de
cristalización.
La separación del gen implicado permite obtener colonias de

estas bacterias que, una vez inoculadas en grandes
cantidades en la planta, le confieren una mayor resistencia
a las bajas temperaturas.
En cualquier caso, la resistencia a condiciones adversas como

frío, heladas, salinidad, etc., es muy difícil de conseguir por
vía biotecnología, ya que la genética de la resistencia suele
Arroz con altos niveles de tolerancia a diferentes condiciones
ambientales de estrés.
Se insertaron dos genes fusionados implicados en la biosíntesis
de trehalosa en E. Coli y un promotor tejido específico
dependiente de estrés. Los genes de trehalosa permiten la
producción de arroz aún si está estresado por frío, sequía o
altos niveles de salinidad e incrementa la producción en un
20%, no cambiando además la composición química de los
granos.
El azúcar trehalosa ayuda a estabilizar moléculas biológicas:
lípidos, enzimas y otras proteínas, en organismos en
condiciones de estrés.
2. MEJORADAS EN CARACTERISTICAS
NUTRITIVAS Y ORGANOLEPTICAS:
 Arroz transgénico (Golden Rice) que lleva el
gen precursor de la Vitamina A (-caroteno) y
al que se le ligo un gen extra de ferritina e
incrementó las cantidades de hierro sólo en la
semilla; la ferritina actúa como suplidora de
hierro para las enzimas y quelador de hierro
para prevenir los radicales libres los mismos
que dañan a las células.
 En tabaco y soya, se ha conseguido aumentar

el contenido en metionina, aminoácido
esencial, mejorando así la calidad nutritiva de
las especies.
El gen transferido procede de una planta
silvestre que es abundante en el Amazonas
( Bertollatia excelsia ) y que posee un alto
contenido en éste y otros aminoácidos.
TOMATES FLAVR SAVR
Los tomates “Flavr Savr” producidos por la compañía
estadounidense Calgene mediante la tecnología antisentido, fueron
los primeros alimentos transgénicos en ser comercializados en
1994.
Normalmente, los tomates maduros producen una enzima llamada

poligalacturonasa (PG) que degrada las pectinas. Para esto, se
aisló el gen PG y se secuencio, a partir de esta información se
sintetizo un gen complementario (antisentido) que produce un
ARNm complementario que se une al ARNm de la PG bloqueando
su expresión. El gen antisentido fue trasferido a las células de
tomate por el sistema de Agrobacterium tumefaciens .
Dos años después los tomates Flavr Savr tuvieron que ser
retirados del mercado debido a que presentaban una piel blanda,
sabor extraño y cambios en su composición.
3. UTILIZADAS COMO VACUNAS COMESTIBLES:
PAPA con la sub-unidad  antigénica de la enterotoxina del Vibrio

cholerae .
FRIJOL de SOYA con anticuerpos que protegen contra el virus 2 de

Herpes simplex (HSV).
TABACO con anticuerpos que previenen la caries dental

producida por Streptococcus mutans.
MAIZ con una proteína de la capside del virus de la

Hepatitis B.

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INGENIERÍA GENÉTICA

Se conoce como tecnología del ADN recombinante a una

Clonación molecular es la técnica central del ADN

Las moléculas producidas durante la ligación

Tipo I Tipo II Tipo III

Restricción y metilación Restricción Restricción y metilación

Corta en sitios distintos El corte es efectuado en el sitio de El corte efectuado de 25 a 27 pb

Extremos cohesivos. Extremos cohesivos y romos Extremos cohesivos

Son secuencias que codifican para proteínas de fácil

 - glucuronidasa gus/uidA E. coli Fluorométrico (cuantitativo)

Proteína de fluorescencia GFP Aequorea victoria Fluorescencia,

Luciferasa Luc Photinus pyralis Luminiscencia

Luciferasa luxA, luxB Vibrio harveyi Luminiscencia

 PRODUCCION DE PROTEINAS TERAPEUTICAS :

Numerosas proteínas que antes se producían solo en

En la actualidad existen muchas proteínas aprobadas para

Nombre comercial: Humulina

Compañía: Eli Lilly &

Los nuevos avances en la salud demuestran que la

 Consisten en la inyección directa de ADN a través de un vector

Es la parte de la terapéutica que utiliza material genético en el

Así, secuencias codificadoras de proteínas, sondas antisentido,

Los problemas más importantes con los que se encuentra este

La compañía PPL Therapeutics ha producido 9 cerdos

Mediante la estrategia antisentido se inhibe la expresión

1. MEJORADAS EN CARACTERÍSTICAS DE RESISTENCIA:

Las bacterias pseudomonas syringae y erwinia herbicola , cuyos

La separación del gen implicado permite obtener colonias de

En cualquier caso, la resistencia a condiciones adversas como

 En tabaco y soya, se ha conseguido aumentar

Normalmente, los tomates maduros producen una enzima llamada

PAPA con la sub-unidad  antigénica de la enterotoxina del Vibrio

FRIJOL de SOYA con anticuerpos que protegen contra el virus 2 de

TABACO con anticuerpos que previenen la caries dental

MAIZ con una proteína de la capside del virus de la

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