BIOSEPARACION

BIOSEPARACIONES Y
BIOPRODUCTOS
SEPTIEMBRE DE 2018
Productos
 Gases
 Moléculas solubles
extracelulares
 Moléculas solubles e
insolubles
intracelulares
Bioproceso
Etapas de un bioproceso
Separación y purificación
Bioseparación
Liberación de
productos celulares
por medio de
aplicación de
diferentes métodos
físicos, químicos y
biológicos
Por qué son necesarias las operaciones
de bioseparaciones?
 Concentración del producto/meta

– Especificaciones
– Eliminación de las impurezas/contaminación
 Mejora la estabilidad del producto
– |Prevención de la degradación del producto
Bioseparaciones
 Recuperación, aslamiento, purificación

y acabado de productos sintetizados
en procesos biotecnológicos.
Condiciones bioprocesos
•Baja concentración de producto
•Gran número de impurezas,
•Productos termolábiles
•Sensibilidad de los bioproductos
•Baja solubilidad de bioproductos en disolventes orgánicos
•Inestabilidad de bioproductos en disolventes orgánicos
•Estrictos requisitos de calidad
•Porcentaje de pureza
•Ausencia de impurezas
Un proceso de bioseparaciones ideal combina un alta
selectividad y asegura la estabilidad y calidad del
producto final
Por lo tanto….
 Asegura la pureza del producto

 Asegura la estabilidad del producto
 Mantiene costos razonables
 Es reproducible
 Es escalable
 Cumple regulaciones
Selección
•Tipo de fermentación-
células?
•Prop. físicas y químicas
RECUPERACION
PROCESO DE
•Subprod. Y contam. no
deseados
•Concentración producto
•Escala de operación
•Estabilidad prod.
•Especificaciones
Selección / Estrategias
RECUPERACION
•Volumen de flujo de proceso

PROCESO DE
•Requisitos de pureza – uso

•Costo del producto
SELECCIÓN DEL PROCESO-CASO BASE
MERCADO
ESPECIFICACIONES
PROCESO
Operaciones y
secuencia
Escala
Etapas o tiempo de
operaciòn
Costo
PRODUCTO
PRODUCCIÓN INDUSTRIAL
METABOLITOS
 Primarios  Secundarios
Costo bioseparaciones
Costos
Product Approximate relative Downstream processing
price cost (%)
Ethanol 1 15
Yeast biomass 2 20
Citric acid 3.2 30-40
Monosodium glutamate 5 30-40
Xanthan 20 50
Penicillin G 60 20-30
Enzymes 100 40-65
Therapeutic >500 60-80
proteins/DNA
BIOPROCESOS
EN COLOMBIA
Grupos de investigación
 TOTAL = 81 grupos  GRADO ACADÉMICO

(1991)
 Pregrado = 46%
 Sector vegetal y
agrícola = 58%  Maestría = 31%
 Salud humana = 17%  Doctorado = 17%
 Ambiental = 12%  Candidatos a Maestría
 Pecuario = 8% y Doctorado = 6%
 Industrial = 5%
Grupos de investigación
 TOTAL = 135 grupos  ÁREAS DE

ESPECIALIZACIÓN
(2015)
 Ingeniería Química e
 Categoría A = 28 Industrial
 Categoría B = 32  Biología
 Categoría C = 15
 Microbiología
 Salud humana y
animal
Enfoque investigativo
Enfoque investigativo
Análisis prospectivo para el
año 2020
 1. Farmacéutico y salud
 2. Agrícola, pecuario e industria de
alimentos
 3. Medio ambiente y fuentes de
energía
MÉTODOS Y PROCESOS
DE BIOSEPARACIÓN
PROCESOS BIOSEPARACION
ETAPA OPERACIONES
Remoción de Filtración, centrifugación,
insolubles ultrafiltración, microfiltración
Rompimiento Homogenización, abrasión,
celular permeabilización
Concentración Extracción por solventes, adsorción,
destilación, precipitación,
ultrafiltración
Purificación Adsorción, cromatografía,
electroforesis, ultrafiltración
Bioproductos (1)
Product Nature of bioseparation required
Alcoholic beverages: Clarification, distillation
Beer, wine, spirits
Organic acids: Precipitation, filtration, adsorption,
Acetic acid, citric acid solvent extraction
Vitamins: Precipitation, filtration, adsorption,
Vitamin C, vitamin B12, riboflavin solvent extraction
Amino acids: Precipitation, filtration, adsorption,
Lysine, glycine, phenylalanine solvent extraction
Antibiotics: Precipitation, filtration, adsorption,
Penicillins, neomycin, bacitracin solvent extraction
Carbohydrates: Precipitation, filtration, adsorption
Starch, sugars, dextrans
Lipids: Precipitation, filtration, adsorption,
Glycerol, fats, fatty acids solvent extraction
Bioproductos (2)
Proteins: Filtration, precipitation, centrifugation,
Food and food additives adsorption, chromatography, membrane
Nutraceuticals based separations
Industrial enzymes
Hormones
Pharmaceutical enzymes
Plasma derived products
Monoclonal antibodies
Growth factors
Clotting factors
Thrombolytics
r-DNA derived proteins
Diagnostic proteins
Vaccines
DNA based products: Filtration, precipitation, centrifugation,

DNA probes, plasmids, nucleotides, adsorption, chromatography, membrane
oligonucleotides based separations
ROMPIMIENTO CELULAR
•Procedimientos mecánicos: homogenización:
rompimiento de las membranas celulares, libera el
contenido celular.
•Sonicación. Aplicación de ultrasonidos, intensa agitación

destruye
•Detergentes lisis celular
•Filtro a presión. Pasar células a través orificios

de diámetros reducidos provocar ruptura
HOMOGENIZADOR DE ESFERAS
Fragmentación celular por choque de las esferas

de vidrio con las células.
Tamaño de esferas:
•0.1 mm: Bacterias, esporas.
•0.5 mm: Levaduras, micelio, microalgas, células
animales no anexas, células tripsinizadas.
•1.0, 2.5 mm: Cerebro, músculo, piel, hojas.
La cantidad de esferas debe ser al menos el 50%

del volumen total de la biomasa-líquido.
SONICACION
•Tratamiento en frio/termolábiles
•Transmite corriente eléctrica -sistema mecánico/
vibraciones de alta intensidad/ondas de ultrasonido
generan millones de burbujas microscópicas,
expanden y colapsan contra células-ruptura.
Cavitación > finísimas esferas de vidrio.
Compresión-
descompresión
•Paso de las células a presión por un

pequeño orificio a una cámara con
presión baja, lo cual ocasiona la
ruptura de las células por
descompresión.
•Para Tejidos animales. Fragmentos
resultantes de 0.3 – 0.5 mm.
Preliminar para someter a otros tipos
de homogenizador.
Congelamiento-descongelamiento
El líquido al congelarse a -56° C forma cristales

muy finos que rompen la célula cuando esta se
descongela rápidamente a 37°C.
Tejidos animales y vegetales y masas microbianas:
nitrógeno líquido y molerlos en mortero común.
Aparato fracturador: pulverizador de tejidos
Bessman.
SHOCK OSMOTICO
DISOLUCIÓN
LIPÍDICA
Desestabilización de las paredes celulares por solventes
orgánicos
CENTRIFUGACION
En Biología Celular existen un conjunto de
métodos y técnicas que basándose en la ley de
la gravedad tienen como objetivo obtener
fracciones puras o enriquecidas de un
determinado componente celular.
SIN AUMENTAR LA SEDIMENTACION

GRAVEDAD,
ESPONT
AUMENTAR LA CENTRIFUGACION
GRAVEDAD, NO
ESPONT
TIPOS DE CENTRÍFUGAS
Centrífugas
Super-Centrífugas (o centrífugas de
alta velocidad) rango de 2000 xg a 20000 xg
Control de temperatura para evitar
sobrecalentamiento
Ultracentrífugas (de 15000 xg a 600000xg).

Además de control de temperatura, vacío,
para evitar sobrecalentamiento
PARAMETROS
Para determinar condiciones
•Volumen de solución a centrifugar, naturaleza
química: tipo de tubos y rotores a emplear.
•Diferencial de densidad entre la partícula a
sedimentar y la densidad del medio en el que se
encuentra. Cuando el diferencial es muy pequeño
se pueden aplicar centrifugaciones de cientos de
miles de g durante horas.
CENTRIFUGACIÓN DIFERENCIAL
CENTRIFUGACION ISOPICNICA
muestra
gradiente
FILTRACION
DEFINICION
 Técnica antigua. Método físico-mecánico
para la separación de mezclas de
sustancias-diferentes fases. Un medio
filtrante poroso es atravesado por un
líquido o gas (fase 1) y las partículas
sólidas o gotas de un líquido (fase 2)
quedan retenidas en la superficie o en el
interior del medio filtrante.
FINALIDAD
 Filtración de separación: recuperar un
determinado sólido de un líquido (torta de
filtrado) para seguir trabajando con el sólido.
 Filtración clarificante, el líquido se debe limpiar

en lo posible completamente de componentes
indeseados o precipitados, para seguir
trabajando con el líquido
SEPARACION POR MEMBRANAS
– MICROFILTRACION: membrana semi-

permeable de baja presión para separar
sólidos suspendidos, dejando pasar sales
y macromoléculas:
 ULTRAFILTRACION: membrana semi-

permeable de baja presión para separar
partículas de alto peso molecular, dejando
pasar sales y partículas de bajo peso
molecular
 OSMOSIS INVERSA: membrana semi-

permeable de alta presión, para separar
partículas de bajo peso molecular y sales
disueltas en al agua, dejando pasar
únicamente agua
CARACTERISTICAS MEMBRANAS
 Baja tendencia a incrustamiento

 Capacidad de esterilización
 Larga vida activa
 Polímeros naturales: celulosa
 Polímeros sintéticos
 Materiales cerámicos y metálicos
 Ventajas e inconvenientes de filtración:
– Eliminación de la mayor totalidad de los
sólidos en suspensión.
– Eliminación elevada de microorganismos
patógenos.
– Variación del caudal a través de las
membranas (aumento de resistencia de las
mismas): Operación discontinua.
– Requerimientos energéticos elevados.
Gracias

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BIOSEPARACIONES Y

 Concentración del producto/meta

 Recuperación, aslamiento, purificación

 Asegura la pureza del producto

•Volumen de flujo de proceso

•Requisitos de pureza – uso

 TOTAL = 81 grupos  GRADO ACADÉMICO

 TOTAL = 135 grupos  ÁREAS DE

DNA based products: Filtration, precipitation, centrifugation,

•Sonicación. Aplicación de ultrasonidos, intensa agitación

•Detergentes lisis celular

•Filtro a presión. Pasar células a través orificios

Fragmentación celular por choque de las esferas

La cantidad de esferas debe ser al menos el 50%

•Paso de las células a presión por un

El líquido al congelarse a -56° C forma cristales

SIN AUMENTAR LA SEDIMENTACION

Ultracentrífugas (de 15000 xg a 600000xg).

 Filtración clarificante, el líquido se debe limpiar

– MICROFILTRACION: membrana semi-

 ULTRAFILTRACION: membrana semi-

 OSMOSIS INVERSA: membrana semi-

 Baja tendencia a incrustamiento

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