Genética Molecular

NATURALEZA DEL MATERIAL GENÉTICO

GENERALIDADES (ADN)
Requisitos: (4), El material genético (moléculas con capacidad
de almacenar Información) debe presentar las siguientes
propiedades:

 Estable
 Replicable
 Mutable Susceptible de experimentar cambios o variaciones, que
permitiese la aparición de variantes de la información básica.
 Transmisible (a la generación siguiente)

¿Qué moléculas pueden cumplir estos requisitos, las Proteínas

o el ADN?
El ADN se conocía desde 1869 y cuando se descubrió que los cromosomas se dividían y
transmitían durante la división celular se pensó en esta molécula como la portadora de la información
genética.
Esta cuestión fue resuelta por los científicos:
(*) Experimento de A. Hersey y M. Chase
 Experiencias de F. Griffith
Bacterias S
Bacteria con cápsula muertas por
(virulenta) calor

Tipo S

1 De los ratones muertos se extraen bacterias 2 De los ratones inoculados no se extraen

vivas de la cepa S bacterias vivas

Bacterias R
Bacteria sin cápsula vivas Bacterias S
(no virulenta) muertas por
Tipo R calor

3 De los ratones inoculados no se extraen 4 De los ratones muertos se extraen bacterias

bacterias vivas, pues no crecen en el animal. vivas de la cepa S
Frederick Griffith en 1928 demostró la transferencia de material genético
entre células y cómo el material genético de una célula podía modificar la
función de otra.
En 1944, Oswald T. Avery, Maclyn Mccarty y Colin MacLeod observaron que
la capacidad de transformarse las cepas bacterianas desaparecía al agregar
enzimas destructoras del ADN, y dedujeron que el factor transformante era
la molécula de ADN.
EL EXPERIMENTO DE HERSHEY Y CHASE
La información genética está contenida
en el ADN , no en las proteínas
 CONCEPTO MOLECULAR DE GEN

Desde el punto de vista funcional:

Fragmento del ADN que lleva la información para
fabricar una cadena polipeptídica de una
proteína, necesaria para que se exprese un
carácter en un individuo
 El material genético en procariotas y
eucariotas
Procariotas Eucariotas
Todo el ADN codifica, y cada gen Solo codifica el 10% o menos de todo
codificador se compone de una el ADN, el resto tiene funciones poco
secuencia continua de nucleótidos. conocidas.
ADN muy poco repetitivo ADN muy repetitivo, posiblemente
relacionado con la estabilidad de la
estructura de los cromosomas
Las secuencias nucleotídicas Las secuencias codificantes (exones)
codificantes son continuas (solo se alternan con secuencias no
poseen exones) codificantes (intrones).
Cuanto más compleja y reciente es
una especie, más abundantes y más
largos son sus intrones. Parece una
ventaja evolutiva al favorecer la
recombinación.
 REPLICACIÓN (DUPLICACIÓN) DEL ADN

Capacidad de hacer copias de si mismo.

Esto permite transmitir la información genética a las
células hijas.

La replicación permite a las células

hijas contener el mismo ADN que la
célula madre.

Las células duplican su ADN antes de

la división celular (en eucariotas en la
fase S de la interfase).
Expresión de la información genética
EL DOGMA CENTRAL DE LA BIOLOGÍA MOLECULAR

“ Un gen una proteína”

Transcripción Traducción
ADN ARN PROTEÍNA
 Hoy día se sabe que la información genética es la causa de la
síntesis de proteínas, entre ellas las enzimas, responsables de las
características estructurales y funcionales de un organismo.

 En 1948 se enuncia la hipótesis:

un gen → una enzima
 En 1970 Francis Crick enuncia el dogma central de la biología
molecular:
El ADN copia una parte de su mensaje sintetizando una molécula de
ARN mensajero (proceso denominado transcripción), la cual
constituye la información utilizada por los ribosomas para la síntesis
de una proteína (proceso de traducción).
ADN → ARN → Proteína

 El mensaje se transmite en dos etapas sucesivas, en las que el ARN

es el intermediario imprescindible.
 Expresión de la información genética

El flujo de la información genética: Dogma Central de la

Biología Molecular: “Un gen, una proteína”
Transcripción Traducción
Replicación: ADN ARN cadena polipeptídica

“Un gen, una proteína”¿seguro?

 Excepciones al dogma
1.- No todos los genes se expresan en proteínas
2.- Retrotranscripción
3.- Algunos ARN no se traducen
4.- En realidad “un gen varias proteínas diferentes.”
5.- Priones
6.- Los ribozimas
 Expresión de la información genética
Matizaciones de EL DOGMA CENTRAL DE LA
Los priones pueden
BIOLOGÍA MOLECULAR
“replicarse”
Algunos ARN, los ribozimas
pueden autorreplicarse

ADN ARN PROTEÍNA

Algunos ARN no se
traducen,
intervienen en En realidad un gen
procesos puede servir para
No todos los genes se reguladores
expresan , algunos presentan codificar varias
funciones reguladoras proteínas
(operador, promotor,
intrones?) Retrotranscripción
Las retrotranscriptasas
catalizan la síntesis de
ADN a partir de ARN
LA TRANSCRIPCIÓN DE LA INFORMACIÓN GENÉTICA
(SÍNTESIS DE RNA)
LA TRANSCRIPCIÓN DE LA INFORMACIÓN GENÉTICA
(SÍNTESIS DE RNA)
Consiste en copiar una parte del mensaje genético desde su forma original (ADN) a otra (ARN), que
se pueda utilizar directamente para la síntesis de proteínas.

En el proceso de transcripción se forma una cadena de ARN cuya secuencia de bases nitrogenadas
es la misma que la de la hebra madre del ADN.

La responsable de la transcripción es la enzima ARN polimerasa ADN dependiente, que presenta
las siguientes características:
Une nucleótidos mediante enlace fosfodiéster (nucleotídicos), siempre en sentido 5’→3’.
Utiliza nucleótidos trifosfato.
Necesita una molécula de ADN como molde o patrón.
Se fija a regiones específicas del ADN (genes promotores) para comenzar su acción a partir de
ese punto.
BURBUJA DE TRANSCRIPCIÓN
 Cadena Codificante
5’ ACG.CGT.TAA.CGT.ACG. AGT.CAA 3’

Cadena Molde
3’ TGC.GCA.ATT.GCA.TGC. TCA.GTT 5’

Cadena de RNA
5’ ACG.CGU.UAA.CGU.ACG.ACU.CAA 3’

La cadena resultante del RNAm tiene la misma secuencia que la cadena

codificante, pero sustituyendo las Timinas por Uracilos.
 ENZIMA DE LA TRANSCRIPCIÓN: RNA polimerasa

Enzima compleja, no requiere primer (cebador), no

funciona la corrección de errores

Procariotas: sólo un tipo. Con múltiples

subunidades.
E. Coli : factor sigma iniciación + CORE
(holoenzima)

Eucariotas: 3 tipos
I -> ARNr
II -> ARNm
III -> ARNt, ARNsn, ARNr 5S
 Iniciación
La ARN polimerasa reconoce un centro promotor
en el ADN (señal de inicio de la transcripción,
que indica cuál es la cadena molde)

La ARN polimerasa abre la doble cadena para

permitir la incorporación de ribonucleótidos (por
complementariedad de bases)

• A-U
• T-A
En el ARN no hay
• C-G
timina
• G-C
 SECUNCIAS PROMOTORAS

Secuencias promotoras (se une la RNA polimerasa)

Procariotas: Secuencias consenso Pribnow (-10
pb aguas arriba) y región -35 pb

Eucariotas: Caja TATA (-25 pb) y CAAT (-70 pb)

 Elongación

• Adición de sucesivos ribonucleótidos. Unión por enlaces ester,

desprendiendo un pirofosfato (PP)
• Sentido de lectura ARN polimerasa. 3’  5’
• Sentido de síntesis ARN polimerasa. 5’  3’
• Se sintetiza la cadena complementaria.
• Adición de una caperuza (en eucariotas) formada por metil – guanosin-
fosfato.
 Terminación

La ARN polimerasa reconoce señales de terminación en el ADN.

• Cierre de la burbuja de transcripción

• Separación del ARN polimerasa

Señal de terminación en PROCARIOTAS:

• Secuencias de unos 40 pares de bases que contienen una región

rica en GC seguida por una serie de 6 o más adeninas (A).
• Cuando se transcribe da lugar en el ARN a una secuencia rica en
pares GC seguida de 6 o más uracilos (U).
• La región rica en pares GC forma una estructura en forma de
horquilla seguido de uracilos y que actúa como señal para la
separación de la ARN polimerasa del ADN y terminación de la
transcripción.
Señal de terminación en EUCARIOTAS:

• La ARN polimerasa transcribe regiones

de ADN largas (más que la proteína)
• Un enzima encuentra una señal de
corte (AAUAAA) y corta el ARN
• La ARN polimerasa sigue
transcribiendo, pero el transcrito, ARN
sobrante, se degradará (no lleva
caperuza).
• Otro enzima poli-A-polimerasa añade
al extremo 3’ unos 200 nucleótidos de
adenina (cola poli A)
 Maduración del ARN

En PROCARIOTAS

• Si el ARN formado es ARNm,

no hay maduración
• Si se trata de ARNr o ARNt,
hay un transcrito primario
que sufre un proceso de
'cortes y empalmes'.
• El ARNm de procariotas
puede originar varias
proteínas (policistrónico).
•ARNm monocistrónico: solo tiene un codón de inicio AUG, que es reconocido por
los ribosomas para iniciar la traducción, por lo que solo da lugar a una proteína. Se
dice que lleva la información de un único gen. Habitual en eucariotas.
•ARNm policistrónico: tiene varios codones de inicio AUG, por lo que da lugar a
varias proteínas. Se dice que lleva información de varios genes. Habitual en
procariotas
 En EUCARIOTAS

• Los intrones (regiones no codificantes) son eliminados mediante procesos de

corte
• Los exones quedan unidos (intervienen ribozimas y ARN ligasas).

• Un transcrito primario puede sufrir

diferentes cortes y empalmes que originan
moléculas de ARNm distintas, con
información para diferentes proteínas.
• Cada ARNm origina una proteína
(monocistrónico).

• En los casos del ARNt y ARNr, los transcritos primarios elaborados por las ARN pol I
y III, también sufren un proceso de maduración que incluye la adquisición de su
correcta configuración espacial.
 Transcripción en células procariotas
En procariotas solo existe un tipo de ARN polimerasa, formada por dos subunidades: α
y β.
La ARN polimerasa se debe unir al factor σ para reconocer y fijarse a la zona
promotora (rica en timina y adenina: TATAATG. Después el factor σ se suelta.
La ARN polimerasa fijada al ADN produce el desenrollamiento de una vuelta de la
doble hélice, y comienza a sintetizar ARN en sentido 5’→3’.
La cadena de ARN finaliza al llegar a la señal de terminación (zona rica en guanina y
citosina). El factor ρ reconoce esta zona.
La velocidad de transcripción es alta: une 30 a 40 nucleótidos por segundo).
Mediante este proceso se sintetizan tres tipos de ARN: mensajero, ribosómico y
transferente. Este último debe sufrir un proceso de maduración antes de activarse.
No se corrigen los errores producidos durante la síntesis de ARN ya que son bien
tolerados y nunca se transmiten a la descendencia.
 Transcripción en células eucariotas
La transcripción es más compleja en eucariotas.
Intervienen factores proteicos ausentes en las procariotas.
Hay 3 tipos de ARN polimerasas diferentes:
Tipo I: transcribe ARN ribosómico.
Tipo II: transcribe ARN mensajero.
Tipo III: transcribe ARN de transferencia.
Tras la transcripción es preciso un proceso de maduración antes de que el ARN sea
funcional (deben ser eliminados los intrones y dejar solamente los exones).
Para transcribir el ADN es preciso que las histonas hayan desbloqueado la hebra de
ADN y que éste se haya desespiralizado.
La región promotora tiene una secuencia específica: TATA o CAAT.
Cuando se han agregado 30 nulcLeótidos, se añade al extremo 5’ una caperuza de 7-
metil-guanosina trifosfato (punto de reconocimiento para procesos posteriores).
Tras la señal de finalización (secuencia TTATTT), sobre el extremo 3’ se añade una
cadena de unos 200 poli-A.
TRANSCRIPCIÓN EN EUCARIOTAS : RESUMEN

Estructura
mensajero
eucariota
 Descubrimiento del código genético

¿Cómo se pasa de una combinación de 4 letras (A,U,C y

G) a los 20 aminoácidos que forman las proteínas?

Hipótesis de trabajo

• 1 nucleótido determina un aminoácido  solo se codifican

cuatro aminoácidos diferentes. NO ES VALIDA
• Dos nucleótidos codifican un aminoácido, las combinaciones
posibles son 42 = 16. Tendríamos solamente 16 dinucleótidos
diferentes. NO ES VALIDA
• Tres nucleótidos determinan un aminoácido. Las
combinaciones posibles son 43 = 64. Existen 64 tripletes
diferentes. SI ES VALIDA
 Terminación

Iniciación
Características del código genético
1. El código está organizado en tripletes o codones: cada tres
nucleótidos (triplete) determinan un aminoácido.

2. El código genético nuclear es universal: el mismo triplete en

diferentes especies codifica para el mismo aminoácido. La principal
excepción a la universalidad es el código genético mitocondrial.

3. El código genético es degenerado: existen más tripletes o codones

que aminoácidos, de forma que un determinado aminoácido puede
estar codificado por más de un triplete (codones sinónimos)

4. No presenta imperfección: Ningún codón codifica más de un

aminoácido

5. El código genético es no solapado o sin superposiciones: un

nucleótido solamente pertenece a un único triplete.

6. La lectura es "sin comas": el cuadro de lectura de los tripletes se

realiza de forma continua "sin comas" o sin que existan espacios en
blanco.
 Proceso de traducción

• Requiere:
– Ribososmas
– ARNm
– Aminoácidos activados
– ARNt
– Enzimas y energía
– Factores de iniciación y terminación

• Localización: RIBOSOMAS
– Subunidad grande: se unen los aminoácidos
– Subunidad pequeña: se une al ARNm

E P A Sitio A : aminoácido
Sitio P : péptido en
Subunidad del ribosoma
formación
Sito E : ARNt descargado
Ribosoma procariota (70s)

Ribosoma eucariota (80s)

ARN de transferencia
• Transportan los
aminoácidos.
• 20 ARNt diferentes.
• Partes importantes:
– Anticodón: especificidad con
el aminoácido.
– Extremo 3’ : unión al
aminoácido.
 Activación de los aminoácidos

• Es la unión del aminoácido con el ARNt específico, con gasto de

ATP
• Enzimas: aminoacil-ARNt-sintetasa (hay, al menos, 20 aminoacil-
ARNt- sintetasas distintas.
aa1 + ARN-t1 + ATP → ARN-t1-aa1 + AMP + PPi
 Inicio de la traducción

• Unión de la subunidad pequeña y el ARNm (cerca del codón iniciador)

• Llegada del primer ARNt al sitio P
• En procariotas lleva N-formilmetionina
• En Eucariotas lleva metionina
• Unión de la subunidad grande del ribosoma
En la iniciación de la
cadena polipeptídica
intervienen, además del
primer ARN-t, o ARN-t
iniciador y las
subunidades
ribosomales, el ARN-m,
enzimas, los factores de
iniciación IF1, IF2 e IF3 y
una fuente de energía
como GTP.
 Elongación de la cadena proteica
Tiene lugar por la formación de enlaces péptídicos entre los aminoácidos
sucesivos.
Intervienen: el peptidil-ARN-t, los aminoacil-ARN-t, ribosomas, ARN-m,
enzimas, factores proteicos de elongación EF-Tu, EF-Ts y EF-G y fuentes
de energía como GTP.
 1. Un segundo aminoacil ARNt llega al sitio A
2. Formación del enlace peptídico entre los dos aminoácidos (peptidil transferasa
3. Translocación del ribosoma (desplazamiento sobre el ARNm en sentido 5’ 3
4. Salida del primer ARNt (sin aminoácido)
5. Entrada de un tercer aminoacil ARNt al sitio A
6. …..

El proceso consume GTP

 Terminación de la cadena proteíca
• Los ribosomas avanzan a lo largo del ARN-m y
encuentran algún triplete STOP: UAA, UAG y
UGA.

• Intervienen unos factores proteicos de

terminación.

• No hay ningún ARN-t que reconozca a los

tripletes de terminación. Los factores de
terminación o liberación son los que reconocen
los codones de STOP.

• Cuando el último peptidil-ARN-t está en el sitio P

los factores de terminación entran en el sitio A.

• El polipéptido se libera de la sede P, se disocian

las dos subunidades del ribosoma y se libera el
ARN-t que estaba en la sede P. Esta reacción de
terminación se lleva a cabo mediante la hidrólisis
de GTP.
Un mismo ARNm puede ser leído por varios ribosomas al mismo tiempo,
generando muchas copias de la misma proteína rapidamente.

En procariotas, la traducción es simultanea a la transcripción (no hay

separación física entre ambos procesos como en los eucariotas)
Regulación de la expresión génica en procariotas

Principio de economía: solo se sintetiza lo que se necesita en cada

momento.

Modelo del operón (Jacob y Monod, 1961)

Esta formado por:

• Genes estructurales (cistrones)

• Promotor..
• Operador.
• Gen regulador.
• Proteína reguladora.
• Inductor.
Características diferenciales del operón:

• Conjunto de genes estructurales (cistrones), cuya expresión genética depende de otras

secuencias de ADN a las que está asociado y que codifican para distintas enzimas de
una misma vía metabólica.
• Se expresan de forma coordinada (están funcionalmente relacionados).

Las secuencias de ADN asociadas a los cistrones, en el operón, son las siguientes:
1. Promotor: Nucleótidos situados antes del punto de inicio de la síntesis de ARNm.
2. Operador: Secuencia próxima a los genes estructurales y solapada al promotor.
Permite o no la acción transcriptora de la ARN pol. Puede ser bloqueada por una
'proteína represora' (represor).
3. Regulador: Secuencia que puede estar más distante de los cistrones.
Determina la síntesis de un represor.

Genes estructurales (cistrones)

Promotor
Regulador Operador

1 2 3

OPERON
El operón Lactosa
Este operón regula la síntesis de las tres enzimas que controlan
la degradación de la lactosa (galactosidasa, permeasa y
transacetilasa).
En ausencia de lactosa:
• El gen regulador se transcribe y se sintetiza la proteína represora.
• El represor se une al operador y la ARN pol no puede acceder al
promotor.
• La transcripción de los genes estructurales queda bloqueada
(represión).
En presencia de lactosa:

• La lactosa actúa como agente 'inductor' capaz de unirse al represor.

• El represor sufre un cambio conformacional y no puede unirse al
operador.
• El operador no queda bloqueado Se inicia la transcripción de los
genes estructurales (inducción).
 OPERÓN 'HIS'

Este operón regula la síntesis de otro complejo enzimático, dependiendo de

la mayor o menor concentración de un producto biosintético final (la
histidina).
1) Ante un exceso de histidina:

-El excedente de histidina actúa como un agente 'correpresor' capaz de unirse

a la proteína represora (inactiva en principio), activándola.

-Se forma un complejo histidina-

represor que bloquea al
operador, impidiendo que la
ARN pol acceda al promotor.

-Como consecuencia, no tiene

lugar la transcripción de los
cistrones (represión) y no se
elabora el complejo enzimático
correspondiente.
2) Ante la disminución de la histidina:
-El represor se sintetiza en forma inactiva.
-Por tanto, no bloquea al operador.
-Como consecuencia, la ARN pol puede actuar sobre el promotor específico para
iniciar la síntesis de ARNm y la posterior elaboración del sistema enzimático
(inducción).
 Regulación de la expresión génica en eucariotas

• Todas las células de un organismo eucariota proceden del

mismo cigoto

• El proceso de diferenciación que sufren se debe a un

mecanismo de expresión génica diferencial.

• La regulación de este mecanismo se realiza en varios

momentos; antes, durante y después de la transcripción
 Regulación antes de la transcripción

• Está relacionada con la condensación de la cromatina.

• Los genes situados en la heterocromatina no se expresan (los
enzimas no pueden acceder a ellos debido a la compactación)

Controles transcripcionales

Existen proteínas llamadas factores de transcripción específicos que se

unen a secuencias cercanas al promotor y pueden facilitar o inhibir la
transcripción.

Controles postranscripcionales

Existen varios mecanismos después de la

transcripción:

1. Corte y empalme alternativo del ARN

2. Degradación del ARNm
3. Procesamiento después de la traducción.