Benemérita Universidad Autónoma de Puebla

Facultad de Ciencias Químicas

Laboratorio de Bioquímica ll
Equipo II
Zepeda Estrada Luis Fernando
AISLAMIENTO DE NUCLEOPROTEÍNAS Y RECONOCIMIENTO DE ADN
INTRODUCCIÓN RESULTADOS
Los ácidos nucleicos son compuestos nitrogenados de elevado peso molecular que se pueden encontrar en las células asociados a
proteínas formando complejos llamados nucleoproteínas. Estas nucleoproteínas se encuentran en tejidos abundantes en núcleos como
son leucocitos, espermatozoides, células hepáticas, etc. Estas proteínas tienen carácter básico mientras que los ácidos nucleicos son
ácidos. Se conocen dos grupos de ácidos nucleicos: RNA (ácido ribonucleico) y el DNA (ácido desoxirribonucleico). La hidrólisis
controlada de RNA y DNA produce nucleótidos. Si la hidrólisis continúa se producen nucleósidos y finalmente fosfatos, azúcares y
bases púricas y pirimidínicas. OBJETIVOS
Los nucleótidos están formados por tres componentes característicos: una base nitrogenada, una pentosa y un fosfato.  Aislar desoxirribonucleoproteìnas a partir del hígado de
rata.
 Realizar una reacción de identificación de DNA
Obtención de DNA:
Estructura de un nucleótido
MATERIALES: Decantación del precipitado de nucleoproteínas,
Se empleo difenilamina como colorimétrico
obteniendo 67ml.
Una molécula sin un grupo fosfato se denomina nucleósido. Un nucleósido se forman por la unión de una base nitrogenada con un • Higado de rata para observar la presencia de ADN en las
azúcar (pentosa). El enlace que une ambas moléculas es tipo glucosídicos (N-B-glucosidico). • Mortero con pistilo REACTIVOS: Formula:
Agregar 6 ml de agua destilada por cada mililitro obtenido de sobrenadante
células del hígado de rata. Cuya intensidad de la
coloración azul es proporcional a la cantidad de
Los enlaces se pueden formar del siguiente modo: • ½ caja petri • NaCl 1N del precipitado.
DNA presente.
(6mlH2O) (67ml)=402ml de agua destilada
C1’ de la pentosa con N9 de una base purica. • Agua destilada
C1’ de la pentosa con N1 de una base pirimidica. • Vaso de precipitado de
500ml • Reactivo difenilamina
La conexión entre las sucesivas unidades monomericas en los ácidos nucleicos se realiza • Vaso de precipitado de • NaOH al 4%
mediante un residuo fosfato unido al hidroxilo del carbono 5´ de una unidad y al hidroxilo 3´ de la
250ml
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
siguiente. Esto forma un enlace fosfodiéster entre dos residuos de azúcar. De esta forma, se 1.-Se colocó el hígado en el mortero para poder romper mecánicamente las membranas de los
construyen cadenas largas de acido nucleico, que a veces contiene centenares de millones de hepatocitos, exponiendo así los núcleos para poder extraer las nucleoproteínas de estas células, para
unidades.
esto se agregó una solución hipertónica NaCl, con el fin de romper los núcleos y exponer este material a
Tanto el DNA como el RNA contienen dos bases purinicas principales, la adenina (A) y la guanina
su vez se vertió la mezcla en la centrifuga para así separar todos los componentes dependiendo de la
(A) y dos pirimidinas principales. Tanto el DNA como el RNA una de las pirimidinas es la citosina PROCEDIMIENTO densidad, precipitando así las nucleoproteínas.
(C) pero la segunda base pirimidinas no es la misma en las dos, timina (T) en el DNA y uracilo (U)
en el RNA. AISLAMIENTO DE NUCLEOPROTEINA DE REACCION DE RECONOMIENTO DE DNA
DNA 2.– La difenilamina como colorimétrico se utiliza para medir la concentración de ADN en las células o
Las moléculas de RNA son de una sola hebra o cadena (excepto en algunos virus). Pueden contener regiones •Decante el precipitado de nucleoproteìnas
de doble hélice producidas por la formación de horquillas donde se empareja A con U y G con C. Las células •Pese 10gr. de hígado de rata.
obtenido anteriormente.
tejidos. Los reactivos utilizados en la reacción de difenilamina incluyen ácido sulfúrico; la difenilamina y el
contiene tres tipos de RNA: RNAm (mensajero). Transporta la información genética del DNA hacia los hidróxido de sodio. Cuando estos se calientan con el ADN se rompen los enlaces fosfodiéster y
ribosomas, RNAt (transferencia). Traslada a los aminoácidos del citoplasma a los ribosomas y RNAr.(ribosomal). hidrolizan los enlaces glucosídicos entre el azúcar y las bases purinicas. La 2-desoxirribosa sufre una
•Triturarlo durante 10-15min en el mortero, agregar
Acido nucleico que asociado con las proteínas conforma a los ribosomas. Además de las bases principales poco a poco 70ml de NaCl •Tome una pequeña cantidad del deshidratación lo cual lleva a la formación de β-hidroxilevulinilaldehido que en contacto con la
pueden presentar algunas bases secundarias. La secuencia de bases del RNA refleja la composición en bases precipitado
difenilamina adquiere una coloración azul, cuya intensidad es proporcional a la cantidad de DNA
del DNA. Su función es mantener la información de la celula y regir el buen funcionamiento de las células. •La disolución viscosa obtenida transfiérala a tubos presente.
La función biológica de los ácidos nucleicos es fundamental: el DNA está asociado con el material genético de para centrifuga. •Y disuelvalo en un tubo de ensaye con 1ml
las células, pudiendo encontrarse como una sola cadena en algunos microorganismos o formando parte de de NaOH al 4%.
nucleoproteínas de los cromosomas en organismos superiores. Almacena información genética y sirve de molde •Centrifugue los tubos durante 10min a 2500rpm.
para la síntesis de proteínas. Se encuentra mayoritariamente en el núcleo y en muy poca cantidad en
mitocondria y cloroplastos. El RNA participa en la síntesis de proteínas y se distribuye en toda la célula, •Añada 1ml de reactivo difenilamina. CONCLUSIÓN
• Decante el liquido sobre la probeta y mida el
mayormente en citoplasma en forma soluble o formando parte de los ribosomas. volumen obtenido. De acuerdo a lo obtenido experimentalmente se pudo observar la formación de los pequeños hilos de
• Y ponga el tubo durante 15 o 20 min en DNA, que es el propósito principal de la práctica, lo cual comprueba el proceso para el aislamiento de la
• En el vaso precipitado de 500ml. Agregue agua baño maría hirviendo.
destilada en una reacción de 6 ml de agua por ml
nucleoproteína de DNA presente en el hígado y que posteriormente fue empleada en la siguiente parte
CONCEPTOS de sobrenadante obtenido. experimental
• Vierta lentamente el sobrenadante en el agua que • La presencia de una coloración azul indica En el experimento numero dos se puede observar la presencia del ADN en contacto con la
Ácido nucleico: Los ácidos nucleicos son grandes polímeros formados por la repetición de monómeros denominados nucleótidos, esta en el vaso de precipitado. la presencia de DNA.
• Y girando lentamente con la varilla de madera trate difenilamina adquiriendo una coloración azul, cuya intensidad es proporcional a la cantidad de DNA
unidos mediante enlaces fosfodiéster.
ADN: El ácido desoxirribonucleico, abreviado como ADN, es un ácido nucleico que contiene instrucciones genéticas usadas en el
de enrollar los hilos de nucleoproteínas de DNA presente.
que se va precipitando.
desarrollo y funcionamiento de todos los organismos vivos conocidos y algunos virus, y es responsable de su transmisión
hereditaria. CUESTIONARIO
RNA: El ácido ribonucleico (ARN o RNA) es un ácido nucleico formado por una cadena de ribonucleótidos. Está presente tanto en
las células procariotas como en las eucariotas, y es el único material genético de ciertos virus (virus ARN). El ARN celular es lineal y
de hebra sencilla, pero en el genoma de algunos virus es de doble hebra.
HOJAS DE SEGURIDAD 1.– Escriba la estructura de los cuatro nucleótidos que podemos encontrar en el DNA.
Nucleoproteínas: Son proteínas compuestas constituidas de proteínas como las histonas y protaminas conjugadas con ácidos R.- El nucleótido en el ADN consiste en un azúcar (desoxirribosa), una de cuatro bases (citosina (C),
nucleicos. timina (T), adenina (A), guanina (G)), y fosfato. La citosina y la timina son bases pirimídicas o pirimidinas,
Base nitrogenada: Las bases nitrogenadas son compuestos orgánicos cíclicos, que incluyen dos o más átomos de nitrógeno. mientras que la adenina y la guanina son bases púricas o purinas. Además de un grupo fosfato unido al
Biológicamente existen seis bases nitrogenadas principales (en realidad hay muchas más), que se clasifican en tres grupos, bases carbono 6 de la azúcar constituyente.
isoaloxazínicas (derivadas de la estructura de la isoaloxazina), bases púricas o purinas (derivadas de la estructura de la purina) y
bases pirimidinas (derivadas de la estructura de la pirimidina).
Nucleótido: Los nucleótidos son moléculas orgánicas formadas por la unión covalente de un monosacárido de cinco carbonos
(pentosa), una base nitrogenada y un grupo fosfato.
Nucleósido: El nucleósido es la parte del nucleótido formada únicamente por la base nitrogenada y la pentosa.
Enlace fosfodiéster: Un enlace fosfodiéster es un tipo de enlace covalente que se produce entre un grupo hidroxilo (OH-) en el
carbono 3' y un grupo fosfato (PO43− ) en el carbono 5' del nucleótido entrante, formándose así un doble enlace éster. 2.- ¿Qué función tienen los cromosomas?
Ribosa: La ribosa es una pentosa o monosacárido de cinco átomos de carbono de alta relevancia biológica en los seres vivos al La función de cromosomas es controlar todas las actividades de una célula viva. Los cromosomas son
constituir uno de los principales componentes del ARN en su forma cíclica, y de otros nucleótidos no nucleicos como el ATP. esenciales para el proceso de la división celular y son responsables de la replicación, la división y la
Desoxirribosa: Es un desoxiazúcar derivado de un monosacárido de cinco átomos de carbono (pentosa, de fórmula empírica creación de células hijas, que contienen las secuencias correctas de ADN y las proteínas. Desde el color
C5H10O4), derivado de la ribosa por pérdida de un átomo de oxígeno en el hidroxilo de 2', y por ello no responde a la fórmula general
de los ojos hasta la textura de la cera en los oídos, los cromosomas son responsables de regular todas
de los monosacáridos (CH2O)n). Forma parte del ADN.
Núcleo: Orgánulo membranoso que se encuentra en el centro de las células eucariotas. Contiene la mayor parte del material
las funciones en nuestro organismo. Están formados por ADN, un código químico compuesto por
genético celular, organizado en múltiples moléculas lineales de ADN de gran longitud formando complejos con una gran variedad de secuencias de bases nitrogenadas.
proteínas como las histonas para formar los cromosomas.
3.- ¿Cuál es la composición de los cromosomas?
Un cromosoma es una estructura celular que contiene el material genético requerido por el organismo
para crecer y desarrollarse.
FUNDAMENTOS La cromatina está constituida por el ADN asociado a proteínas especiales llamadas histonas, este
material es microscópico y lleva la información genética a los organismos eucariotas. El ADN es uno de
1.-Una fuente importante de nucleoproteínas son los tejidos ricos en núcleos (leucocitos, espermatozoides, células hepáticas, los ácidos nucleicos que contiene la información genética de las células e intervienen en las síntesis de
etc.). En soluciones salinas concentradas la desoxirribonucleoproteinas forman diluciones muy viscosas y se solubilizan en las proteínas de las cuales dependen las características de cada ser vivo. Los cromosomas están
soluciones salinas diluidas. Las nucleoproteínas son solubles en agua y soluciones de alta concentración iónica, pero son formados por compuestos orgánicos llamados proteínas y un conjunto se macromoléculas denominadas
insolubles en soluciones de baja concentración iónica (0.05- 0.25 mol/L) esta propiedad es usada en su extracción. Las ácidos nucleicos, así como segmentos de ADN llamados genes.
nucleoproteínas de DNA son solubles en soluciones salinas concentradas, pero son insolubles en soluciones salinas diluidas. Al
ser precipitadas, las nucleoproteínas se sedimentan en forma de hilos. Una de las técnicas empleadas para diferenciar
4.- ¿Qué diferencia existe entre los nucleótidos de DNA y los de RNA?
nucleoproteínas de DNA de las nucleoproteínas de RNA es la reacción con difenilamina, que frente a las nucleoproteínas de DNA
da una coloración azul a diferencia del color verde que da frente a las nucleoproteínas de RNA. El ARN tiene una estructura de cadena sencilla, mientras que el ADN está formado por largas cadenas
de nucleótidos.
El ARN se compone de cadenas más cortas de nucleótidos.
2.– Al tener las nucleoproteínas en el tubo de ensaye junto con la difenilamina y el hidróxido de sodio y someterlo a calor La columna vertebral del ADN consiste en azúcar desoxirribosa, mientras que la del ARN contiene el
originamos un rompimiento del enlace fosfodiéster entre la pentosa y el grupo fosfato, así como también una reacción de azúcar ribosa.
hidrolisis entre la pentosa y las bases purinicas. La 2-desoxirribosa sufre una deshidratación lo cual lleva a la formación de β- En el ADN, la complementaria a la adenina (A) es timina (T); mientras que en el ARN es el uracilo (U).
hidroxilevulinilaldehido que en contacto con la difenilamina adquiere una coloración azul, cuya intensidad es proporcional a la El ADN es responsable de almacenar la composición genética, mientras que el ARN es responsable de
cantidad de DNA presente.
transmitir dicha composición y ayudar a crear las proteínas.

BIBLIOGRAFÍA
· Ayudas didácticas bioquímica I. Departamento de bioquímica- alimentos. Lic. En Químico Farmarmacobiólogo (MUM) 2013.
· Ayudas didácticas bioquímica II. Departamento de bioquímica-alimentos. Lic. En Químico Farmarmacobiólogo (MUM) 2015.
· Nelson, David L., Cox, Michael M. Lenninger Principios de Bioquímica , 5a edición. 2006.