Cultivos Celulares

CULTIVOS
CELULARES
CULTIVOS CELULARES
MICROBIANOS
Células microbianas
Definición.- La célula microbiana es una entidad, aislada de otras
células por una membrana celular y que contiene en su interior
una variedad de sustancias químicas y de estructuras
subcelulares.
Características generales de la célula microbiana.- Todas las células
son similares en tres aspectos: todas inician su vida con una
membrana plasmática, material genético y una región de
citoplasma.
• Membrana plasmática.- Membrana externa de doble
capa, separa el interior de la célula de sus alrededores y
selectivamente permite que la sustancias la atraviesen.
• Citoplasma.- Región interna organizada donde se llevan

a cabo conversiones de energía y síntesis de proteínas,
desplazamiento de partes celulares y otras actividades
necesarias.
• Material genético.- Dependiendo de la especie, el ADN

ocupa un saco recubierto de membrana(núcleo) en el
interior de la célula o sólo una región del interior de la
célula (nucleoide)
Conclusión.- La Membrana Celular es una Barrera que
separa del exterior el interior de la Célula. Dentro de la
membrana celular se encuentran las diversas estructuras y
sustancias que hacen posibles las funciones de la célula.
Todas las células tienen estructuras claves: el Núcleo, donde
se almacena la información necesaria para producir más
células, y el citoplasma, donde está la maquinaria para el
desarrollo y las funciones de la célula. Todas las cellas
microbianas contienen ciertos tipos de componentes
químicos complejos:
• Proteínas
• Ácidos nucleicos
• Lípidos
• Polisacáridos.
• ‘’Un organismo es un sistema complejo, organizado,
especifico, capaz de reproducir su especie’’.
A los elementos bacterianos los
podemos dividir en:
Elementos Obligados:
• Pared bacteriana
• Membrana citoplasmática
• Citoplasma
• Ribosomas
• Nucloide o cromosoma
bacteriano
Elementos facultativos:
• Capsula
• Flagelos
• Fimbrias o pili
• Esporo
• Glicocalix
• Plasmidos
• Transposones
Medios de cultivo.-
* Para bacterias.-
Según sus cualidades físicas
• Líquidos
• Semisólidos
• Sólidos
• Gaseosos
Según su origen
• Naturales: son los preparados a partir de sustancias naturales de
origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones
y cuya composición química no se conoce exactamente.
• Sintéticos: son los medios que contienen una composición química
definida cualitativamente y cuantitativamente. Se utilizan para
obtener resultados reproducibles.
• Semisintéticos: son los sintéticos a los que se les añaden factores
de crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo,
como por ejemplo extracto de levadura.
Según su formulación
• Químicamente definidos: se conoce la
cantidad exacta de cada uno de los
compuestos que hay en el medio.
• Complejos: se realizan a partir de extractos
naturales (extracto de levadura, sangre, etc.);
no se conoce exactamente cuál es la
composición del medio; sin embargo,
presenta la ventaja de que ya están presentes
todos o casi todos los elementos que una
célula puede requerir.
Según su uso
• Medio general: medio en donde crecen todo
tipo de microorganismos, excepto los que
necesitan condiciones especiales (por
ejemplo, agar CLED).
• Medio diferencial: permite identificar
una especie con otra, ambas en el mismo
medio. Puede ser por su crecimiento, su
metabolismo, su respiración, etc. (por
ejemplo, medio de McConkey).
• Medio de enriquecimiento: contiene los nutrientes
necesarios para apoyar el crecimiento de una amplia
variedad de microorganismos, se utiliza para la cosecha
de diferentes tipos de microorganismos en un mismo
medio.
• Medio mínimo: contiene la mínima cantidad de
nutrientes posible que permite el crecimiento de una
especie.
• Medio de transporte: preparado para servir como
almacenamiento temporal a especímenes transportados
o en transferencia; mantienen su viabilidad y su
concentración simple.
Conteo bacteriano
• Generalmente, tras analizar un cultivo, se realiza
un conteo bacteriano, con el fin de saber cuál es
la densidad de población microbiana que se encuentra
en el medio.
Para hongos.-
• Medio selectivo: permite seleccionar el
crecimiento de una especie o grupo
determinado (hongos, bacterias
entéricas, protozoos...).
2. CULTIVOS DE CÉLULAS ANIMALES
A. CÉLULAS ANIMALES
• Las células animales son células eucariotas
• son más grandes que las procariotas así teniendo el
diámetro que varía entre 10 y 30 micrometro.
• Estas células son organismos pluricelulares. Sin
embargo, existen células animales constituidas por
una sola célula como es el caso de los
microorganismos unicelulares llamados
protozoarios, que incluyen especímenes como la
amiba y la Giardia lamblia
• no tienen una pared celular por lo cual son
heterótrofas
• no poseen cloroplastos con clorofila para la
fotosíntesis.
• El orgánulo más importante es la mitocondria donde
se producen las transformaciones de energía para
que la célula pueda vivir.
B. MEDIOS DE CRECIMIENTO
• Requiere células nutricionales mamíferas que son más estrictos

que los de microorganismos porque los animales no
metabolizan el nitrógeno inorgánico. muchos aminoácidos y
vitaminas deben ser provistos.
• En un Medio típico contiene aminoácidos, vitaminas,
hormonas, factores de crecimiento, minerales sales y glucosa.
Además, el medio debe ser complementado con dos a veinte
por ciento (por volumen) de suero de sangre de mamíferos.
• A presencia de muchas diferentes proteínas en el suero
también puede complicar la corriente descendente procesos de
separación.
C. ANTICUERPOS MONOCLONALES
• Es un anticuerpo homogéneo producido por un clon de células.
Este clon está derivado de una célula híbrida, creada a partir de la
fusión de una sola célula madre del sistema inmune y una célula
plasmática tumoral.
• Un clon derivado de la reproducción de un único linfocito
producirá, por definición, anticuerpos monoclonales, con
especificidad única.
• La imposibilidad de obtener cultivos de clones celulares de
linfocitos-B normales que produzcan los anticuerpos de
especificidad deseada ha llevado a buscar las técnicas artificiales
que emulen una situación similar. Con tal fin, se pueden llevar a
cabo dos procedimientos:
• la transformación in vitro de los linfocitos B (p.e. mutagénesis
mediada por medio de virus oncogénicos)
• la fusión de las células productoras de anticuerpos con células de
mieloma las cuales confieren inmortalidad a las células B.
Cultivos de células vegetales
El cultivo de células vegetales ha surgido como una
alternativa para la obtención de
metabolitos de interés, en especial cuando las plantas son
silvestres, requieren largos periodos de cultivo, tienen
rendimientos de metabolitos secundarios bajos o no se
cuenta con procesos de síntesis química.
Tipos de cultivos de tejidos vegetales
Cultivos en suspension
Cultivos de celulas inmovilizadas
Cultivo de órganos
Cultivo en suspensión
• En las suspensiones, las células
individuales se distribuyen en forma
homogénea a través del medio de
cultivo y por estar rodeadas del
mismo, se facilita la transferencia de
nutrientes y oxígeno hacia el
citoplasma.
Cultivo de células inmovilizadas
• Ésta es una alternativa que ha mostrado en
muchos casos la estimulación del metabolismo
secundario, debido probablemente a una tasa
de crecimiento más lenta que favorece un
mayor flujo de nutrientes y energía hacia este
metabolismo, un mayor contacto célula-célula y
un mayor grado de diferenciación, haciendo
que el ambiente físico-químico sea más
parecido al de la planta.
Cultivo de órganos
• La producción de ciertos metabolitos
está asociada a células muy
especializadas o a la interacción de
células en la planta, que en algunos casos
pueden ser de diferentes tipos celulares;
en estos casos resulta útil cultivar el
órgano o tejido completo.
MEDIOS DE CULTIVOS
• No existen dudas que en todo intento de
propagación vegetal, ya sea in vitro o in vivo, el
carácter del proceso de diferenciación depende
del genoma de la especie, y que está regulado
por el balance hormonal propio y por el estado
fisiológico del órgano, tejido o célula puesta en
cultivo. Sin embargo, también se sabe que ese
balance puede ser modificado por el agregado de
compuestos que imiten la acción de las hormonas
vegetales. Estos compuestos se denominan
reguladores del crecimiento, y se emplean en los
medios de cultivo para conseguir el micro
propagación de una planta.
PRODUCCIÓN DE METABOLITOS
SECUNDARIOS
• Las plantas tienen rutas metabólicas
comunes en las que se producen
azúcares, ácidos grasos,
aminoácidos, proteínas, AND,ARN o
polímeros, lso cuales son necesarios
para su crecimiento y desarrollo.
Medicion del
crecimiento celular
MEDICIÓN DEL NUMERO
DE CÉLULAS
 método directo
a.-recuento
macroscópico
ventajas y desventajas
b.- recuento de placa viable
conteo de células viables
MEDICION DE LA MASA DE
CELULAS
Peso seco de la celula
Turbidez
METODOS INDIRECTOS
• Consumo de nutrientes
• Formación de producto
• Componente de la célula
• Evolución del calor
• Viscosidad
INMOVILIZACIÓN CELULAR
El termino inmovilización de células se refiere a células

físicamente confinadas o localizadas en una cierta región
definida en el espacio reteniendo sus propiedades y
actividades catalíticas.
Asimismo, dependiendo del tipo de inmovilización tanto
las células como las enzimas pueden ser inmovilizadas
de forma permanente o temporal para ser utilizadas
repetida y continuamente en diversos procesos químicos.
Métodos de inmovilización celular
La inmovilización también puede

proporcionar las condiciones favorables a la
diferenciación celular y la comunicación de
célula a célula.
Los métodos de inmovilización celular se
pueden dividir en cuatro matrices principales
• Astillas de madera, colágeno,

Fijación a una intercambio iónico a una
superficie superficie resinas, óxidos
metálicos
Atrapamiento • Cordierita, poro de vidrio,

dentro de acrilamida, alginato, matrices
matrices porosas de Colágeno, K-
porosas carragenina.
• Polilisina contención, etilcelulosa,

Detrás de una
emulsión, barrera sintética
barrera de
contención
• Sedimentos miceliales,
témpanos microbianos,
Auto agregación
polielectrolitos, agentes de
reticulación
Condiciones básicas que debe cumplir un método
 Sencillez de preparación
 Baja toxicidad de la matriz y de los elementos de
preparación
 Bajo costo
 Alta resistencia mecánica
 Baja o nula interferencia en los procesos de
 purificación de productos
 Posibilidad de alternar ciclos de crecimiento y ciclos
de producción y/o biotransformación
GRACIAS POR
SU ATENCION

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• Citoplasma.- Región interna organizada donde se llevan

• Material genético.- Dependiendo de la especie, el ADN

• Requiere células nutricionales mamíferas que son más estrictos

El termino inmovilización de células se refiere a células

La inmovilización también puede

• Astillas de madera, colágeno,

Atrapamiento • Cordierita, poro de vidrio,

• Polilisina contención, etilcelulosa,

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