Metodos Analisis de Agua y Alimentos

MÉTODOS ESTÁNDAR PARA
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO
DE ALIMENTOS Y AGUA
Ms. C. Pedro Arnaldo Alvarado Salinas

ORGANIZACIONES QUE PROPONEN LOS METODOS
ESTANDARES PARA EL ANALISIS DE AGUA Y ALIMENTOS
HOMOGENIZADORES Y DILUYENTES DE LA MUESTRA
DILUCIONES DE LA MUESTRA
Diluyentes: Agua peptonada al 0.1%, solución salina peptonada, agua

de dilución fosfatato buferada de Butterfield, u otro según sea el caso
CANTIDAD DE MUESTRA Y CANTIDAD DE DILUYENTE
±
±
±
ANALISIS MICROBIOLOGICO DE LA MUESTRA
INCUBAR A 29 – 31 ºC POR 48 ± 3 HORAS
REPORTE Y RECUENTO DE RESULTADOS (30 – 300 UFC)

RECUENTO EN PLACA DE MICROORGANISMOS AEROBIOS MESOFILOS
NÚMERO MÁS PROBABLE: RECUENTO EN TUBO
NÚMERO MÁS PROBABLE: RECUENTO EN TUBO
 Útil para determinar cargas microbianas bajas.
 Estimación estadística de la cantidad de bacterias en el alimento.
 Útil para alimentos que presentan partículas, para microbios de

lento crecimiento o cuando han sido sometidos a condiciones
adversas.
 Permite enumerar diversos microorganismos.
 Proporciona una idea aproximada del número de bacterias.
 Permite la inclusión de agentes selectivos.

Metodología de trabajo cuando las siembras son a
partir de muestra original
TÉCNICA DEL NÚMERO MÁS PROBABLE (NMP)
Metodología de trabajo cuando las siembras son a
partir de diluciones de la muestra
Medio de
cultivo
Cantidad
de muestra
El medio de cultivo a utilizar, va a depender del tipo de

microorganismo que se va a enumerar
Pruebas presuntivas
 se utiliza como una etapa de
enriquecimiento que busca
aumentar la concentración de
microorganismo de interés.
 Se considera positivos
aquellos que después de
incubados presenten
enturbiamiento, cambio de
color, formación de gas.
Pruebas confirmativas
 De los tubos positivos de la

prueba presuntiva se
inoculan a la prueba
confirmativa. El número de
tubos positivos y negativos
determinará el Número Más
Probable
 Ejemplo para coliformes
caldo EC.
±
Tabla
Número
Más
Probable
NÚMERO MÁS PROBABLE: RECUENTO DE COLIFORMES
NÚMERO MÁS PROBABLE: RECUENTO DE COLIFORMES
± ±
± ±
±
±
Ejemplo:
10-1 (0.1 g) : 3
p
10-2 (0.01 g) : 0
NMP/g = ---------------
10-3 (0.001 g) : 3
(N * T)1/2
P = Número de tubos positivos = 3 + 0+ 3 = 6
N = Cantidad de muestra en tubos negativos:
0.1 g x 0 = 0
0.01 g x 3 = 0.03 Sumando tenemos: N = 0.03
0.001 g x 0 = 0
T = Cantidad de muestra en todos los tubos:

0.1 x 3 = 0.3
0.01 x 3 = 0.03 Sumando tenemos: T = 0.333
0.001 x 3 = 0.003
6
NMP/g = ----------------------- NMP/g = 60
(0.03*0.333)1/2
 Ventajas
 Sencillo
 Es más probable que los resultados coincidan
entre laboratorios a diferencia del recuento en
placa.
 Con medios selectivos y diferenciales se puede
determinar el número de microorganismos a
que grupo pertenecen.
 Desventajas
 Gran cantidad de material
 No se puede observar la morfología de las
colonias
 Poco exacto
Para comprobar la calidad microbiológica de cualquier superficie
ha de frotarse más de un área.
Las torundas con la muestra deben colocarse en solución Ringer y

después de un contacto no inferior a 5 minutos con la solución
Ringer, agitar enérgicamente.
El examen debe realizarse tan pronto como sea posible, y en

cualquier caso dentro de las 6 horas de la toma de muestra.
Realizar las diluciones que se consideren necesarias.
º
MÉTODO DE MEMBRANA FILTRANTE
 Método para trabajar muestras con bajo contenido

microbiano.
 Se puede emplear para el análisis normalizado de agua. Aire,

soluciones de azúcar y ciertas bebidas.
 Se ha demostrado su eficiencia para la separación de fagos y

bacterias y para la esterilización de líquidos, incluyendo
medios de cultivo.
 Permite enumerar diversos tipos de microorganismos,

empleando medios de cultivo adecuados para cada microbio
en particular.
El filtro de membrana consiste en un disco delgado
y poroso compuesto de acetato de celulosa o de
una mezcla de esteres de celulosa.
 Los más apropiados para trabajos de bacteriología

son aquellos con poro de 0,43 a 0,47 µm de
diámetro.
PROCEDIMIENTO:
 Colocar la membrana filtrante sobre el portafiltro.
 Verter 100 mL de muestra en el embudo y filtrar.
 Sacar la membrana y colocarlo sobre el medio de

cultivo.
 Llevar a incubar.
RESULTADOS:
 Contar las colonias en la membrana.
 Expresar los resultados como u.f.c. por mL o por 100 mL.
 Considerar el volumen filtrado y el factor de dilución.
REGLAS PARA EL CONTEO:

 Si hay 1 o 2 colonias por cuadrado del retículo, se cuentan todas.
 Si hay entre 3 y 10 por cuadradito, se cuentan 10 cuadrados, se saca el promedio y
se multiplica por 100, para obtener el número de colonias en el filtro.
 Si hay entre 10 y 20 se cuentan 5 cuadrados y, el promedio, se multiplica por 100.
 Si hay más de 20 se considera mayor de 2000.
 Toda vez que se utilice el promedio por cuadrado, e l recuento se informa como
estimado.

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MÉTODOS ESTÁNDAR PARA

Ms. C. Pedro Arnaldo Alvarado Salinas

Diluyentes: Agua peptonada al 0.1%, solución salina peptonada, agua

INCUBAR A 29 – 31 ºC POR 48 ± 3 HORAS

REPORTE Y RECUENTO DE RESULTADOS (30 – 300 UFC)

 Útil para determinar cargas microbianas bajas.

 Estimación estadística de la cantidad de bacterias en el alimento.

 Útil para alimentos que presentan partículas, para microbios de

 Permite enumerar diversos microorganismos.

 Proporciona una idea aproximada del número de bacterias.

 Permite la inclusión de agentes selectivos.

El medio de cultivo a utilizar, va a depender del tipo de

 De los tubos positivos de la

T = Cantidad de muestra en todos los tubos:

Las torundas con la muestra deben colocarse en solución Ringer y

El examen debe realizarse tan pronto como sea posible, y en

 Método para trabajar muestras con bajo contenido

 Se puede emplear para el análisis normalizado de agua. Aire,

 Se ha demostrado su eficiencia para la separación de fagos y

 Permite enumerar diversos tipos de microorganismos,

 Los más apropiados para trabajos de bacteriología

 Colocar la membrana filtrante sobre el portafiltro.

 Verter 100 mL de muestra en el embudo y filtrar.

 Sacar la membrana y colocarlo sobre el medio de

REGLAS PARA EL CONTEO:

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