Dicroismo Circular

Dicroísmo
Circular:
análisis de proteínas
Ajghjf0036685
6
Introducción
El dicroísmo circular se refiere a la diferencia
de absorción de luz entre luz circular
polarizada derecha e izquierda. La diferencia
de absorción entre la luz derecha e izquierda
crea un haz de luz resultante el cual sirve
para el análisis de la estructura secundaria
de proteínas, así como su plegamiento.
Principios
Haz de luz polarizado en un plano: Vibración
en un solo plano.
Superposición de dos ondas
polarizadas
Polarización Circular
Si los dos haces de luz superimpuestos, aún
con la misma amplitud y longitud de onda se
superimponen PERO desfasados 90 o -90
grados, se obtiene una polarización circular:
el haz resultante ya no está polarizado en el
plano.
Polarización Circular
Desfasados 90 y -90 grados: Los picos y los cruces del

plano de los dos haces ya no coinciden.
El haz que gira en sentido de las manecillas del reloj se le
llama onda polarizada circular derecha (ED) y en el
sentido contrario se le denomina onda polarizada circular
izquierda (EI).
Lo mismo pero al revés
Dos haces circulares

suman un haz polarizado
en plano.
Interacción con Materia
Al interactuar con materia, la luz sufre dos
fenómenos principales:
1. Absorción: la materia absorbe una parte de
la luz por lo que disminuye su amplitud
(intensidad).
2. Cambio en velocidad (refracción): cuando la
luz pasa de un medio a otro.
Interacción con Materia
Absorción Refracción
Concepto: Dicroísmo Circular
Dicroísmo circular (CD):Cuando una muestra absorbe el rayo ED de una manera diferente
(mayor o menor) al EI. Al salir de la muestra el rayo no se encuentra polarizado circular ni
planarmente, sino elípticamente:
Concepto: Birrefringencia
La misma diferencia pero con refracción en vez de absorción, crea dispersión óptica
rotatoria (ORD):
Y la suma de ambos...
Estos fenómenos provocan una

rotación del plano de
polarización en un ángulo alpha
y la distorsión de este plano
también genera una elipse.
Equipo general
• El proceso empieza con
un rayo de luz polarizada.
La polarización va
cambiando
periódicamente.
• Al pasar por la muestra, el

detector identifica si una
molécula es ópticamente
activa, ya que habrá un • La variación está directamente
cambio en la absorción en relacionada con el DC de la muestra a
algún período de esa longitud de onda. Al hacer un
polarización especial y la barrido de varias longitudes se obtiene
luz transmitida variará. el espectro completo de DC. Que lleva
a las interpretaciones.
Características
Equipo de DC
importantes
Debe contar con fuente de
luz polarizada.
Cuenta con generador de
radiación (carburo de silicio)
que se filtra y polariza.
Un modulador fotoelástico
(cristal) produce la
radiación circularmente
polarizada.
La muestra se coloca
disuelta en un solvente
adaptado a longitud de
onda deseada.
Aplicaciones
● Determinación de estructura secundaria de
proteínas
● Estudio de cambios de entorno (pH, temperatura,
etc.)
● Determinación de conformación de ácidos
nucleicos
● Estudio de interacciones proteína - proteína
Interpretación
La diferencia en la absorción entre el ED y el
EI es muy pequeña, es usualmente entre
1/100 y 1/10 de un porciento, sin embargo se
puede determinar de una manera muy
precisa. Con estos datos se puede obtener la
elepsicidad de la muestra.
Para poder comparar los valores de
elipcicidad, se tienen que normalizar los
valores, obteniendo la elipsicidad molar
específica por residuo. Se debe de
considerar la longitud del trayecto (l), la
concentración ( c ), la masa molecular (M) y
el número de residuos (nr).
Para analizar la estructura secundaria de las
proteínas, cada estructura secundaria básica
(hélice alfa, lámina beta o espiral) tiene un
espectro de DC característico. Por lo tanto
una proteína que consiste de estas tres
diferentes estructuras debe de contener el
espectro característico de cada una. Para
interpretar estas gráficas se han creado
gráficas estándar de proteínas con estructura
conocida.
Estas interpretaciones tienen algunas
limitaciones inherentes al método, por
ejemplo no se considera las interacciones
que pudieran tener los cromóforos entre
otras regiones de la proteína y otros
elementos, es por eso que el método no es
muy exacto. Sin embargo este método es
muy confiable para monitorear cambios en la
conformación de proteínas en diferentes
condiciones (estudios de desnaturalización,
plegamiento, etc.)
Cada estructura secundaria tiene
diferentes características del
espectro DC en UV:
Alfa Hélice:
• Bandas negativas en 222 y 208
nm.
•Bandas positivas a 193 nm.
Láminas Beta-plegadas:
• Bandas negativas a 218 nm y
positivas a 195nm.
Para la conformación de espiral:
• + a 212nm
• - A 195 nm
Ejemplo
Industria Técnicas de Producción

Biotecnológica purificación de proteínas
Desplegamiento de
proteínas
Incremento de condiciones desnaturalizantes Disminuye la estabilidad de la
– Temperatura proteína
– Químicos (urea) → Se despliega
– pH extremo
CD es una técnica muy útil

debido a que los espectros de
proteínas plegadas y
desplegadas son muy diferentes.
(Figura 1)
La transición de desplegamiento
se puede terminar escogiendo
una longitud de onda donde la
diferencia en la señal de proteína
plegada y no plegada sea muy
grande.
Figura 1. Características del espectro en α-hélices, β-
plegada y espirales aleatorios.
Dicroísmo Circular: Efecto del pH y del uso de agentes
desnaturalizantes
• Espectro de dicroísmo circular de una apomioglobina (apoMb)

como función de condiciones desnaturalizantes.
• Transición de desplegamiento inducida por pH y por urea

(@222nm)
Fuentes
1. http://www.informatics.indiana.edu/predrag/classes/2008springi619/week4_m.pdf
2. http://www.biomachina.org/courses/structures/052.pdf
3. http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/exposicion_dicroismo_circular_5050.pdf
4. http://www.photophysics.com/products/chirascan-cd-spectrometer
5. http://www.ruppweb.org/cd/cdtutorial.htm
6. Correa, D. & Ramos, C. (2009). The use of circular dichroism spectroscopy to study protein folding,
form and
function. African Journal of Biochemistry Research 3(5): 164-173
7. http://download.springer.com/static/pdf/362/art%253A10.1007%252Fs00249-004-
0401- 8.pdf?auth66=1381682487_9868968b74f62d1b6e43d068d89b501b&ext=.pdf

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