Tcnicas

Histopatolgica
sI
Dra. Claudia Aracely Velis
Cabezas
Patloga
 Bibliografa
Laboratorio de Anatoma Patolgica.
Raimundo Garca del Moral.
1. Edicin
Editorial Interamericana Mc. Graw Hill

Mtodos de Laboratorio. Lynch.

Raphael, Meller, Spare, et. Al.
2a. edicin
Editorial Interamericana Mc. Graw Hill

Patologa. Ciencias Bsicas de Medicina

Andrade Rafael, et al.
1. Edicin.
Corporacin para Investigaciones Biolgicas
 Contenidos

Introduccin
Biopsia
Tipos de biopsias
Manejo adecuado de las biopsias
Tcnica histopatolgica.
 Biopsias

Biopsia:
Fragmento de tejido obtenido
de un ser vivo para su
estudiado al microscopio por
un mdico patlogo y la
obtencin de un diagnstico
preciso.
 Biopsias

Tipos de biopsias:
Endoscpicas
Por puncin
Incisionales
Excisionales
Piezas quirrgicas
 Tipos de biopsias

Endoscpicas:
Obtenidas por medio de
instrumentos a travs de cavidades
naturales: Ej. gastroscpicas,
broncoscpicas, colonoscpicas,
rectosigmoidoscopicas,
cistoscpicas, colposcpicas, etc
Biopsias endoscpicas
 Tipos de biopsias

Por puncin:
Se utiliza en lesiones de tamao
grande o pequeo (ej. Piel), en
lesiones de rganos o tejidos
profundos y generalmente obtenida a
travs de la piel, por ejemplo: Pleura,
hgado, rin, prstata, mama,
mdula sea, etc. Su limitante radica
en la representatividad de la
muestra.
Biopsia por puncin
 Tipos de biopsias
Biopsia incisional
Se obtiene por medios quirrgicos
slo una porcin de la lesin con fines
diagnsticos.
Se recomienda en lesiones de gran
tamao, en las que ser necesario
programar posteriormente una
intervencin quirrgica de mayor
extensin.
 Tipos de biopsias

Biopsias excisionales
Es cuando dentro de la
muestra obtenida por medios
quirrgicos se incluye la
totalidad de la lesin que
motiv el procedimiento.
Biopsia excisional
 Tipos de biopsias
Piezas quirrgicas:
Tejidos u rganos extirpados
quirrgicamente en mayor o menor
extensin con fines teraputicos.
Mediante su estudio anatomopatolgico
podremos emitir, confirmar, precisar, o
modificar un diagnstico as como
determinar la extensin de las lesiones y
comprobar si estas han sido extirpadas
en su totalidad.
Piezas quirrgicas
Piezas quirrgicas
 Biopsias
Manejo inicial de las biopsias:
Colocar en lquido fijador.
Frasco adecuado.
Identificacin del frasco
Solicitud de estudio
histopatolgico
Manejo inicial de las biopsias

Recepcin de la muestra en el
Servicio de Patologa.

Descripcin de la muestra y
seleccin del material a estudiar.
Muestra y boleta
Descripcin macroscpica
Talla de las muestras
 Tcnica histopatolgica

Tcnica Histopatolgica:
La tcnica histopatolgica
comprende la preparacin de
los tejidos para su estudio
microscpico sometiendo a la
totalidad o a una parte del
tejido a estudiar a una serie de
procesos:
Tcnica histopatolgica

1- Fijacin.
2- Deshidratacin.
3- Aclaramiento.
4- Inclusin.
5- Corte.
6- Tincin.
7- Montaje.
 Tcnica histopatolgica
Fijacin
Es el proceso mediante el cual los
tejidos o sus componentes
celulares permanecen estables en
su estado fsico y parcialmente en
su estado qumico, evitando as el
deterioro provocado por la
autolisis y la putrefaccin.
 Fijacin

Objetivos de la fijacin
Evitar la descomposicin.
Evitar la distorsin de los
tejidos o la prdida de ellos.
Resistir el tratamiento
sucesivo con los reactivos
durante el procesamiento
 Fijacin
La fijacin debe comenzar
inmediatamente se ha obtenido la
muestra de tejido.
La fijacin es para ustedes el paso ms
importante del proceso histopatolgico
por:
Puede ser iniciado por el personal mdico o
paramdico.
Los cambios por autolisis y putrefaccin no
son reversibles.
 Fijacin

Mecanismo de accin de los

fijadores:
La mayora de ellos acta a
travs de la desnaturalizacin o
precipitacin de las protenas.
 Fijacin
Principios generales para
una fijacin adecuada:
1- Recipiente adecuado. No
colocar muestras diferentes en
un mismo frasco.
2- Volumen de fijador adecuado
(10-20 veces el volumen de la
muestra).
 Fijacin
Principios generales para una
fijacin adecuada (cont.)
4- El fijador debe cubrir todas las
caras de la pieza.
5- Sealar los lmites quirrgicos de
la muestra si es necesario.
6- Diseccin de la pieza si es
necesario.
 Fijacin

Formaldehdo. (Formalina o
formol)
El formaldehdo comercial es una
solucin saturada de gas formaldehdo
en agua al 40%. (Formalina pura)
Normalmente se utiliza al 10%
Velocidad de penetracin en los
tejidos: 1mm por hora.
 Formaldehido

Ventajas del formol

- Bajo costo econmico.
- Es fcil de preparar.
- Relativamente estable. Tiene
buena penetracin en los
tejidos.
- No endurece demasiado los
tejidos ni los vuelve
quebradizos.
 Formaldehido

Desventajas:
Puede producir dermatitis en el
personal que lo emplea.
Es irritante para las fosas nasales.
 Fijacin

Otros fijadores
utilizados:
Alcohol etlico.
cido actico.
 Tcnicas histopatolgicas

DESHIDRATACIN
Es el proceso por el cual el agua
tanto intra como extracelular que
contienen los tejidos es eliminada
para posteriormente ser
reemplazada por parafina.
El mejor agente a este respecto es el
alcohol etlico (etanol).
 Deshidratacin

Un esquema de deshidratacin:
Alcohol al 80% enjuague
Alcohol al 90% 1 hora
Alcohol al 100% 1
hora
 Tcnicas histopatolgicas
ACLARAMIENTO
Proceso por el cual se consigue la
sustitucin del agente deshidratante
por una sustancia miscible con el
medio de inclusin que va a utilizarse.
El aclaramiento permite que el alcohol
de los tejidos sea reemplazado por
parafina.
 Aclaramiento
El agente aclarante ms utilizado es el
xilol o xileno, un derivado del petrleo.
Ventajas:
Buen agente aclarante.
Barato.
Desventajas:
Vuelve a los tejidos excesivamente
duros y quebradizos.
 Aclaramiento

Un esquema de aclaramiento:

Xilol Enjuage
Xilol 1 hora.
Xilol 1 hora.
Procesador automtico de tejidos
Procesador automtico de tejidos
 Tcnicas histopatolgicas
IMPREGNACIN O
EMPARAFINAMIENTO
Luego que el tejido se encuentra
debidamente aclarado se procede
a su impregnacin en parafina.
Para ello, se sumerge la muestra
en parafina lquida (punto de
fusin: 55C aprox.) para que sta
ocupe el lugar del xilol.
 Impregnacin

El objetivo de la impregnacin es
rellenar o infiltrar completamente la
muestra histopatolgica con el medio
que se va ha utilizar para la inclusin
del tejido.

Parafina a 60 C 3 horas
Estufa
Tcnicas histopatolgicas

INCLUSIN
Es la impregnacin de los tejido
con un medio que llene todas las
cavidades naturales, espacios e
intersticios tisulares y aun los
espacios intracelulares.
 Inclusin

El objetivo de la inclusin es
proporcionar la consistencia
firme necesaria para hacer
cortes bastante delgados sin
provocar distorsin y sin alterar
las relaciones espaciales del
tejido y los elementos celulares.
 Inclusin
Los medios de inclusin ms
frecuentemente utilizados son
parafina o una mezcla de
parafina y polmeros plsticos
(Paraplast)
El resultado de la inclusin es un
bloque de parafina que contiene
la muestra de tejido.
 Inclusin
INCLUSIN EN PARAFINA
La parafinas son hidrocarburos que
pueden obtenerse con una gran
variedad de puntos de fusin. ( 52 -
60C)
Es el ms simple.
Ms usado.
Es el mejor para el trabajo habitual.
 Inclusin

Tcnica:
La parafina lquida a 2C sobre
su punto de fusin.
Apertura de los receptculos
Se prepara un molde. Luego se
llena con parafina lquida.
 Inclusin

Introduccin del corte con

pinzas.
Solidificacin.
Bao de hielo o agua fra.
Eliminacin del exceso de
parafina (desvastado).
 Tcnicas histopatolgicas

CORTE
Una vez que se obtiene el
bloque de tejido se procede a
realizar los cortes del mismo,
para lo cual se utiliza un
micrtomo.
 Corte
Micrtomo:
Instrumento para cortar rebanadas
muy delgadas de tejido para
estudio microscpico.
Hay diferentes tipos de
micrtomos, sin embargo, el ms
usado en nuestro medio es el
micrtomo rotatorio.
Micrtomo rotatorio
 Corte

Se verifica el grosor adecuado

del corte (4 a 6 micras).
Se numeran los portaobjetos con
un lpiz de punta de diamante.
Se inician los cortes.
 Corte

Se toman los cortes, se colocan

sobre la lamina portaobjeto y la
serie de cortes se hace flotar
luego sobre la superficie del agua
del bao de flotacin. La
temperatura del agua es de 45C.
Corte
Corte
Corte
 Corte

Cuando los cortes se han aplanado

se introduce la laminilla numerada
perpendicularmente a la superficie
del agua. Se acerca la laminilla al
corte y se levanta con el
movimiento uniforme .
Se deja escurrir por 2 a 5 minutos.
 Tincin

TINCIN
OBJETIVO:
La tincin del corte permite
estudiar y conocer las
caractersticas fsicas de los
tejidos y las relaciones entre las
clulas que los constituyen.
 Tincin
TINCIN CON HEMATOXILINA EOSINA
(H&E)
La tincin standard en histopatologa
es la hematoxilina eosina. Esto es
debido a la extraordinaria riqueza de
matices rosados y rojos que provoca la
tincin con eosina a lo que se suma la
excelente definicin nuclear originada
por la hematoxilina.
 Tincin

Con H&E el ncleo se colorea de

azul oscuro a negro (basfilo) por
la hematoxilina y el citoplasma
adquiere un color rosado
(eosinfilo) por la eosina.
H&E
 H&E

Resultados:
Ncleos: de pardo negruzco a azul
negro.
Eritrocitos, msculo, grnulos
eosinfilos: rojo brillante.
Citoplasma, protenas del lquido
de edema: rosa plido.
H&E
 Tcnicas histolgicas
MONTAJE
Impregnacin del corte de tejido
con un medio transparente de
ndice de refraccin cercano al
vidrio y al ndice de refraccin
medio del tejido.
Proteccin del frotis contra
agentes fsicos, qumicos,
blaqueamiento, oxidacin, etc.
 Montaje

Medios de montaje ms
utilizados:

Merckoglass
Blsamo del Canad.
Otras tinciones histoqumicas
Otras tinciones utilizadas en
histopatologa:
Giemsa: Bacterias, cromatina.
cido Perydico de Schiff (PAS):
Mucopolisacaridos, memb. basales, etc.
Mucicarmn: Moco
Van Gieson: Colgena
Reticulina: Fibras reticulares
Tricrmica de Masson: Colgena
Otras tinciones histoqumicas

Rojo Congo: Amiloide

Perls: Hierro
Sudn: Lpidos
Ziehl-Neelsen: Bacilos alcohol
cido resistentes
Gram: Bacterias
Gomori Groccott: Hongos
Gomori Grocott
Zielh Neelsen
Perls
Sudn
PAS
PAS
GIEMSA
Rojo congo
Fontana Masson
Tricrmico de Masson
Reticulina