Aislamiento e Identificacion de Listeria Monocytogenes

HOSPITAL NACIONAL DOCENTE MADRE NIO
SAN BARTOLOME
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
Aislamiento e
identificacin de
Listeria
monocytogenes
en muestras clnicas
Lic. TM JUAN C. RIVEROS
QUINTANA
Listeriosis y Listeria
monocytogenes
Durante ms de 70 aos
Listeria
monocytogenes ha sido reconocido
Como un agente patgeno humano ,
causa infecciones principalmente , en
mujeres
embarazadas
y
recin
nacidos, tanto como en pacientes con
immunosupresin grave como VIH, en
diabetes mellitus , en la insuficiencia
heptica, pacientes con tratamiento
de cncer y en hemodilisis.
Listeria monocytogenes
Aislada en 1926 por Murray, Webb y
Swann
( Murray, R. G. D., et al. J. Path Batc.,
29:407, 1926).
Distribucin geogrfica : mundial. LM est
ampliamente distribuido entre la
vegetacin, suelo y en el intestino del
hombre y los animales.
En el hombre: Afecta al grupo neonatal,
Produce Aborto listrico, sepsis,
meningitis, Endocarditis, Abscesos
externos y endoftalmitis.
En los animales: Afecta al ovino,
caprinos, bovinos, alpacas. LM
puede causar mastitis en vacas, raro
en cerdos, perros, conejos , cobayos,
aves.
Produce Encefalitis mas frecuentes
en los rumiantes, sepsis ms
corriente en los roedores y las aves.
Puede ocurrir infeccin uterina en la
vaca antes del sptimo mes de
Preez.
EPIDEMIOLO
GA
GRUPOS DE RIESGO
Mujeres embarazadas, neonatos, inmunosuprimidos
DISTRIBUCIN DE CASOS
30% Asociados a embarazo (10-20 casos/100.000 nacimientos
vivos)
Mujeres embarazadas
Mortalidad: < 5%
Prdida fetal: 15-25 %
Neonatos
Mortalidad: hasta 63 %
70% Adultos
50% de los pacientes son mayores de 70 aos
90% de los pacientes tienen enfermedad subyacente
Mortalidad: hasta 35%
Listeriosis en el adulto
La meningitis o meningoencefalitis es
la forma clnica ms comn en adultos
sobre todo en mayores de 50 aos.
Antes de la existencia de los
antibiticos, la letalidad era de 70%.
Complicacin de individuos debilitados,
alcohlicos, diabticos o en pacientes
con neoplasias.
Listeriosis Perinatal
La infeccin se transmite va
transplacentaria, va ascendente o durante el
parto.
Listeriosis neonatal de inicio temprano puede
tener secuelas como hidrocefalia o retraso
psicomotor.
Listeriosis neonatal de inicio tardo es bajo
(10 a 20 %). Se relaciona con la aspiracin de
fluido infectado.
FISIOPATOGENIA
Va de infeccin
Transplacentaria - ascendente
MECANISMOS DE PATOGENICIDAD
En el interior la PrfA pasa a estado activado (PrfA*) e induce la expresin de los genes
necesarios para la
invasin de la clula husped (interlaninas LnlA y LnlB), lisis del fagosoma (listeriolisina
O o LLO),
fosfatidilinositol especfico de fosfolipasa C (PI-PLC) y fosfatidilcolina (PC-PLC),
L.. Monocytogenes sobreviven y se multiplican dentro

del citoplasma de las clulas y se extienden a clulas
adyacentes sin dejar el ambiente de citoplasmtico
(Tilney and Portnoy, 1989, J. Cell Biol. 109:1597)
MECANISMOS DE
PATOGENICIDAD
Adhesin e internalizacin
Fagocitosis inicial
Endofagocitosis
vacuolar
Disolucin de la membrana del Fagosoma
Lisis del fagosoma

Primario
" Nubes" del material de fibrilar (la polimerizacin de actina)
Polimerizacin de Actina y migracin

bacteriana
Cometas de Listeria (la polimerizacin de actina)
Polimerizacin de Actina y migracin

bacteriana
Proyecciones semejante a Pseudopodos
Formacin de
Filopodias
Listeria Fagocitada dentro de un

Fagosoma de doble membrana
Diseminacion celular y Lisis vacuolar

segundaria
MECANISMOS DE PATOGENICIDAD
Ciclo de Vida intracelular
InlA,Inl
B 1
1) Adhesion e
internalizacion bacteriana.
LLO/PLC-PI
2) Endofagocitosis
vacuolar
3) Lisis del fagosoma
Primario
3
4
6
5
Acta
4) Proliferacion bacteriana
citoplasmatica
5) Polimerizacion de
Actina y migracion
bacteriana
6) Formacion de Filopodias
7) Diseminacion celular y
Lisis vacuolar segundaria.
Listeriosis durante el embarazo

IMPORTANCIA CLNICA :
INFECCIONES EN
HUMANOS
Factores:
Mujeres embarazadas tiene 20
veces mas probabilidad de
desarrollar listeriosis que otros
adultos sanos (CDC, 1998)
Un tercio de todos casos de
listeriosis ocurren durante el
embarazo (CDC, 1998)
Listeriosis pueden causar aborto
espontneo
muerte
fetal,
enfermedad grave o la muerte al
recin nacido (Schlech, 2001).

De las infecciones fetales Uno
en cinco resulta en mortinato
.
Los sntomas para la madre
pueden ser asintomtico
semejante a gripe
Es
de importancia capital
considerar
siempre
el
diagnstico de listeriosis en
embarazadas con elevacin
de la temperatura de origen
desconocido y trabajo de
parto pretrmino.

El embarazo, la fisiologa, y listeriosis
Las mujeres embarazadas son ms susceptible
porque:
Los niveles de progesterona se incrementa en
tercer trimestre de Embarazo
= bajan Las
funciones inmunes = menos riesgo de rechazo
del
feto=
mayor
riesgo
de
ciertas
enfermedades.
Los adultos saludables destruyen a LM en el
tracto gastrointestinal (zona digestiva).
LM puede diseminarse mas fcilmente en el
torrente sanguneo en las mujeres embarazadas.
Impacto sobre feto y Neonato

Perinatal
Infeccion intrauterina amnionitis, Trabajo pretermino,
aborto espontaneo, mortinato, o infeccion de inicio temprano
en el neonato.
Infeccion Neonatal
Listeriosis de inicio temprano
- La infeccin en tero
- Hasta 7 da despus del parto
Pretrmino, bajo peso al nacer ,
- Mayor sntoma: Sepsis.
- Puede haber problemas respiratorios, cianosis, apnea,
neumona , Microabcesos diseminados
(granulomatosis
infantisepticum). Mortalidad alrededor de = 15 50%
Impacto sobre feto y Neonato

Neonato
Infeccin despus del parto : canal de parto,
contaminacin fecal , cuidados hospitalarios, ambiente
de hospital.
Infeccin del recin nacido.

Listeriosis de inicio tardio
-> 5 - 7 da despus del parto
- Sntoma
muy importante = meningitis
- Puede haber :
fiebre ,pobre alimentacin, irritabilidad,
colitis .
- Alto % de nios tendrn secuelas Fsico y neurolgica
- Mortalidad alrededor de = 10 20% . Se relaciona con
la aspiracin de fluido infectado.
Listeriosis en adultos
inmunocomprometidos
- Bacteremia que puede continuar con
meningitis.
- A nivel del SNC se presenta
meningoencefalitis,
cerebritis y abscesos.
- Otros tipos de infeccin incluyen artritis
sptica,
osteomielitis, abscesos hepticos,
colecistitis,
Serotipificacin
Mtodo clsico
basado en antgenos
somticos O
y flagelares H , 13 serotipos.
> del 95% de los aislamientos humanos
pertenecen
a los serotipos 1/2a, 1/2b y 4b
Serotipo 4b, 50% de casos de listeriosis en el
mundo.
En los casos espordicos predominan los
mismos serotipos, aunque la frecuencia del
serotipo 4b es menor que la de los serotipos
IDENTIFICACIN
GENERO LISTERIA
El Genero Listeria incluye actualmente seis
especies:
L. monocytogenes,
L. ivanovii, L.
seeligeri,
L. innocua, L. welshimeri, y L. grayi.
Dos de estas especies,
L. monocytogenes y
L. ivanovii, son potencialmente patgenos.
Listeria Identificacin
CARACTERISTICAS GENERALES
Bacilos Gram-positivos, coco bacilos
pleomorficos (0.52 0.40.5 m) .
Son mviles a 22C por flagelos peritricos.
Crecen desde 0.5 - 45 C optima 35 -37C.
Concentracion de sal 10% ClNa .
Poseen un metabolismo anaerobio
facultativo.
Son catalasa-positiva y oxidasa-negativa.
DIAGNSTICO
EXAMEN DIRECTO DE LAS MUESTRAS
SEC. CERVICALES.
SEC. VAGINALES
LOQUIOS
SANGRE DEL CORDON.
MECONIO.
SANGRE.
LCR.
SEC. CONJUNTIVAL.
LIQ. AMNIOTICO
DIAGNSTICO
EXAMEN DIRECTO DE LAS MUESTRAS
Tincin de Gram de:

Lquido cefalorraqudeo ( La sensibilidad
de la Col. Gram del LCR en Listeria es de
3040 % )
Lquido amnitico
Listeria monocytogenes en frotis de LCR
teido por Gram se puede confundir con:
Streptococcus pneumoniae
Corynebacterium
Haemophilus influenzae
CULTIVO Y AISLAMIENTO
Fluidos normalmente estriles (sangre,
lquido cefalorraqudeo, lquido amnitico):
Agar sangre, agar/caldo infusin cerebrocorazn, caldo thioglicolato
Muestras contaminadas (heces,
alimentos):
Agar Oxford , Palcam.
Incubacin a (4C) 35-37C hasta por 7
das.
PROCEDIMIENTO EN CASO DE HEMOCULTIVOS

POSITIVOS
Incubacin
35 C
Subcultivo con
Observacion de crecimientos en
los medios
Placas a utilizar
Incubacin 35
CONDICIONES DE CULTIVO
Aerobio-Anaerobio
facultativo
Desarrolla mejor
en
microaerfilia.
Temperatura
0.5 - 45 C. optima
37
Influencia de PH
Optimo a 7.5 no
desarrolla 5.6
crece
Coloracin Gram a partir del Caldo

de hemocultivo
CULTIVO EN MEDIO SLIDO:

Agar Sangre: Despus de 24 a 48 horas en estufa a 35C,
colonias (12 mm de diametro ) despues de 12 dias de
incubacin , rodeados de una zona de hemolisis.
Crecimiento en agar
sangre
Zona de
hemolisis
Streptococcus
agalatiae
Listeria
monocytogenes
Streptococcus
pyogenes
Cocobacilos Gram (+) cortos que tienen

tendencia a aparecer empalizada en cadenas
cortas de 3 a 5 microorganismo presenta una
tpica disposin en difteroide
Tincin de Gram
CATALASA
(+)
BIOQUIMICA
()
Cit
S2
H
()
TSI
()
Ure
a
()
Mot
( +)
( +)
Gel Bilis-Esculina ClNa

6.5%
( +)
( +)
37C
22
C
Motilidad 22 C
Motilidad 37 C
Agar sangre de carnero 5 %

Cepa de Staphylococcus
aureus ATCC 25923
CAMP
(+)
CAMP Positiva
Streptococcus agalatiae
CAMP Positiva
Antibiograma para Listeria

monocytogenes
El nico mtodo validado
para la realizacin de
antibiogramas en Listeria
es la microdilucin en
caldo.
No existe estandarizacin,
puntos de corte ni
categoras interpretativas
para realizar
antibiogramas por disco
difusin, por lo cual no se
recomienda su prctica.
2010
Antibiograma para Listeria

monocytogenes
Los nicos antimicrobianos
sugeridos para prueba in vitro por
microdilucin en caldo son:
Ampicilina
Penicilina G
Trimethoprim/sulfamethoxazole
Los aislamientos No susceptibles
a Penicilina G y Ampicilina deben
ser enviados a un laboratorio de
referencia para su confirmacin.
Aunque: Rifampin, Linezolid,
macrlidos, Amikacin,
Fluoroquinolonas, cefalosporinas y
carbapenmicos pudieran aparecer
activos in Vitro, no deben ser
informadas ante su posibilidad de
ineficacia clnica.
MIC Penicilina : 0.125 ug/ml. :
GRACIAS

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L.. Monocytogenes sobreviven y se multiplican dentro

Disolucin de la membrana del Fagosoma

Lisis del fagosoma

" Nubes" del material de fibrilar (la polimerizacin de actina)

Polimerizacin de Actina y migracin

Cometas de Listeria (la polimerizacin de actina)

Polimerizacin de Actina y migracin

Proyecciones semejante a Pseudopodos

Listeria Fagocitada dentro de un

Diseminacion celular y Lisis vacuolar

Listeriosis durante el embarazo

Listeriosis durante el embarazo

Listeriosis durante el embarazo

Impacto sobre feto y Neonato

Impacto sobre feto y Neonato

Infeccin del recin nacido.

Tincin de Gram de:

PROCEDIMIENTO EN CASO DE HEMOCULTIVOS

Coloracin Gram a partir del Caldo

CULTIVO EN MEDIO SLIDO:

Cocobacilos Gram (+) cortos que tienen

Gel Bilis-Esculina ClNa

Agar sangre de carnero 5 %

Antibiograma para Listeria

Antibiograma para Listeria

MIC Penicilina : 0.125 ug/ml. :

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