EXPOSICION No 5. Proteínas Del Suero Sanguíneo

CUANTIFICACIN DE PROTENAS EN EL SUERO SANGUNEO
Jhoan Sebastian Espinosa Echeverri Sara Isabel Ospina Patio Melissa Riascos Chica
PROTENAS
Son polipptidos constituidos por cadenas lineales de aminocidos unidos por enlaces peptdicos. Se sintetizan desde el extremo amino al extremo carboxilo terminal
FUNCIONES
-Organizacin estructural de las clulas y los tejidos -Contraccin muscular -Respuesta inmunitaria -Coagulacin de la sangre -Catlisis de reacciones metablicas -Transmite informacin entre clulas
CLASES DE PROTEINAS
PROTENAS FIBROSAS
Presentan una conformacin alargada y filamentosa, con estructuras secundarias bien definidas Piel Tejido conjuntivo Hueso Vasos sanguneos Msculo Uas o pelo
PROTENAS GLOBULARES
Hemoglobina
Tienen una conformacin casi esfrica, sus funciones son dinmicas, y casi siempre se derivan de la capacidad de unin y accin que tienen sobre otras sustancias.
Protenas en el suero sanguneo
La sangre es un tipo de tejido conjuntivo especializado, con una matriz coloidal lquida y una constitucin compleja. Como todo tejido, la sangre se compone de clulas (glbulos rojos, glbulos blancos y plaquetas) y componentes extracelulares (el plasma).
PLASMA SANGUNEO
El plasma es un fluido traslcido y amarillento, que representa la matriz extracelular lquida en la que estn suspendidas las clulas sanguneas. Las protenas constituyen el 70% de los componentes del plasma :
Fibringeno (7%) Inmunoglobulinas (38%) Albminas (54%) Otras protenas (1%): transferrina, protombina, VLDL, LDL, HDL
En la actualidad se han aislado y caracterizado alrededor de 100 protenas, sin embargo las funciones de una gran parte de ella permanecen an desconocida.
ALBMINA
Es la protena ms abundante del plasma (54%). Es el responsable del control de la presin osmtica intravascular . Su funcin principal es transportar numerosas sustancias (aminocidos, cidos grasos, enzimas, drogas, hormonas tiroideas y productos txicos), especialmente cidos grasos y medicamentos. Cada molcula de albmina puede unir hasta 10 unidades de cidos grasos libres.
GLOBULINAS
Es un conjunto heterogneo de protenas que alcanzan una concentracin en la sangre entre 1.8 -3.5 gr por 100 mL, y que a veces se designan como , ,-globulinas. Entre las ms importantes estn las siguientes:
-globulinas: hay gluco y lipoprotenas, esta ltimas actan como transportadores de diferentes tipos de lpidos. Un ejemplo es la protombina conocida como el factor II, es requerida para la va de la coagulacin sangunea, donde se convierte en trombina por el factor V. Su disminucin influye en enfermedades hepticas. -globulinas: incluyen a la transferrina, una protena que transporta el hierro.
La transferrina es una glicoprotena transportadora de hierro, sintetizada y metabolizada principalmente en los hepatocitos. Puede producirse variaciones debido a : a. Aumento: anemias ferropnicas. b. Disminucin: enfermedad heptica, nefrosis, neoplasias.
- globulinas: tambin conocidas como inmunoglobulinas. Constituyen el arma eficaz del sistema inmunitario humoral. Estas protenas son sintetizadas en los lifoncitos B, y se fijan con notable especificidad a los sitios antignicos en otras molculas, con el fin de marcarlas, y luego neutralizarlas. Inmunoglobulinas se conocen hasta el presente 5 clases (IgG, IgA, IgM, IgD, IgE).
Niveles de protena en la sangre

Cuando se hace referencia a las protenas totales en suero, se trata de una medicin aproximada de todas las protenas presentes en la parte lquida de la sangre. Esta prueba examina especialmente la cantidad total de dos tipos de protenas: Globulinas y albumina. El rango de referencia para la protena total es de 60-80g/L.
Valores normales de protena en la sangre:
Consumo de protenas
Los alimentos que ingerimos nos proveen de protenas, pero tales protenas no se absorben directamente, por eso primero deben pasar por un proceso de desdoblamiento denominado hidrlisis, as se separan en sus aminocidos constituyentes que pueden transportarse fcilmente por todo el organismo. Los dficit de aminocidos afectan mucho mas a los nios que a los adultos. Los aminocidos esenciales mas problemticos son el triptfano, la lisina y la metionina.
Problemas relacionados con la deficiencia de protenas

Marasmo Anorexia Ayuno prolongado Kwashiorkor
Deficiencias de protenas: Marasmo
Deficiencias de protenas de la sangre.
Estados de inanicin
La inanicin es una grave reduccin en los nutrientes, vitaminas e ingesta de energa. Es la forma ms extrema de malnutricin, consecuencia de la prolongada insuficiencia de alimentos. Se caracteriza por prdida extrema de peso, disminucin de la tasa metablica y debilidad extrema. Quines padecen de inanicin pueden sufrir severos daos en los rganos y finalmente la muerte, por insuficiencia alimentaria
La inanicin es un camino irreversible hacia la muerte. En este momento cuando el cuerpo ha consumido todas las reservas energticas, comienza la degradacin de protenas esenciales para la vida. Uno de los signos clnicos en esta etapa es el edema, empezando por consumir albmina, transferrina, apoprotena y protenas del plasma, disminuye la presin onctica y las clulas se llenan de agua, siendo una seal de la tercer etapa de ayuno. Los cidos grasos cubren el requerimiento energtico del msculo estriado, hgado y corazn y su concentracin en la sangre tienen una concentracin el doble de la inicial.
MTODOS DE PURIFICACION DE PROTENAS

Electroforesis: Las protenas son separadas un campo elctrico por su carga y sus peso molecular. Centrifugacin: Separa sustancias que tienen diferente peso molecular cuando se someten a una fuerza centrfuga. Cromatografa: Separa sustancias por la absorcin selectiva que tienen en una fase mvil a travs del medio.
Efecto del pH sobre la solubilidad:

Cuando las protenas estn debajo de su pI (tienen carga positiva y por encima de su pI (tienen carga negativa) y son solubles en soluciones acuosas. Cuando el pH = pI, las protenas tienen carga neta igual a cero y tienen la menor solubilidad
Efecto de la concentracin salina sobre la solubilidad:

La solubilidad se ve afectada por la atmsfera que genera la sal disuelta
Efecto SALTING-IN: La solubilidad de las protenas aumenta, cuando la concentracin salina aumenta (hasta cierto punto) Efecto SALTNG-OUT: La solubilidad de las protenas disminuye, cuando la concentracin de sales es muy alta.
Efecto de la concentracin salina sobre la solubilidad.
Mtodos de cuantificacin de protenas

Para las reacciones colorimtricas, se agrega 1 mL del reactivo o colorante. Y se procede a medir la absorbancia por medio de un espectrofotmetro o fotocolormetro. Se debe usar curva de calibracin y se hallan las concentraciones de acuerdo a la ley de Lambert-Beer.
MTODO DE BIURET
Se basa en la formacin de un complejo coloreado entre el Cu2+ y los grupos NH de los enlaces peptdicos en medio bsico. 1 mol de Cu2+ se acompleja con 4 moles de NH. La intensidad de coloracin es directamente proporcional a la cantidad de protenas (enlaces peptdicos) y la reaccin es bastante especfica, de manera que pocas sustancias interfieren.
LOWRY
ENSAYO DE BRADFORD: Comassie Blue Binding

Es un ensayo colorimtrico. Se basa en la unin de un colorante, Comassie Blue G-250 (tambin Serva Blue) a las protenas en un medio cido y realizando un cambio de absorbancia de 465 a 595 nm. Los aminocidos que reconoce son arginina, fenilalanina, triptofano y prolina.
ULTRAVIOLETA-VISIBLE (UV)
Los enlaces peptdicos o ciertos aminocidos son ledos en la regin del uv. Cistena (200nm-300nm) Aromticos (260nm-290 nm) La tirosina (275nm-285nm) El triptfano (280nm-uv lejano) La concentracin se mide con la ecuacin de Lambert Beer (A = cl )
BCA
El cido bicinconnico, es un compuesto capaz de formar un complejo prpura intenso con iones Cu1+ en medio alcalino.
Resumen de las metodologas de cuantificacin de protenas
METODOLOGA
PROCEDIMIENTO: Separacin de las globulinas del suero

1 mL suero+ 4mL H2O destilada. 5 mL de (NH4)2SO4 Gota a gota ( agitacin constante por inversin) Reposar durante 10 Tubo de min y llevar a centrifuga. centrifugar (2500 rpm) por 15 min. Sobrenadan te se deshecha. Precipitado, se completa hasta 5mL con NaCl 0.9%= solucin de globulinas.
Preparacin de la solucin de Protenas totales

1 mL suero sanguneo + 19 ml NaCl 0.9% = solucin de suero. 1 2 3 4
Blanco.= 1mL NaCl + 4 biuret.
Patrn. = 1mL albu. + 4 biuret
Globulina s= 1mL glob. +4 biuret
Agite suavemente cada tubo y djelo reposar por 30 min
Protenas totales.= 1mL s/n suero+ 4
Cuantificacin de protenas
Las protenas del suero sanguneo sern determinadas mediante fotocolorimetra. La longitud de onda que se emplear ser de 540 nm. Se miden las absorbancias y se calcula la concentracin con la ley de Beer. Curva de calibracin
A desc A pat C desc C pat

A b cons tan te c
Bibliografa
COOPER GM, HAUSMAN RE. La Clula. Ed. 5. Marbn Libros, S.L. Madrid; 2011. CORREA QUIROZ JA. Guas de Laboratorio de Bioqumica. Prctica 5: Cuantificacin de protenas en el suero sanguneo. Escuela de Qumica. Facultad de Ciencias. Universidad Nacional de Colombia. Medelln; 2003. BRANDAN N, et al. Protenas Plasmticas. Universidad Nacional del Nordeste. Facultad de medicina. Ctedra de bioqumica. Argentina; 2008. LPEZ SUREZ D, URIBE VSQUEZ V. Exposicin No 5 Protenas en el suero sanguneo. Metodologa. [ multimedia] diapositivas 30-33. FERNNDEZ REYES E, GALVN CEJUDO A. Mtodos para la cuantificacin de protenas. Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular, Campus Universitario de Rabanales. Crdoba.

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Protenas en el suero sanguneo

Niveles de protena en la sangre

Valores normales de protena en la sangre:

Problemas relacionados con la deficiencia de protenas

Deficiencias de protenas: Marasmo

Deficiencias de protenas de la sangre.

MTODOS DE PURIFICACION DE PROTENAS

Efecto del pH sobre la solubilidad:

Efecto de la concentracin salina sobre la solubilidad:

Efecto de la concentracin salina sobre la solubilidad.

Mtodos de cuantificacin de protenas

ENSAYO DE BRADFORD: Comassie Blue Binding

Resumen de las metodologas de cuantificacin de protenas

PROCEDIMIENTO: Separacin de las globulinas del suero

Preparacin de la solucin de Protenas totales

Blanco.= 1mL NaCl + 4 biuret.

Patrn. = 1mL albu. + 4 biuret

Globulina s= 1mL glob. +4 biuret

Agite suavemente cada tubo y djelo reposar por 30 min

Protenas totales.= 1mL s/n suero+ 4

A desc A pat C desc C pat

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