El diagnstico de las infecciones parasitarias puede establecerse de dos maneras fundamentales

mtodos directos, diseados para observar o detectar el parsito o alguno de sus elementos identificables mtodos indirectos, dirigidos a hacer evidente la respuesta inmune del hospedero frente al parsito..

Este mtodo permite buscar principalmente en muestras frescas, la presencia de formas evolutivas mviles de parsitos de tamao microscpico Procedimiento a) En un portaobjetos limpio y desengrasado, se colocan separadamente, una gota de solucin salina y otra de lugol b) Con el aplicador de madera se toma una muestra de heces y se mezcla con la solucin. c) Colocar el cubreobjetos d) Repetir estas operaciones en la gota de lugol. e) Observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X

La cantidad de heces es medida por desplazamiento; al final del proceso se cuentan los huevos en una alcuota de la dilucin. El diluyente, hidrxido de sodio, saponifica la grasa de las heces y ayuda a liberar los huevos de impurezas. Procedimiento a) b) c) d) e) Identificar el frasco de Stoll con la muestra a examinar Aadir hidrxido de sodio hasta la marca 56 mL en el frasco Con cuidado agregar heces hasta subir el nivel del lquido a la marca 60 mL Agregar las perlas de vidrio, tapar y agitar vigorosamente. Con la pipeta Stoll remover 0.15 mL del centro de la suspensin inmediatamente despus de agitar f) Colocar sta suspensin sobre un porta-objetos y cubrir con un cubre-objetos g) Contar todos los huevos presentes en toda la preparacin. Multiplicar el resultado por 100 y reportar No. de huevos/g o No. de huevos/ ml de heces

Procedimiento
a) Tomar una porcin de heces y homogeneizar con suero fisiolgico en un tubo limpio b) Filtrar el homogeneizado a travs de la gasa, llenando el tubo hasta la cuarta parte de su contenido. c) Agregar suero fisiolgico hasta 1 cm por debajo del borde del tubo. d) Tapar y agitar enrgicamente el tubo por 15 segundos e) Dejar en reposo de 30 a 45 minutos. f) Aspirar la parte media del tubo con una pipeta y colocar 1 2 gotas en una lmina portaobjeto. g) Aspirar el fondo del sedimento con una pipeta y depositar 1 2 gotas del aspirado en los extremos de la otra lmina portaobjeto. h) Agregar 1 2 gotas de solucin lugol a una de las preparaciones. i) Cubrir ambas preparaciones con las laminillas y observar al microscopio

Se basa en la gravidez de los huevos que, por su tamao y peso sedimentan rpidamente cuando se suspenden en agua.
Procedimiento

a) Homogeneizar 3 a 6 g de heces con unos 10 a 20 mL de agua filtrada b) Colocar la coladera y dos capas de gasa en la abertura del vaso y a travs de ella, filtrar la muestra. c) Retirar la coladera y llenar la copa con agua filtrada hasta 1 cm. debajo del borde, esto es 15 a 20 veces el volumen de la muestra. d) Dejar sedimentar la muestra durante 30 minutos. e) Decantar las 2/3 partes del contenido del vaso y agregar nuevamente agua. f) Repetir los pasos anteriores cada 5 a 10 minutos por 3 a 4 veces, hasta que el sobrenadante quede limpio. g) Transferir el sedimento a una placa petri por incorporacin h) Observar al microscopio a menor aumento.

Es til para la bsqueda de quistes y/o huevos de parsitos y excepcionalmente se observan larvas

Se basa en la flotacin de quistes, ooquistes y huevos de parsitos en una solucin de azcar que posee mayor densidad que ellos.

Se basa en la propiedad que tienen los quistes y/o huevos de flotar en la superficie de una solucin saturada de azcar, debido a su menor densidad. El mtodo es til para la deteccin de quistes de protozoarios y huevos de helmintos Procedimiento a) Colocar 1 a 2 g de heces en el tubo de ensayo. b) Agregar 3 a 5 mL de la solucin sobresaturada de azcar y homogeneizar con un aplicador. c) Completar el contenido del tubo con la misma solucin de azcar hasta formar un menisco. d) Dejar en reposo por 30 minutos. e) Colocar en contacto con el menisco, una laminilla cubreobjeto que permitir la adherencia por viscosidad de los quistes y huevos. f) Colocar en la lmina portaobjeto una gota de solucin de lugol. g) Retirar la laminilla con sumo cuidado, colocarla sobre la lmina portaobjeto y examinar al microscopio.

Se basa en la concentracin de los quistes y huevos por sedimentacin mediante la centrifugacin, con la ayuda de formol y ter para separar y visualizar los elementos parasitarios

Se basa en los tropismos positivos: geotropismo, termotropismo e hidrotropismo de los trofozotos de protozoos y larvas de helmintos. Es til principalmente para Balantidiumcoliy larvas de Strongyloidesstercoralis.
Procedimiento a) Colocar la coladera o rejilla metlica con la gasa doblada (2 a 3 capas) dentro de la copa b) Colocar sobre la gasa, 4 a 6 g de la muestra de heces en fresco c) Verter solucin salina a 37C en cantidad suficiente por el borde de la copa. d) Dejar a temperatura ambiente o en estufa a 28C 37C de 30 a 50 minutos. e) Sacar la coladera o rejilla y con ayuda de una pipeta Pasteur obtener 1 mL de sedimento. f) Colocar el sedimento en una luna de reloj o lmina cavada y observar al microscopio

Mtodo que consiste en la diafanizacin o aclaracin de las heces con el uso de glicerina, que permite preparar una capa transparente y observar las formas parasitarias.
Procedimiento

a) Tamizar 1 g de la muestra de heces a travs de gasa, malla metlica o nylon fino b) Extender el tamizado sobre la lmina portaobjeto y cubrir con una laminilla impregnada en glicerina c) Comprimir la muestra con el tapn de jebe sobre la laminilla, secar el exceso de glicerina por 30 minutos y observar al microscopio.

Se basa en la tcnica de Kato y que permite cuantificar la presencia de huevos de helmintos. Se expresa en nmero de huevos por gramo de heces (hpg).

Procedimiento
a) Con un aplicador transferir la muestra fecal sobre el papel absorbente. b) Colocar una malla sobre la muestra. c) Con el aplicador del kit comprimir la malla para tamizar la muestra. d) Colocar el molde de plstico sobre la lmina portaobjeto y rellenar la perforacin con la muestra tamizada. e) Levantar el molde dejando el cilindro de la muestra en la lmina portaobjeto. f) Colocar la laminilla glicerinada con verde de malaquita sobre la muestra y con ayuda de un tapn de jebe presionar sobre la laminilla, buscando extender la muestra. g) Dejar para la diafanizacin a temperatura ambiente de 30 a 45 minutos.

Proveer una mejor sensibilidad en la deteccin de ooquistes de Cryptosporidium spp en toda muestra de heces.

Demuestra microfilarias en sangre circulante, sobre todo cuando la densidad de las mismas es muy baja. La formalina al 2% hemolisa los glbulos rojos, facilitando la observacin de las microfilarias inmviles. Para diferenciar entre especies es necesario colorear la preparacin Procedimiento
a) Rotular cada tubo b) Obtener 1 mL de sangre por puncin venosa, o 1 mL de la sangre con anticoagulante y mezclar en el tubo rotulado con 10 mL de formalina al 2% para iniciar hemolisis. Mezclar muy bien. c) Centrifugar a 1,500 rpm por 2 minutos. d) Decantar el sobrenadante cuidando de no revolver el sedimento en el fondo del tubo. e) Con una pipeta Pasteur tomar una muestra del sedimento, colocar una porcin sobre un porta-objetos, cubrir con cubre-objetos y examinar al microscopio con objetivo 10X. f) Con la otra porcin del sedimento, hacer un extendido fino en lmina previamente identificada y dejar secar completamente a temperatura ambiente. g) Colorear con Giemsa para distinguir las diferentes clulas y poros y con hematoxilina Delafield para reconocer la vaina cuando presente

Sirve para estudiar la distribucin regional o geogrfica de las uncinarias de humanos Necatoramericanus y Ancylostomaduodenale; para la diferenciacin entre larvas de uncinaria y de los Trichostrongylus, Temidens, Strongyloidesfulleborni ; en la diferenciacin entre larvas de uncinaria y otras larvas, para determinarla viabilidad de los huevos y/o larvas en estudios sobre efectividad anti-helmntica, para cultivar estadios de vida libre de Strongyloides

La hembra de Enterobius vermicularis deposita sus huevos en las mrgenes del ano durante la noche. La tcnica de Graham tiene por objeto adherir estos huevos a la cinta adhesiva transparente o cinta scotch, la que se extender posteriormente en una lmina portaobjeto para su observacin microscpica.

Los huevos de Enterobius vermicularis se observan de cscara transparente, alargados u ovoides, con un lado ms aplanado; tienen un embrin en su interior y miden entre 50-60 m por 2030 m.

Procedimiento

a) Hacer un frotis de heces en la lmina portaobjeto y dejar secar. b) Fijar la lmina c) Agregar hidrxido de sodio sobre el preparado por un minuto, eliminar el exceso y lavar con agua. d) Cubrir la lmina con la fucsina fenicada y lavar e) Decolorar con alcohol-cido y lavar f) Colocar como colorante de contraste verde de malaquita 1% o azul de metileno 1-1,4% durante 5 minutos g) Lavar la lmina y dejar secar a temperatura ambiente. h) Observar el microscopio.

Permite colorear las estructuras internas de los protozoos para su caracterizacin. Es un mtodo rpido y de utilidad en el estudio de Entamoeba, Giardia, Balantidium, Cyclospora y otros protozoarios.
Procedimiento a) b) c) d) e) f) Hacer el frotis fino de la muestra sobre la laminilla. Fijar la muestra con solucin Schaudinn por 2 a 5 minutos. Pasar por alcohol 70% con 2 3 gotas de tintura de yodo. Pasar por un minuto por alcohol 70%. Pasar por el colorante chromotrope de 8 a 15 minutos. Pasar por alcohol 90% con cido actico al 1% de 10 a 15 segundos y ver tono de coloracin. g) Pasar por alcohol 95% y alcohol absoluto durante 3 minutos. h) Pasar por xilol de 1 a 5 minutos. No debe verse opaco. i) Realizar el montaje con cytoseal, blsamo de Canad o Permount

Colorea protozoarios, principalmente flagelados.

Procedimiento

a) Realizar el frotis de la muestra fresca en la lmina y dejar secar. b) Fijar el frotis con unas gotas de alcohol metlico, cubriendo la muestra por 5 minutos. c) Cubrir el frotis con el colorante (diluido al 1/2 1/3 con agua destilada) durante 15 minutos. d) Lavar con agua corriente y dejar secar. e) Realizar el montaje con cytoseal o blsamo de Canad y observar al microscopio.

Trofozoto de Giardialambliacoloreado con MayGrnwald

Colorea protozoarios, principalmente amebas y flagelados.

Procedimiento
a) Hacer un frotis fino en la lmina b) Si la muestra es dura, hacer una emulsin previa en solucin fisiolgica, realizar el frotis y pasar en solucin Schaudinn por 3 a 5 minutos. c) Pasar por alcohol 70% ms 1 a 2 gotas de tintura de yodo por 5 minutos. d) Pasar por alcohol 70% y 50% de 5 a 10 minutos cada vez. e) Pasar por agua corriente por 5 a 10 minutos. f) Pasar por la solucin mordiente 2% de 5 a 10 minutos y enjuagar con agua corriente. g) Pasar por colorante por 5 a 10 minutos (1 mL de solucin colorante hematoxilina y 9 mL de agua). h) Lavar con agua y pasar por una segunda solucin de mordiente al 2% para decolorar, observando la intensidad de la coloracin. i) Lavar con agua corriente a chorro continuo de 10 a 15 minutos. j) Deshidratar pasando por alcohol 70%, 85%, 95% y absoluto, de 10 a 15 minutos cada uno. k) Aclarar con xilol agitando el frotis, montar con cytoseal o blsamo de Canad y observar al microscopio.

Coloracin de estructuras internas de especmenes adultos o segmentos de ste. Se usa de preferencia para el estudio de cstodes y tremtodes, ya que los nemtodes suelen deformarse con el montaje.

Procedimiento a) Los progltidos de cstodes y los adultos de tremtodes son lavados y aplanados, colocndolos entre dos lminas, sujetndolos con pabilo o usando pesas sumergindolos en formol al 10%. b) En caso de estar fijados en formol 10%, se lavan con agua corriente durante 10 a 30 minutos y luego se realiza el aplanamiento del vermex o gusano. c) Colocar el gusano en alcohol 70% durante 10 a 20 minutos. d) Pasar por el colorante Carmn durante 5 a 10 minutos. e) Pasar por alcohol cido controlando la coloracin al estereoscopio. f) Deshidratar el espcimen pasando por alcohol 85%, 95% y absoluto, durante 10 minutos en cada uno. g) Pasar por la creosota o xilol, controlando al estereoscopio o microscopio la coloracin apropiada. h) Secar el exceso de creosota con papel filtro y realizar el montaje con blsamo de Canad.

Las larvas de los nemtodes absorben el colorante, permitiendo diferenciar sus estructuras internas Procedimiento a) Preparar un set de placas Petri 60 x 90 mm conteniendo los reactivos correspondientes y colocar las larvas en alcohol 25% - 30% con unas gotas de solucin de rojo de Congo por 20 a 30 minutos. b) Controlar por la observacin microscpica el color de las larvas. c) Deshidratar la muestra, pasndola por alcohol 70%, 85%, 95% y absoluto, de 20 a 30 minutos en cada uno. d) Colocar en solucin de salicilato de metilo durante 3 minutos. e) Colocar los especmenes en cytoseal, blsamo de Canad o Permount y observar al microscopio.

Se usa en casos de cstodes y tremtodes. Permiten colorear estructuras internas de especmenes adultas o fragmentadas del mismo. Procedimiento a) Los tremtodes y cstodes fijados con formol 10% se lavan en agua corriente. Diluir el colorante stock de 8 a 10 gotas en agua destilada y colocar los especmenes (35 mL por placa) por 12 horas. b) Lavar con agua corriente y pasar por agua (segundos), dependiendo del espcimen. c) Pasar por alcohol 50%, 30% y 10% por 10 minutos en cada uno y pasar por agua corriente el tiempo necesario para sacar el exceso de colorante. d) Deshidratar en alcohol 10%, 30%, 50%, 70%, 85%, 95% y 100% cada uno, por 10 minutos. e) Pasar dos veces por xilol, montar con blsamo de Canad y observar al microscopio.

Dientamoeba fragilis, Hematoxilina frrica (1000X)

Es posible preparar dos tipos de muestra de sangre para el diagnstico de la malaria: 1. el extendido fino que consiste de una sola capa de clulas, extendidas en un porta-objetos 2. la gota gruesa que consiste de varias capas de clulas en una extensin menor Procedimiento a) se coloca una gota de sangre en un portaobjetos limpio y con la esquina de otro, se disemina la sangre hasta llegar a un dimetro de ms o menos 1 cm. El espesor debe ser tal que permita leer a travs de la preparacin. b) Se deja secar c) Se colorea con Giemsa

Es una reaccin de precipitacin antgeno - anticuerpo en un medio semislido (gel), que consiste en detectar en el suero del paciente, anticuerpos contra antgenos parasitarios, y que se evidencia por la formacin de lneas opacas de precipitacin. En este caso, los antgenos de la forma larvaria de Echinococcus granulosus y de la formas juveniles y adultas de Fasciola hepatica

La tcnica de ELISA emplea antgenos de lquido vesicular de cisticerco de Taeniasolium, (diagnstico de cisticercosis) o lquido de quiste hidatdico de E.granulosus(diagnstico de hidatidosis), adheridos a soportes inertes (placa de microtitulacin) y antigammaglobulinas humanas conjugadas con enzimas como detectores de la reaccin antgeno-anticuerpo, evidenciado por la liberacin de color al actuar el sustrato

Esta tcnica emplea partculas de ltex (como soporte), sensibilizadas con antgeno hidatdicos, que al ser enfrentadas con suero que contiene anticuerpos especficos aglutinan evidenciando la reaccin antgeno anticuerpo

La tcnica de inmunofluorescencia indirecta, emplea como antgeno a trofozoitos de Toxoplasma gondii fijados en lminas, sobre las que se realiza la reaccin antgeno-anticuerpo. La formacin de este complejo es evidenciada por una antigamaglobulina humana marcada con fluorescena

Suero positivo

Suero negativo

Medidas preventivas Lavarse las manos siempre despus de cada actividad. No consumir carne o verduras crudas o frutas sin lavar. Promocionar la lactancia materna. Se ha comprobado que sta protege contra parsitos, principalmente los que originan diarreas. Hervir el agua de consumo por un minuto, utilizando esta modalidad como norma, especialmente cuando la ingieren lactantes y nios. No caminar descalzo o con calzado abierto en suelos de tierra o arena hmedos.