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Microbiología P3

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Microbiología (Progreso3)

Infecciones de la Vía Urinaria

• El sistema urinario NO es estéril ya que está formada por un amplio rango de 20-
500 especies bacterianas
• Microflora normal: Estafilococos coagulasa (-), corinebacterias y otros anaerobios.
B Barrera biológica de protección

• Mycobacterium smegmatis: colonizador NO patógeno de la vulva y el pene.

Nota: Si la limpieza del glande no es adecuada antes de tomar la muestra, pueden


encontrarse elevados números de bacteria, lo que confunde con infecciones con M.
tuberculosis

➢ Microbiota femenina: varía con el pH y la concentración de estrógeno en la mucosa.


(depende de la edad)

Vaginas sanas y normales: predominan los lactobacilos (pH de 4)

Muchas mujeres son portadoras de Streptococcus agalactiae y pueden transferirlo a los


bebés

Causan infecciones en embarazadas

Infecciones del tracto urinario: mujeres son más propensas debido a:

➢ Uretra más corta (4cm en mujeres vs 20cm en hombre).


➢ Generalmente se diseminan hacia arriba o abajo.
➢ Casi siempre ocurren en la uretra baja y pueden subir a los riñones (pielonefritis).
➢ Rara vez ocurren en los riñones y descienden a la uretra (originan por infecciones
fuera del tracto) pueden llegar al torrente sanguíneo y luego a riñones.

ITU de vía urinaria baja: uretritis, cistitis, prostatitis.

ITU de vía urinaria alta: pielonefritis, absceso intrarrenal, absceso perinéfrico.

Agente causal del 80% de las infecciones urinarias: Escherichia coli, también pueden ser
Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae y otras bacterias entéricas fecales.

• Staphylococcus epidermidis, S. saprophyticus: infectan por cateterismo.


• Pseudomonas aeruginosa por instrumentos contaminados usados en inspección
y diagnóstico.
Técnicas de Recolección

• La orina para urocultivo se la toma de la primera orina de la mañana


• Se debe hacer una buena higiene con agua y jabón antes de la toma de muestra
• Se descarta el primer chorro y en la mitad se toma la muestra

• La muestra solo puede estar 1h a temperatura ambiente pasado eso debe estar en
congelación
• La orina es 95% agua y el 5% es una mezcla de sales

Análisis bioquímicos- tiras reactivas urinarias

• Presencia de leucocitos y gram negativos: indica inflamación de vías urinarias


Técnicas de cultivo

• Método de siembra: Semicuantitativo • LACTOSA (+) AMARILLA


• Uso de asas calibradas (0.001mL o 0.01mL) • LACTOSA (-) BLANCAS O AZUL CLARO

• Staphylococcus y cocos: solo crece en Agar Sangre y CLED • LACTOSA (+) ROSA
• Streptococcus: crece en Agar sangre • LACTOSA (-) AMARILLO
(Streptococcus agalactiae es betahemolítico)
• Escherichia coli y bacilos gramnegativos: se cultiva en los 3 medios
(E.coli es lactosa positiva)

Procedimiento de cultivo:

• Agar Cromo génico: las colonias se diferencian por colores según el


microorganismo
Contaje de colonias

• Una vez realizada la incubación se realiza un conteo y se obtiene el OCD

• volumen del asa puede ser: 0,01 ml 0,001 ml

Interpretación de los resultados: Criterios de KASS

• En mujeres jóvenes 20´s con síndrome miccional y leucocituria, se considera


significativo el hallazgo de >102 ufc/mL
• >104 ufc/ml infección en mujeres embarazadas, Bacteriuria asintomatic

Morfologías coloniales: Cultivo contaminado


Hongos
• Células eucariotas
• Pared celular compuesta de quitina
• Membrana celular compuesta de ergosterol (componente vital de la membrana
celular fúngica)
• HIFA: unidad fundamental anatómica y de crecimiento en los hongos
filamentosos
• MICELIO: masa de hifas (forma filamentosa)
• Forma vegetativa predominantemente unicelular: levadura (estructura oval
o cilíndrica)
• Problemas asociados con el cuidado de salud y de adquisición comunitaria
debido a que existen alteraciones en los huéspedes (inmunocomprometidos).
• Saprofíticas (viven en materia orgánica en descomposición o muerta)
• Transmisión: inhalación de esporas o por la introducción de material fúngico
por una herida o un trauma.

MICOSIS

Término para designar enfermedades producidas por hongos en los seres humanos

• Requiere aislamiento e identificación del hongo a partir del cultivo.


• Muestras: se examinan tanto macroscópica como microscópicamente.

Diagnostico de micosis

Examen microscópico Directo

Utilizan soluciones de montaje que son las que se agregan a la muestra y nos permite ver
la estructura fúngica en el microscopio.

KOH

• Cuando se tiene muestras de tejidos queratinizados (piel, cabello y uñas) ya que


el KOH ablanda al tejido y se ve fácilmente la estructura fúngica (se ve hifas)

• La sensibilidad del examen directo incrementa usando fluorocromos como el


blanco de calcoflúor, (se une a la pared celular de los hongos emitiendo
fluorescencia que puede ser detectada con un microscopio de fluorescencia)
Tinta china

• Diagnostica a la levadura capsulada Criptococcus (reservorio: palomas)


• La tinta china es incapaz de penetrar esa capsula y por eso se la utiliza.
• Se lo ve en pacientes inmunodeprimidos, VIH sida

TINCIONES

• Gram: Gram variable, Gram positivas


• Coloraciones de Romanosky: Wright, Giemsa (observación de levaduras
intracelulares de Histoplasma capsulatum en extendidos de sangre, médula ósea
o esputo)

MEDIOS DE CULTIVO

• Agar Sabouraud Dextrosa y el Agar Papa Dextrosa (PDA): permiten crecimiento


de la mayoría de los hongos, tanto levaduras como mohos.
• Agar Micosel (medio selectivo): contiene cicloheximida y cloranfenicol para
inhibir el crecimiento de hongos ambientales y de bacterias, respectivamente.
• Agares Cromo génicos

Apariencia de colonias

• Levaduras: producen colonias húmedas, cremosas, opacas o pastosas.

• Hongos filamentosos o mohos: producen colonias afelpadas, lanosas,


algodonadas o polvorientas.
• Hongos dismórficos: presentan fases de levadura (en cuerpo) y moho (en
ambiente)
• El dimorfismo se puede presentar por cambios en la temperatura – dimorfismo
térmico

Micosis Oportunistas
CANDIDA

• Forma parte de nuestro microbiota y un 10% se relaciona con enfermedades


infecciosa
• Mayoría de las infecciones fúngicas están producidas por: Candida albicans
• Candida Auris: Levadura multi resistente a los antifúngicos y causa problema a
nivel intrahospitalario ya que causa infecciones asociadas a servicios de salud.
• Cryptococcus meningitis: levadura presente en pacientes inmunodeprimidos y
con VIH SIDA (se la detecta con tinta china)
Prueba del Túbulo Germinal (identificar Candida albicans)

• Se la identifica ya que la levadura posee prolongaciones saliendo de ella.


• Consiste en poner la levadura en suero humano y se la deja incubando por 8h y
luego se la ve en el microscopio en 40x como max aumento.
• Ventajas: bajo costo, fácil realización y resultado rápido
• Desventaja:5% de las cepas de C.albicans no producen t,germinal

• Agares cromo génicos para levaduras del género Candida: inclusión de sustratos
que, ante la presencia de una actividad enzimática específica, produce un color
determinado dependiendo de la levadura aislada

Micosis cutáneas (superficiales).


DERMATOFITOS

• Hongos filamentosos hialinos que afectan tejidos queratinizados


Géneros más importantes: causan tiñas

• Trichophyton: Afecta piel, cabello y uñas


• Microsporum: Afecta piel y cabello
• Epidermophyton: Afecta piel y uñas

• Son Antropofílicos, zoofílicos y geofílicos


• En el microscopio se ve hifas para verificar que es hongo

Diagnóstico de Hongos Filamentosos


Macroscópicamente: aspecto de colonias, color (anverso y reverso), superficie y
presencia de pigmento.

Microscópicamente: se va a ver las hifas y las conidias que cada una es diferente
(células de reproducción asexual)

• A los hongos no se los puede coger la muestra con el asa ya que las rompe por lo
que son muy frágiles.
• Se realiza un MICROCULTIVO que permite preservar estructuras fúngicas frágiles

• Se utiliza azul de lactofenol para mirar la muestra en el microscopio


Morfología Microscópica

Hifas, cuerpos fructíferos (todos son diferentes) y conidias

PENICILLIUM ASPERGILLUS

Métodos Indirectos
Serología

• Diagnóstico de las micosis invasoras o sistémicas


• En la detección de antígenos fúngicos y la respuesta de anticuerpos
• Detección del antígeno capsular de Cryptococcus neoformans por medio
de aglutinación
• Detección de galactomanano por la técnica de ELISA en pacientes con
aspergilosis invasora
• Detección de D -arabinitol y el H - D -glucano producido por Candida spp,
Aspergillus spp y pneumocystis sp
Métodos Moleculares
PCR

• Secuenciacion de acidos nucleicos fungicos


• Deteccion de proteinas fungicas por MALDI -TOF

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