FACULTAD DE MEDICINA

Guía de prácticas de laboratorio de Microbiología

Practica No. 7
Tema: Urocultivo
Sesión: Sesión 2.

INTRODUCCIÓN
El propósito del análisis microbiológico de una muestra de orina es en primer lugar determinar
si existe una infección y, si existe, identificar el microorganismo que la produce. Para
determinar si existe infección debemos hacer un recuento del número de microorganismos
que hay por mL de orina. Si el número de microorganismos es: > 105 /mL hay infección.
Para determinar el microorganismo que produce la infección hay que hacer una identificación
del microorganismo que previamente hemos aislado.
Identificación
Revisar los resultados obtenidos en los diferentes medios en los que se hicieron cultivos, y
determinar las características de crecimiento en dichos medios.
Agar MacConkey.
Este medio de cultivo tiene un indicador de pH que es Rojo Neutro. Si el microorganismo
fermenta la lactosa el pH del medio disminuye y el indicador vira a rosa-rojo, a diferencia de
aquellas bacterias que no fermenta la lactosa utilizan la peptona en su lugar, formando
amoniaco, lo que incrementa el pH del medio dando origen a colonias blancas o incoloras y el
medio igualmente cambia de color.

*E. coli (izquierda) * Klebsiella Pneumoniae (derecha)

 Colonias Microorganismo

Incoloras, transparentes Salmonella, Shigella y otros.

Grandes, rojas, halo turbio Escherichia coli.

Grandes rosadas mucosas Enterobacter, Klebsiella.

Diminutas, de crecimiento aislado, opacas Enterococos, Estafilococos, y otros.

Si crecen colonias rosas-rojas el microorganismo es lactosa positiva.

Si crecen colonias incoloras el microorganismo es lactosa negativa.

Agar EMB.
Este medio (también denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos
Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo
de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.
La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que
son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de metileno; éstos
ejercen un efecto inhibitorio sobre una amplia variedad de bacterias Gram positivas.
Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un característico brillo metálico.
Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras
que las que no lo hacen son incoloras.
Colonias Microorganismos

Transparentes de color ambar Salmonella, Shigella

Verdosas con brillo metálico a la luz Escherichia coli.

reflejada, con el centro negroazulado.
 Mas grandes que las E. coli, mucosas, con el Enterobacter, Klebsiella y otros.
centro pardo-grisaceo.

Microorganismos fermentadores de lactosa y / o sacarosa: colonias de color negro azulado o

amarronado. Pueden tener centro oscuro y brillo metálico.
Microorganismos no fermentadores de lactosa y sacarosa: colonias del color del medio,
incoloras.

Agar Sangre.
Se usa para ver la capacidad hemolítica de los microorganismos patógenos (que es un factor
de Virulencia). Observando los halos hemolíticos alrededor de las colonias se determina el tipo
de hemólisis que posee:

● alfa: halos verdosos (oxidación de la hemoglobina de los glóbulos rojos a

metahemoglobina en el medio)

● beta: halos incoloros (hemolisis total)

● gamma: inexistencia de halos (sin hemolisis)

Agar Manitol Salado

Este medio de cultivo tiene un indicador de pH que es Rojo Fenol. Si el microorganismo
fermenta el manitol el pH del medio disminuye y el indicador vira a amarillo.

Colonias Microorganismo
 Con halo amarillo luminoso, crecimiento Manitol positivo: Staphylococcus aureus.
intenso

Sin cambio de color, crecimiento débil. Manitol negativo: Staphylococcus epidermis

y otros.

• Si crecen colonias amarillas el microorganismo es manitol positivo

• Si crecen colonias incoloras el microorganismo es manitol negativo Fundamento:

Agar Cetrimide.
El agar Cetrimide se fundamenta en la capacidad que tiene el medio para favorecer el
crecimiento de P. aeruginosa, estimular la producción de sus pigmentos y a su vez inhibir el
crecimiento de otros microorganismos.
La Cetrimide es un detergente catiónico que actúa como agente inhibidor, libera el nitrógeno y
el fósforo de las células de casi toda la flora acompañante, aunque inhibe también algunas
especies de Pseudomonas.
La observación de colonias redondas, lisas, de bordes regulares, con producción de pigmentos
azul-verdoso, verde, marrón o rojizo, más la emisión de olor frutal (aminoacetofenona), es un
resultado presuntivo de la presencia de esta bacteria en dicha muestra.
Por otra parte, es indicativo de P. aeruginosa la observación de un pigmento amarillo-verdoso
brillante sobre las colonias cuando la placa es expuesta a luz ultravioleta.

AGAR CLED
RESULTADOS DE APRENDIZAJE
Identificar las diferentes condiciones de crecimiento de bacterias que pueden estar presentes
en muestras de orina, en los diferentes medios de cultivo utilizados.

MATERIALES / REACTIVOS

Portaobjetos
Cubreobjetos
Asas de siembra
Colorantes de Gram.

METODOLOGÍA.
1. Revisar los resultados en los diferentes medios de cultivo empleados.
2. Realizar tinción de Gram a las colonias de interés.
3. Repicar las colonias de interés.
4. Realizar el recuento de bacterias.
a. Contar el número de colonias desarrolladas, para esto seleccionar para su lectura, la
placa que muestre entre 30 a 300 colonias.
b. Reportar la cuenta bacteriana de la siguiente manera:
Número de colonias contadas X el factor de dilución de la caja en la que se observa y cuentan
las colonias bacterianas = Unidades Formadoras de Colonias por ml. (UFC/ml).

Refuerzo académico.

1. Defina que es un Urocultivo.

Examen de laboratorio el cual se realiza para detectar la presencia de bacterias y
microorganismos en muestra de orina, el propósito de esto es identificar ITU Y cual
microorganismo provoca esta infección, así como a que antibióticos presenta sensibilidad, para
poder realizar un urocultivo la muestra se debe cultivar en condiciones especiales, lo que
permite el crecimiento de los microorganismo, después se analiza las colonias para identificar
los patógenos y tratarlos.
2. Indique si es falso o verdadero.
a) En condiciones normales la orina debe presentar una tonalidad anaranjada obscura, con
abundantes cristales, y al observar al microscopio se puede determinar la presencia de
leucocitos en abundancia que evidencian un sistema inmunológico eficiente. Falso

b) En condiciones normales la orina es de color amarillo claro, ausencia de elementos

extraños como cristales o únicamente trazas de ellos. Verdadero

c) Las muestras para un urocultivo pueden ser almacenadas a temperatura ambiente y

llevadas posteriormente al laboratorio sin que esto influya en los resultados. Falso

d) La presencia de un solo tipo bacteria en el urocultivo nos permite descartar la infección,

ya que se considera que es parte de la flora propia del medio. Falso

e) Existen infecciones en las que podrían existir una o mas bacterias en la misma muestra.
Verdadero

f) Recuentos superiores a 103 UFC/ml son indicativo de infección. Falso

g) Al realizar el recuento de bacterias en una placa de la dilución 10 4 tenemos un resultado

de 110 bacterias, esto nos indica la presencia de infección en el paciente. Falso

h) Al realizar el recuento de bacterias en una placa de la dilución 10 3 tenemos un resultado

de 35 bacterias, esto nos indica la presencia de infección en el paciente. Falso

3. Señale el enunciado correcto. Puede ser uno o más enunciados.

Al revisar los resultados de los cultivos encontramos los siguientes resultados:

Medio de cultivo Observación

 Colonias Rojas, con halo que sugiere la presencia de Salmonella.

Colonias Rojas, con halo que sugiere la presencia de E. Coli.

MacConkey
Colonias rosadas mucosas, y aumento de pH en el medio evidencia
presencia de Klebsiella.

Este medio evita el crecimiento de Salmonella, por esta razón no se

EMB existe crecimiento en el medio.

Bacterias verdosas con brillo metálico, sugieren presencia de E.coli

Crecimiento de bacterias en abundancia y el medio cambia de

tonalidad por la fermentación del manitol, que evidencia la
presencia de S. aureus.
Manitol
Crecimiento de bacterias en abundancia y el medio cambia de
tonalidad por la fermentación del manitol, que evidencia la
presencia de S. epidermis

Colonias azuladas sin brillo indican la presencia de E. Coli.

Crecimiento de colonias redondas, lisas, de bordes regulares, con

Cetrimide
producción de pigmentos azul-verdoso, verde, marrón o rojizo
sugieren la presencia de Pseudomona aeruginosa.

Colonias de color azul brillante igual al color del medio que sugiere
la presencia de S. aureus.
CLED
Colonias de color amarillo o rojizas con cambio del color del medio a
rosa o rojo pálido que sugiere la presencia de E. Coli