ADRIÀ FERNÁNDEZ SORIANO

MICROBIOLOGÍA CLÍNICA

Staphylococcus, Micrococcus y otros

cocos catalasa positivos
Los miembros de los géneros Staphylococcus, Micrococcus, Kocuria y Kytococcus se
caracterizan por ser cocos grampositivos y catalasa positivos que se presentan en
pares y en racimos. Estos organismos suelen colonizar las superficies de la piel y las
membranas mucosas de mamíferos y aves. Los miembros del género Staphylococcus
son patógenos humanos importantes, mientras que los otros géneros juegan un papel
menor en las infecciones humanas.
Tradicionalmente, los miembros del género Staphylococcus se han dividido en aquellos
que son coagulasa positivos, es decir, Staphylococcus aureus, y aquellos conocidos
como estafilococos coagulasa negativos (SCN o CoNS, por sus siglas en inglés), es
decir, todos los demás, según su capacidad para coagular el plasma sanguíneo, como el
del conejo, por ejemplo. La especie de Staphylococcus asociada con una mayor
frecuencia a infecciones humanas es S. aureus, que representa una causa importante
de morbilidad y mortalidad. Staphylococcus aureus puede causar enfermedades
mediadas por toxinas o por invasión directa, destruyendo numerosos tejidos. Las
infecciones por S. aureus varían desde infecciones superficiales de la piel hasta
infecciones sistémicas fatales, que pueden ocurrir cuando se daña la integridad de la
piel, lo que permite que este patógeno acceda a sitios estériles. Entre las infecciones
más comunes causadas por S. aureus se encuentran los forúnculos, foliculitis, celulitis,
los abscesos profundos y el impétigo (infección cutánea). Los hospedadores
inmunocomprometidos tienen un riesgo particular de infección. Las infecciones
sistémicas incluyen septicemia, que puede provocar la diseminación a otros sitios
distantes en el cuerpo, causando osteomielitis, neumonía y endocarditis. Las cepas
toxigénicas de S. aureus son capaces de producir impétigo ampolloso, síndrome de piel
escaldada (SSS o enfermedad de Ritter) y síndrome de choque tóxico (TSS).
Staphylococcus aureus es también un conocido causante de intoxicación alimentaria
debido a la producción de enterotoxinas (como la enterotoxina A o la C) en alimentos
como la ensalada de patata, el helado o las natillas. Generalmente, se presentan
vómitos intensos y diarrea entre 2 y 8 horas después de la digestión de alimentos que
contienen la toxina.
Los estafilococos coagulasa negativos (CoNS/SNC), en particular Staphylococcus
epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus haemolyticus,
Staphylococcus lugdunensis y Staphylococcus schleiferi desempeñan un papel en las
infecciones humanas. En particular, S. epidermidis es reconocido como una de las
principales causas de infecciones relacionadas con la atención médica, siendo los
individuos inmunocomprometidos los que tienen un mayor riesgo. Debido a que los
CoNS son miembros de las microbiota normal de la piel y de las membranas mucosas a
menudo se les considera un contaminante cuando se aíslan de muestras clínicas y, por
lo tanto, pueden pasarse por alto como causa de infección. Esto se ve agravado por el
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hecho de que su presentación clínica es subaguda, a diferencia de la de S. aureus. Una
propiedad importante de virulencia de los CoNS es su capacidad para formar un
biofilm en la superficie de dispositivos implantados o permanentes (como los
catéteres), lo que los convierte en agentes frecuentes de infecciones intravasculares.
S. epidermidis también ha sido implicado como causa de endocarditis y está asociado
con endocarditis del lado derecho en usuarios de drogas intravenosas. Staphylococcus
saprophyticus es una de las principales causas de infecciones urinarias no complicadas
en mujeres jóvenes y sexualmente activas, siendo la segunda en frecuencia después de
Escherichia coli en esta población de pacientes. De los CoNS más recientemente
descritos como patógenos humanos, S. lugdunensis y S. schleiferi han sido implicados
en infecciones graves, incluyendo endocarditis, septicemia, artritis e infecciones
articulares. Staphylococcus lugdunensis, que coloniza con mayor frecuencia la piel e
infecta los tejidos (causando, por ejemplo, forúnculos y abscesos) por debajo de la
cintura, en ocasiones puede comportarse más como S. aureus que como CoNS. Este
organismo ha sido asociado con infecciones agresivas, como la endocarditis, que
tienen una alta tasa de mortalidad; por lo tanto, el reconocimiento rápido de esta
especie es importante para iniciar una terapia antimicrobiana adecuada. Aunque otras
especies de CoNS han sido implicadas en una variedad de infecciones, ocurren con
menor frecuencia.
Un problema creciente con S. aureus y CoNS es la resistencia a los agentes
antimicrobianos, en particular a la meticilina. En la mayoría de las cepas de S. aureus
resistentes a la meticilina (MRSA), esto se debe a la producción de una proteína de
unión a penicilina alterada, principalmente PBP2a o PBP2c, codificada por los genes
mecA o mecC, respectivamente, los cuales se encuentran en una unidad genética móvil
conocida como SCCmec. La sobreproducción de β-lactamasa (enzima que inactiva
ciertos antibióticos) representa a un porcentaje menor de las cepas de MRSA o MR-
CoNS. En los últimos años, se han identificado cepas de S. aureus con disminución de la
susceptibilidad a la vancomicina. Estas cepas se denominan S. aureus intermedio a
vancomicina (VISA: menos susceptibles a la vancomicina); S. aureus resistente a
vancomicina (VRSA: completamente resistentes a la vancomicina) cuando la CIM
(concentración inhibitoria mínima) de vancomicina es ≥16 μg/ml, o, cuando se aborda
su susceptibilidad a la clase de antimicrobianos glucopéptidos en su totalidad, como S.
aureus intermedio a glucopéptidos (GISA). Aunque solo se ha aislado un número
reducido de estas cepas, representan una amenaza potencial para el tratamiento
eficaz de infecciones graves por S. aureus.
La prueba para MRSA puede ser difícil debido a la heterorresistencia, en la cual la
resistencia se expresa en diferentes grados entre las subpoblaciones. En las pruebas de
susceptibilidad realizadas por difusión en disco o pruebas para determinar la CIM, se
ha demostrado que la cefoxitina tiene una mayor sensibilidad para detectar MRSA que
la oxacilina, que también es un antibiótico comúnmente utilizado para esta prueba. Se
han utilizado ensayos moleculares para detectar directamente el gen mecA, así como
formatos de ensayo rápidos que emplean anticuerpos monoclonales contra la proteína
alterada PBP2a, para sortear los problemas de las pruebas de susceptibilidad in vitro
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para MRSA. Además, debido a la importancia de identificar rápidamente los cultivos
positivos para S. aureus, en particular MRSA, se han incorporado cebadores y sondas
para S. aureus y MRSA en varios paneles basados en ácidos nucleicos y en ensayos de
amplificación de ácidos nucleicos individuales. Dependiendo del ensayo, estas pruebas
pueden realizarse directamente desde muestras clínicas o cultivos sanguíneos
positivos para cocos grampositivos en pares y racimos. Además, la detección de MRSA
en cultivos de narinas se puede realizar mediante amplificación de ácidos nucleicos o
el uso de agares cromogénicos selectivos.
La identificación de cepas VISA mediante métodos estándar de susceptibilidad sigue
siendo un desafío; sin embargo, las cepas VRSA con CIMs más altas de vancomicina
pueden ser identificadas utilizando dilución en caldo, sistemas automáticos selectivos y
agares de cribado que incorporan 6 μg/ml de vancomicina.
Al incubarse en aire a 35°C durante 24 a 48 horas, los estafilococos crecen
rápidamente en una variedad de medios, con colonias que varían entre 1 y 3 mm de
diámetro. En agar sangre, los estafilococos producen colonias de color blanco a crema,
opacas. Las colonias de S. aureus típicamente son de color crema, pero
ocasionalmente presentan un pigmento amarillo o dorado (llamado estafiloxantina o
STX), una característica fenotípica que dio lugar al nombre de la especie. S. aureus
puede ser β-hemolítico, y no es raro observar tanto colonias grandes como pequeñas
en el mismo cultivo, una característica fenotípica compartida por varias cepas de MRSA
heterorresistentes. Los CoNS, especialmente S. epidermidis, producen colonias
blancas; sin embargo, otras cepas y especies de CoNS pueden tener colonias con un
ligero pigmento crema. En general, las cepas de CoNS son no hemolíticas; sin embargo,
algunas producen una pequeña zona de β-hemólisis en agar sangre.
Dado que S. aureus se aísla con frecuencia en cultivos mixtos, se utilizan medios
selectivos y diferenciales para facilitar la detección de estos organismos en material
clínico, especialmente en muestras nasales, que se utilizan para detectar esta bacteria
en el tracto respiratorio. El agar manitol-sal es un ejemplo de esto, donde la alta
concentración de sal (7.5%) inhibe muchos otros organismos. El manitol, junto con el
indicador rojo de fenol en el medio, facilita la discriminación de S. aureus, que puede
fermentar manitol, de la mayoría de los CoNS. Sin embargo, dado que otros
organismos pueden crecer en este medio y algunas cepas de CoNS también pueden
fermentar manitol, se requiere de pruebas adicionales. Como se mencionó
anteriormente, los medios cromogénicos selectivos y diferenciales para MRSA se
utilizan más comúnmente para el cribado de cultivos nasales.
Además de su morfología distintiva en la tinción de Gram (cocos grampositivos en
pares y racimos), una característica común de estos organismos es que son catalasa
positivos. La prueba de coagulasa, que mide la capacidad de coagular el plasma al
convertir el fibrinógeno en fibrina, es útil para distinguir S. aureus de otras bacterias
que se parecen. Una suspensión del organismo a identificar se inocula en plasma de
conejo que contiene EDTA e se incuba a 35°C durante 4 horas. El tubo se inclina
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suavemente y se observa la presencia o ausencia de formación de coágulo. Si la prueba
es negativa a las 4 horas, la suspensión se incuba hasta 24 horas.
La lectura a las 4 horas es importante porque algunas cepas producen fibrinolisina, que
puede disolver un coágulo tras una incubación prolongada, lo que causa un resultado
falso negativo. Algunas cepas de MRSA producen una reacción de coagulasa muy débil,
lo que da como resultado una lectura negativa. La coagulasa ligada/unida (también
conocida como factor de aglutinación/cumpling factor) se puede detectar mediante
una prueba de aglutinación en lámina, en la cual una suspensión del organismo se
emulsiona en una lámina con una gota de plasma de conejo. Si está presente la
coagulasa ligada, los organismos se aglutinan. Para la correcta interpretación de esta
prueba, se necesita un control en el que se utilice solución salina en lugar de plasma
para verificar la autoaglutinación. Entre los CoNS, S. lugdunensis y S. schleiferi también
pueden dar positivo para coagulasa ligada, pero se pueden diferenciar de S. aureus
mediante una prueba de coagulación en tubo negativa. Como alternativa, se pueden
utilizar pruebas comercialmente disponibles basadas en partículas de látex recubiertas
con plasma, inmunoglobulina o, en algunas versiones de esta prueba, anticuerpos
contra los antígenos polisacáridos más comunes. El plasma detecta el factor de
aglutinación unido, mientras que la inmunoglobulina se une a la proteína A, y el
anticuerpo contra los antígenos polisacáridos se une a los antígenos de serotipo
presentes en la superficie de S. aureus. Sin embargo, algunas cepas de MRSA pueden
dar resultados negativos con este método debido a los bajos niveles de coagulasa
ligada y proteína A, y pueden ocurrir reacciones falsamente positivas debido a la
presencia de antígenos polisacáridos en algunas cepas de CoNS.
Las cepas de S. aureus que producen una reacción débil de coagulasa pueden ser
sometidas a pruebas adicionales mediante el test de DNasa o el test de endonucleasa
termoestable. S. aureus y S. schleiferi poseen enzimas que pueden degradar ADN, una
DNasa y una endonucleasa termoestable. Ambos tests utilizan el mismo medio básico
que contiene agar, ADN incorporado y el colorante metacromático * azul de toluidina O
(colorante básico). Se coloca una suspensión densa de organismos sobre la placa; tras
24 horas de incubación a 35 °C, aparece un halo rosado alrededor de la colonia, en
contraste con el azul intenso del medio. En las pruebas para la endonucleasa
termoestable, se hierve una suspensión del organismo antes de colocarla en la placa
de ADN.
* Cuando un colorante se une a un tejido/célula/microorg. y aporta un color diferente
al que tiene en solución se dice que es metacromático.
Los CoNS pueden identificarse a nivel de especie según sus perfiles de susceptibilidad a
agentes seleccionados, en particular a la novobiocina, así como mediante pruebas
bioquímicas clave. Una variedad de sistemas comerciales combina varias pruebas
bioquímicas para permitir la diferenciación entre los CoNS. Aunque la mayoría de los
CoNS de importancia clínica son susceptibles a la novobiocina, S. saprophyticus es
resistente a esta. Otras pruebas que pueden utilizarse para diferenciar entre especies
incluyen la actividad de fosfatasa, la producción de acetoína, la susceptibilidad a la
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polimixina, la actividad de la pirrolidonil arilamidasa (PYR test) y la producción de ácido
a partir de carbohidratos.
Aunque las pruebas bioquímicas todavía se utilizan comúnmente para identificar cepas
de Staphylococcus a nivel de especie, la espectrometría de masas MALDI-TOF está
reemplazando rápidamente los algoritmos bioquímicos tradicionales.
Varias especies que anteriormente pertenecían al género Micrococcus y que se han
reportado como involucradas en infecciones humanas han sido reclasificadas en los
géneros Kocuria y Kytococcus. A pesar de esta reclasificación, colectivamente estos
organismos suelen denominarse micrococos. Los miembros de los micrococos tienen
un contenido de G+C más alto que los estafilococos. También son habitantes comunes
de la piel, pero poseen un potencial patogénico relativamente bajo. Sin embargo, se
han registrado infecciones de estos organismos en huéspedes inmunocomprometidos.
Micrococcus luteus y organismos relacionados han sido implicados en diversas
infecciones, como meningitis, infecciones en derivaciones del sistema nervioso central,
endocarditis y artritis séptica.
Los micrococos, además de formar pares y racimos, pueden presentarse como
tétradas. Al igual que los estafilococos, pueden cultivarse fácilmente en el laboratorio y
recuperarse de una variedad de medios. Sin embargo, en comparación con los
estafilococos, tienen un crecimiento más lento, con colonias más pequeñas visibles
después de 24 horas de incubación a 35 °C. Además, dependiendo de la especie, el
color de las colonias puede variar de crema a amarillo (M. luteus) o rojo rosado. Al
igual que con los CoNS, se han empleado diversos sistemas comerciales que
incorporan varias pruebas, como ureasa, producción de ácido a partir de
carbohidratos, esculina y gelatina, para ayudar en la diferenciación de este grupo.
La bacitracina, la lisostafina y la furazolidona se han utilizado para ayudar a diferenciar
los estafilococos de los micrococos. En general, los estafilococos son resistentes a la
bacitracina (disco de 0,04 U), en contraste con los micrococos, que son susceptibles,
mientras que ocurre lo contrario con la furazolidona (disco de 100 μg) y la lisostafina
(disco de 200 μg), a las cuales los micrococos son resistentes. El uso de MALDI-TOF ha
facilitado la identificación de los micrococos, y con la incorporación de más cepas a las
bases de datos actuales, este método se está convirtiendo rápidamente en la opción
preferida para su identificación.
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Tinción de Gram de Staphylococcus aureus Tinción de Gram de Micrococcus luteus

Una tinción de Gram de un cultivo positivo de M. luteus es un coco grampositivo que, al igual
sangre muestra cocos grampositivos en racimos que S. aureus, puede aparecer en pares y
similares a racimos de uvas. Al subcultivar en un racimos. Sin embargo, también tiende a formar
medio sólido, se aisló S. aureus. tétradas, como se muestra en esta tinción de
Gram.

Staphylococcus aureus en agar sangre

En esta imagen se muestra un cultivo de S.

aureus cultivado overnight a 35 °C en agar
sangre. Las colonias son de color crema, opacas y
presentan un borde liso y continuo. Una zona de
β-hemólisis rodea la colonia.

Pigmento dorado de Staphylococcus aureus

S. aureus es capaz de producir el pigmento

dorado (estafiloxantina, STX) que dio origen a su
nombre de especie. En la práctica, las cepas con
este nivel de pigmentación no se aíslan con
frecuencia de muestras clínicas. El aislamiento
mostrado fue incubado overnight en agar sangre
a 35 °C y luego dejado a temperatura ambiente
por un día adicional. Cuando se dejan a
temperatura ambiente o se refrigeran después
de la incubación, los aislamientos tienden a
desarrollar un pigmento más intenso.
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Variación en el tamaño de las colonias de Staphylococcus aureus

No es raro que las cepas de S. aureus, especialmente las cepas de MRSA (resistentes a la meticilina), produzcan colonias
heterogéneas en tamaño y en el grado de hemólisis. Las colonias mostradas se cultivaron en agar sangre durante 24
horas a 35 °C.

Staphylococcus epidermidis en agar sangre Staphylococcus lugdunensis en agar sangre

Staphylococcus epidermidis, en contraste con S. Las colonias de S. lugdunensis en agar sangre se

aureus y otros CoNS, produce una colonia blanca asemejan a las colonias de S. epidermidis; sin
con poco o ningún pigmento. El aislamiento embargo, tienden a ser de color crema, en
mostrado aquí fue cultivado en agar sangre contraste con las típicas colonias blancas de S.
durante 24 horas a 35 °C. Esta cepa de S. epidermidis (se puede apreciar en la imagen
epidermidis también muestra algo de variación anterior).
en el tamaño de las colonias.
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Micrococcus luteus en agar sangre TEST DE LA COAGULASA

Una característica distintiva de M. luteus son las Un método común utilizado para distinguir S.
colonias de color amarillo brillante que produce. aureus de otras especies de Staphylococcus es la
El aislamiento mostrado aquí fue cultivado en prueba de coagulasa en tubo mostrada aquí. S.
agar sangre durante 72 horas a 35 °C. En general, aureus da un resultado positivo, y los CoNS son
Micrococcus crece más lentamente que negativos. Las colonias del aislamiento a
Staphylococcus. identificar fueron emulsionadas en 0,5 ml de
plasma de conejo. El tubo fue incubado a 35 °C
durante 4 horas y luego se inclinó suavemente
para observar la formación de coágulos. El tubo 1
es negativo, con el plasma permaneciendo

2 1
líquido, mientras que el tubo 2 es positivo, como
lo demuestra la formación de coágulos. Los
tubos que den resultados negativos a las 4 horas
deben ser incubados hasta por 24 horas.

Prueba del látex para la identificación de

Staphylococcus aureus
Prueba de la coagulasa en placa
En la prueba aquí mostrada, las partículas de látex
La prueba de coagulasa en placa es un ensayo han sido recubiertas con anticuerpos que pueden
rápido que detecta el factor de aglutinación en la reconocer la coagulasa ligada, así como con
superficie del organismo. La prueba se realiza inmunoglobulina que se une a la proteína A
emulsionando el organismo a identificar tanto en presente en la superficie de la mayoría de las
solución salina, que sirve como control para la cepas de S. aureus. Así pues, S. epidermidis
autoaglutinación (izquierda), como en plasma de (izquierda), que sirve como control negativo, y el
conejo (derecha). La aglutinación de los aislamiento a identificar (derecha) fueron
organismos solo en plasma es un resultado emulsionados con las partículas de látex
positivo. S. aureus (derecha) es positivo en esta recubiertas. El aislamiento mostrado aquí fue
prueba, como se muestra en esta figura, al igual identificado como S. aureus.
que las cepas de S. lugdunensis y S. schleiferi.
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AGAR SALADO DE MANITOL CON OXACILINA

AGAR SALADO DE MANITOL / MEDIO El agar salado de manitol con oxacilina puede
CHAPMAN usarse para detectar la presencia de MRSA (cepas
de S. aureus resistentes a la meticilina) en
El agar salado de manitol es un medio selectivo y muestras nasales, ya que el 7.5% de sal y los 6 μg
diferencial utilizado para el aislamiento e de oxacilina en este medio inhiben la mayoría de
identificación presuntiva de S. aureus. La alta los otros organismos que normalmente colonizan
concentración de sal inhibe el crecimiento de las fosas nasales. MRSA convierte el medio en
muchos organismos que habitan en la piel y las amarillo como resultado de la fermentación del
membranas mucosas. El indicador rojo de fenol manitol. En la imagen, se muestra una placa
incorporado en el medio detecta la producción inoculada con una cepa de S. aureus susceptible a
de ácido resultante de la fermentación del meticilina (izquierda) y una cepa de MRSA
manitol (COLOR AMARILLO). Aquí, CoNS (derecha). La cepa susceptible a meticilina no
(izquierda) y S. aureus (derecha) fueron logró crecer. Como ocurre con la mayoría de las
inoculados en el agar y luego incubados pruebas in vitro para la susceptibilidad a
meticilina, se usa oxacilina (y no meticilina)
debido a su mayor estabilidad.
A

MEDIO SpectraTM MSRA

B
Se muestra un medio cromogénico utilizado para
detectar MRSA, conocido como SpectraTM MRSA
(Thermo Scientific, Remel Products, Lenexa, KS),
que es tanto selectivo como diferencial. Cuando
el sustrato cromogénico incorporado en el agar
inhibitorio es degradado por la acción enzimática
del MRSA, la colonia adquiere un color azul
índigo o añil. En esta imagen se muestra un
cultivo nasal incubado overnight del cual se aisló
MRSA.

Ensayos para detectar PBP2a presente en MRSA

(A) El producto del gen mecA, responsable de la

resistencia a la meticilina, es una proteína
alterada de unión a penicilina, PBP2a. Un
anticuerpo monoclonal contra esta proteína
alterada se utilizó para recubrir partículas de
látex, las cuales fueron empleadas en el ensayo de
aglutinación Oxoid para detectar PBP2a.

(B) Se muestra la prueba Alere PBP2a SA Culture

Colony Test (Alere Scarborough, Inc.,
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Placa de DNasa para diferenciar S.aureus de CoNS Actividad de endonucleasa termoestable

S. aureus produce DNasa, una enzima capaz de Además de la DNasa, S. aureus produce una
degradar el ADN. Esta propiedad se utiliza para endonucleasa termoestable que también puede
ayudar a diferenciar los CoNS (izquierda) de S. degradar el ADN. Para evaluar esta actividad, una
aureus (derecha). Esto es particularmente útil suspensión densa del organismo se hierve y luego
para identificar cepas de S. aureus que producen se usa para llenar un pozo en una placa de ADN que
una cantidad limitada de coagulasa, lo que contiene azul de toluidina. Como se describe en la
puede dar lugar a resultados equívocos o figura anterior, si el ADN se degrada, el color del
débilmente positivos en la prueba de coagulasa. agar cambia de azul a rosa. S. epidermidis no
La única especie de CoNS que comparte esta produce una endonucleasa termoestable
propiedad con S. aureus es S. schleiferi. En esta (izquierda), mientras que la cepa de S. aureus
prueba, un inóculo denso del organismo se (derecha) sí lo hace, como lo demuestra la zona
coloca sobre una placa de agar que contiene rosada alrededor del pozo que contiene S. aureus.
ADN y azul de toluidina. Si el organismo produce
DNasa (derecha), el ADN se degrada, lo que
provoca que el agar se torne rosado en el área
circundante al inóculo debido a las cualidades
metacromáticas del azul de toluidina.
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SUSCEPTIBILIDAD A LISOSTAFINA PRUEBA DE LA OXIDASA MODIFICADA

Varias especies de Staphylococcus son susceptibles a la Una prueba de oxidasa modificada, llamada
endopeptidasa lisostafina, que rompe el pentapéptido prueba de Microdase (Thermo Scientific, Remel
rico en glicina, esencial para los enlaces cruzados en la Products), está disponible para diferenciar
pared celular. La ruptura de estas unidades básicas micrococos de estafilococos. Los micrococos
debilita la pared celular, haciéndola susceptible a la poseen citocromo c, que es esencial para producir
lisis. La susceptibilidad a la lisostafina puede variar una reacción positiva en la prueba de oxidasa,
según la composición del pentapéptido, mientras que los estafilococos clínicamente
específicamente el contenido de glicina. Por ejemplo, relevantes son oxidasa negativos, ya que carecen
S. aureus es muy susceptible, mientras que S. de citocromo c. En el ejemplo mostrado, una
saprophyticus es menos susceptible debido al colonia de S. epidermidis (izquierda) y una colonia
contenido de serina en su puente pentapéptido. Los de M. luteus (derecha) fueron frotadas sobre un
micrococos no son susceptibles a la lisostafina. En este disco impregnado con tetrametil-p-
ejemplo, la prueba se realiza suspendiendo fenilendiamina (TMPD) disuelta en
densamente el organismo desconocido en solución dimetilsulfóxido. El desarrollo de un color azul-
salina y añadiendo un volumen igual de reactivo de púrpura dentro de 2 minutos indica un resultado
lisostafina. La clarificación de la suspensión después de positivo debido a la reacción de la enzima oxidasa
2 horas a 35°C indica la lisis de los organismos. En la con el citocromo c y el TMPD.
imagen, el medio de prueba con lisostafina inoculado
con M. luteus (izquierda) permaneció turbio, lo que
indica un resultado negativo. En contraste, el tubo de
la derecha, inoculado con S. aureus, es positivo, como
se demuestra por la clarificación o lisis de la suspensión
bacteriana. Este ensayo también puede realizarse
como una prueba de difusión en disco.