TEMA 5: MUTACIONES

1. Introducción
Las mutaciones genéticas son cambios estructurales en los genes a nivel molecular
○ Las células tienen métodos para corregir errores en la replicación del ADN, pero a
veces ocurren cambios
○ Si se produce un cambio en la secuencia de bases de un gen, se trata de una
mutación genética. Estos son aleatorios y deben distinguirse de los cambios
deliberados realizados por los biólogos moleculares al editar genes

Según su naturaleza las mutaciones se pueden clasificar en tres grupos:

○ MUTACIÓN GÉNICA O PUNTUAL: la mutación afecta a un único gen, ya que se
producen cambios en un único par de bases (o en unos pocos) por tanto, alteran la
secuencia de los nucleótidos
○ MUTACIÓN ESTRUCTURAL O CROMOSÓMICA: cuando se produce un cambio en
un fragmento cromosómico, viéndose afectado más de un gen, por tanto, alteran la
secuencia de genes del cromosoma
○ MUTACIÓN GENÉTICA, CARIOTIPO O NUMÉRICA: cuando se producen cambios
en el número de cromosoma

Tres tipos de mutaciones (génicas):

Sustitución: una base en la secuencia codificante se reemplaza por una base diferente.
Pueden ocurrir por cambios químicos en las bases o por un emparejamiento incorrecto
durante la replicación. El ejemplo más común de emparejamiento incorrecto es el de G con
T. Si no se corrige antes de que se produzca la siguiente replicación, el resultado es la
sustitución de bases de G por A o de T por C en la cadena codificante

Inserción: se inserta un nt (hay una base extra) → requiere una ruptura en la

columna vertebral de azúcar y fosfato de la molécula de ADN

Deleción: se elimina un nt (una base menos) → requiere dos rupturas

2. Sustitución
○ Transición. Sustitución de purina por purina (G por A, o viceversa) y pirimidina por
pirimidina (C por T, o viceversa)
○ Transversión. Sustitución de purina por pirimidina o viceversa

En ambos casos, al menos un triplete del ARNm se ve alterado y pueden ocurrir dos cosas:
○ Sustitución conservadora: la proteína no se altera porque varía el nt pero no el aa
(sigue siendo el mismo). En este caso las consecuencias son mínimas, pues no
cambia la conformación de la proteína
○ Sustitución no conservadora: el aa si se altera y, por tanto, cambia la proteína o
se altera su conformación espacial. Ej: la anemia falciforme: en esta enfermedad
en el gen que codifica para una de las cadenas de la hemoglobina se sustituye la T
por A, y el ácido glutámico se transforma en valina. Los glóbulos rojos dejan de ser
discoidales y adoptan la forma de una hoz
 Por ejemplo, si tenemos el siguiente gen
(silvestre)
5’...AGG CTT AGC TTA ACG…3’
3’...TCC GAA TCG AAT TGC…5’

Sustitución por transición: G por A y C por G

5’...AGG CTT AAC TTA ACG…3’
3’...TCC GAA TTG AAT TGC…5’

Sustitución por transversión: G por C y C por G

5’...AGG CTT ACC TTA ACG…3’
3’...TCC GAA TGG AAT TGC…5’

3. Inserción/deleción
○ Inserción: se intercala un nt → existen muchas enfermedades debidas a
este tipo de mutación: fenilcetonuria, cretinismo, tirosinosis, albinismo
○ Deleción: se elimina un nt → todos los aa siguientes a la base eliminada
cambian

En este tipo de mutaciones se modifica la pauta de lectura del ARNm y por tanto se
puede producir un cambio completo de la secuencia de aA de la proteína excepto en el
caso de que el número de nt afectado sea múltiplo de tres, ya que en este caso se
eliminarán o adicionaron nuevos aa, pero la pauta de lectura se mantiene

4. Causas
Las mutaciones génicas se pueden producir por tres causas:
○ Errores de lectura
○ Lesiones fortuitas: despurinización, desaminación y formaciones de dímeros de
timina
○ Transposiciones: Fragmentos de ADN (transposones) que cambian de lugar
espontáneamente provocando mutaciones

Además, las mutaciones génicas pueden ocurrir en cualquier momento, pero existe un
mayor riesgo durante la replicación, cuando los errores de emparejamiento de bases a
veces se cometen y no se corrigen mediante la reparación del ADN
La frecuencia de mutaciones aumenta por agentes externos: mutágenos. Hay dos
tipos:
 1. Radiación: aumenta la tasa de mutación. Tiene suficiente energía para provocar
cambios químicos en el ADN. Los rayos gamma, los rayos X y las partículas alfa de
elementos radiactivos, además, la radiación ultravioleta de onda corta es la luz solar
2. Algunas sustancias químicas. Ejemplo. Hidrocarburos aromáticos policíclicos
utilizados como arma química durante la Primera Guerra Mundial

5. Consecuencias
En su mayoría son neutras o perjudiciales y, en algunos casos, letales
○ En el ADN no codificante entre genes de los cromosomas, es poco probable que
las sustituciones de bases tengan algún efecto. Sólo los cambios en las
secuencias codificantes pueden afectar la secuencia aa de un polipéptido
○ Las mutaciones del mismo sentido son sustituciones de bases que cambian un
codón de aa por otro codón para el mismo aa. Estas mutaciones no afectan el
fenotipo, aunque hacen posible que una segunda mutación cambie el codón dado
para un aa diferente
○ Las mutaciones sin sentido cambia un codón que codifica un aa en un codón de
terminación (ATT, ATC, ACT). Por tanto, la traducción finaliza antes de que se
complete un polipéptido. La proteína resultante no funciona correctamente
○ Las mutaciones con sentido erróneo alteran un aa en la secuencia de aa en un
polipéptido. Es posible que no tengan mucho efecto si el nuevo aa tiene una
estructura y propiedades químicas similares a las originales (una sustitución
sinónima) o si está ubicado en una parte de una proteína que no es crítica en
términos de función. Pero las mutaciones sin sentido también pueden tener
efectos graves e incluso letales. Muchas enfermedades genéticas se deben a
estas mutaciones, por ejemplo, la anemia de células falciformes

Una proporción muy pequeña de mutaciones sin sentido mejora el funcionamiento de una
proteína y aumenta las posibilidades de supervivencia de un individuo

Las mutaciones beneficiosas son superadas en número por las mutaciones nocivas, pero
podría decirse que son más significativas debido a la evolución y la adaptación

Cuando se produce una mutación por sustitución de bases en un individuo y la hereda

la descendencia, se produce un nuevo alelo de un gen y la diversidad genética de la
población aumenta muy ligeramente. En términos evolutivos, esto es beneficioso para la
población en su conjunto.
Cuando se secuencia el ADN de un ser humano individual, se encuentran una gran
cantidad de sustituciones de bases que ocurrieron en algún momento del pasado. Estos
son polimorfismos de un solo nucleótido, frecuentemente abreviados como SNP y
pronunciados "snips". Los SNP pueden aparecer en regiones no codificantes del ADN. La
presencia de algunos SNP se asocia con determinadas enfermedades. Esta correlación
permite buscar SNP para determinar la predisposición genética de un individuo a desarrollar
una enfermedad

Las inserciones y deleciones presentan una menor probabilidad de ser beneficiosas que las
sustituciones
● Las inserciones o eliminaciones importantes de nt en un gen casi siempre dan
como resultado que el polipéptido codificado deje de funcionar
● Las inserciones y eliminaciones menores de uno o dos nt también pueden
provocar una pérdida total de función en un polipéptido. Esto se debe a que son
mutaciones del marco de lectura. Cambian el marco de lectura de cada codón
desde la mutación en adelante en la dirección de la transcripción y la traducción
● Las inserciones y eliminaciones de un múltiplo de tres nt no son mutaciones del
marco de lectura, pero aún así pueden tener consecuencias graves (habrá uno o
más aa de más o menos en el polipéptido) expresado a partir de un gen mutado.
Esto puede provocar cambios radicales en la estructura de la proteína y con
ello afectar o no que pueda llevar a cabo sus funciones.

6. BRCA1-Ejemplo
El gen BRCA1 codifica la proteína BRCA1 en humanos

BRCA1 se conoce como gen supresor de tumores, pero su función real es la reparación
del ADN. Puede reparar roturas de doble cadena y ayudar a corregir desajustes en el
emparejamiento de bases

Si este gen muta y la proteína BRCA1 no puede realizar su función, la consecuencia de un

mayor riesgo de mutaciones debido a la falta de reparación del ADN. En las células del
cuerpo, el signo más evidente de esto es un mayor riesgo de formación de tumores y de
cáncer, en particular de mama, ovario y próstata

Se han identificado más de 20.000 variantes (alelos) de BRCA1, incluidas sustituciones,

eliminaciones e inserciones de bases. Estos pueden consultarse en línea en la Base de
Datos de Intercambios de BCRA (https://brcaexchange.org/)
El sistema de numeración de las variantes se explica allí, utilizando un ejemplo de
cada una de las sustituciones, deleciones e inserciones

Las sustituciones de bases del mismo sentido son benignas, al igual que algunas
sustituciones que cambian el aa en el dominio funcional más importante de la proteína
BRCA1

De las variantes que no son benignas, existe un rango de mayor riesgo de cáncer, pero
algunas variantes aumentan el riesgo de cáncer de mama a lo largo de la vida en las
mujeres hasta un 80%

7. Aleatoriedad en las mutaciones

Una consecuencia de la aleatoriedad es que es poco probable que una mutación sea
beneficiosa

Los genes se han desarrollado por evolución durante largos periodos de tiempo, en
algunos casos durante cientos de millones de años. Por lo tanto, un cambio aleatorio
normalmente será neutral o dañino

Hasta donde sabemos, no existe ningún mecanismo para ‘’probar/identificar’’ las

mutaciones adquiridas durante la vida de un organismo de modo que solo las beneficiosas
pasen a la descendencia

Si ocurre una mutación en una célula somática (célula del cuerpo), sus efectos pueden
probarse cuando se expresa el gen, pero la mutación se elimina cuando el individuo
muere

La situación se invierte en el caso de las mutaciones en las células de la línea

germinal, por ejemplo, las células de los testículos y los ovarios de los seres humanos.
Estas mutaciones pueden transmitirse a la descendencia en los gametos, pero no se
‘’muestran/identifican’’ mediante la expresión genética en las células del cuerpo. Los
rasgos que se deben a mutaciones adquiridas durante la vida de un individuo y que
resultan beneficiosos no pueden ser heredados por la descendencia. Esto ayuda a
explicar cómo se produce el cambio evolutivo

Aunque decimos que las mutaciones son aleatorias, si algo puede ser verdaderamente
aleatorio o no es una cuestión discutible, pero las mutaciones ciertamente son
impredecibles y no pueden ser dirigidas por organismo vivos para lograr el resultado
deseado

Las consecuencias de una mutación no influyen en la probabilidad de que dicha

mutación se produzca o no

No se ha descubierto ni es probable que se descubra en los organismos vivos ningún

mecanismo natural para cambiar una base particular con la intención de realizar un cambio
beneficioso en un rasgo. A lo sumo, algunos organismos parecen tener un control limitado
sobre su tasa de mutación general

Aunque las mutaciones pueden ocurrir en cualquier base o posición, algunas bases tienen
mayor probabilidad de mutación que otras

Esto se debe a que una mutación es un cambio químico y algunos cambios químicos
ocurren más fácilmente que otros. La posición de una base dentro del genoma
también afecta la posibilidad de mutación. Esto se debe a las diferencias en cómo se
utilizan las secuencias de ADN codificantes y no codificantes, las cuales afectan la
probabilidad de mutación

Las consecuencias de la mutación dependen de sí ocurre en una célula germinal o en

una
célula somática

Las células germinales dan origen a los gametos, por lo que los genes de las células
germinales pueden transmitirse a la descendencia. Por tanto, se puede heredar un
nuevo alelo, producido por mutación en una célula germinal. En casos raros, un nuevo
alelo puede conferir una ventaja a la descendencia, pero en muchos más casos la
mutación causa una enfermedad genética → Es particularmente importante minimizar el
número de mutaciones en las células productoras de gametos dentro de las gónadas
(ovarios y testículos)

Las mutaciones en las células somáticas se eliminan cuando el individuo muere, por
lo que en su mayoría tienen consecuencias limitadas. Una célula puede morir, pero
generalmente es reemplazada

Las consecuencias de las mutaciones en un grupo de genes pueden ser mucho

mayores. Estos son los genes que desempeñan funciones en el control del ciclo
celular y la división celular → proto-oncogenes, porque las mutaciones pueden
convertirlos en oncogenes, que son genes que causan cáncer
El cáncer se debe a la pérdida de control del ciclo celular, lo que da lugar a una división
celular descontrolada y por tanto a la formación de tumores

8. Las mutaciones como fuente de variación

Un alelo es una variante de un gen que se diferencia en una o más bases de otros alelos
del gen. La mutación cambia la secuencia de bases de un gen, por lo que cambia un alelo
por otro. La mutación aumenta el número de alelos diferentes de genes en una
población, por lo que aumenta la variación genética

La meiosis y la reproducción sexual pueden aumentar la variación generando nuevas

combinaciones de alelos, pero la mutación es la fuente original de toda variación genética

La mayoría de las mutaciones son dañinas o neutras para un organismo individual, pero no
obstante, la mutación es necesaria en todas las especies. Esto se debe a que la
selección natural requiere variación genética, por lo que las especies no pueden
evolucionar sin ella

Especialmente durante épocas de rápidos cambios ambientales, las poblaciones deben

adaptarse a nuevas condiciones

De los muchos alelos producidos por mutación, una pequeña proporción conferirá las
características necesarias para esta adaptación. Sin mutación, la variación genética en
una población disminuiría con el tiempo, haciendo imposible la selección natural.
Esto conduce inevitablemente a la extinción cuando el medio ambiente cambia y la
población no puede adaptarse y evolucionar

9. Knockout génico
El knockout de genes como técnica para investigar la función de un gen cambiándolo para
hacerlo inoperante

Se refiere al uso de ingeniería genética para inactivar o eliminar uno o más genes
específicos de un organismo. Los científicos crean organismos knockout para estudiar el
impacto de la eliminación de un gen de un organismo, lo que a menudo les permite
aprender algo sobre la función de ese gen

Es posible predecir qué secuencias de bases en un genoma son genes mediante

patrones de secuencia de bases característicos. Estos se conocen como marcos de
lectura abiertos (ORFs)

El ARN transcrito tiene el codón de inicio AUG, una secuencia de tripletes que codifican
aa, seguido de un codón de parada

La función de los genes puede no ser inmediatamente obvia cuando se descubren, por
tanto, la eliminación de genes es una técnica para descubrir su función
Esta técnica se ha usado en varios organismos modelo. Los ratones son el organismo
modelo más investigado con este método. Estas son las etapas de la desactivación
genética en ratones:
 1. El ADN se prepara con una secuencia de bases que permite insertarse en el
genoma de células embrionarias de ratón como reemplazo de un gen diana, que por
tanto es
2. Las células en las que este procedimiento ha tenido éxito se seleccionan y se
cultivan en ratones adultos. En lugar de tener dos copias del gen objetivo, estos
adultos tendrán sólo una copia: la otra copia ha sido eliminada.
3. Un 25% de la descendencia de estos organismos no tendrá ninguna copia del gen
(organismos knockout)
4. El estudio del fenotipo de los distintos organismos por comparación da idea de la
función del gen estudiado

10. CRISPR-Cas9
Finales de los años 80: laboratorio de Yoshizumi Ishino de la Universidad de
Osaka → secuencias repetidas muy características en el genoma de Escherichia
coli

1933: equipo del microbiólogo alicantino Francismo Juan Martinex Mojica identificó (de
forma independiente) estas secuencias repetidas en una archea, Haloferax mediterranei

Nombre de sus siglas en inglés Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats
(‘’Repeticiones Palindrómicas Cortas Agrupados Regularmente Interspaces’’)

En un sistema de edición génica que existe en muchas especies de procariotas

Los dos elementos más importantes:

● Regiones CRISPR dentro del genoma
● Enzima Cas9

Acrónimo de Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats:

● Repeats: se repite la misma secuencia de bases varias veces en el genoma

 ● Short: el número de bp que se repite es entre 23-47
● Clustered: las repeticiones están agrupadas en una parte del genoma
● Regularly interspaced: las repeticiones están separadas por otras secuencias de
longitud similar llamadas ‘espaciadores’. Cada espaciador es único y puede haber
tan solo 2 sobre 120 en un locus CRISPR. Derivan de virus que infectan a
procariotas y permiten que se reconozcan secuencias de ADN viral si se produce
una reinfección
● Palindromic: cada secuencia repetida tiene partes que se leen igual de derecha a
izquierda y viceversa (simetría diada). No es verdaderamente palindrómico pero el
nombre CRISPR que contiene la letra P se ha quedado

Los procariotas elaboran ARN guía transcribiendo una repetición y un espaciador

adyacente. La repetición se utiliza para unirse a Cas9 y el espaciador busca secuencias de
bases virales en el ADN

11. Cas9
La enzima Cas9 puede encontrar secuencias de bases específicas de ADN en el
genoma utilizando el ARN guía (ARNg) que está unido a ella

El ARNg se elabora transcribiendo un espaciador y una repetición de una de las

secuencias CRISPR. El espaciador forma secuencias variables de 17 a 20 bases en el
extremo 5' del ARNg. Es complementario al ADN objetivo que se busca. La repetición forma
otras partes del ARNg, que son bicatenarias, lo que genera bucles y una forma molecular
distintiva que promueve la unión a Cas9

Cas se mueve a lo largo de las moléculas de ADN, desenrollándolas y llevando el ADN

adyacente a la secuencia de bases variables del ARNg. Dentro de su estructura, Cas9
contiene dos endonucleasas. Si se reconoce la secuencia objetivo, las endonucleasas
cortan un cuerpo de azúcar-fosfato en cada una de las cadenas de ADN

De este modo se produce una rotura de doble cadena en el ADN objetivo. Así es
como los procariotas reconocen y destruyen el ADN extraño dentro de sus células,
especialmente el ADN viral

12. Usando CAS9 - CRISPR en la edicion de genes

La edición de genes ha sido durante mucho tiempo una aspiración de los biólogos
moleculares

La edición de genes requiere un método para encontrar una secuencia de bases en el

genoma que sea el objetivo y reemplazarla con la secuencia deseada. Este sistema
también permite realizar cambios en la secuencia

Se prepara el ARN guía de edición principal (prime editing guide RNA) (pegRNA)

En el extremo 5' tiene la secuencia guía habitual transcrita a partir de la repetición de

una secuencia CRISPR, junto con las secuencias de bases que permiten la unión a
Cas9

En el extremo 3’ del pegARN, se añaden dos secuencias adicionales inmediatamente

adyacentes entre sí:
● Un sitio de unión del cebador
● Una copia de ARN de la secuencia de bases de reemplazo para el gen que se está
editando, llamada plantilla RT

Se realiza una versión de Cas9 con dos modificaciones:

1. Se adjunta una transcriptasa inversa que puede ensamblar una hebra de nt de

ADN complementaria a la secuencia de bases de la plantilla RT
2. Una endonucleasa en Cas9 se inactiva, por lo que corta en una de las cadenas
de ADN, no en ambas.

El Cas9 modificado y el pegRNA se introducen en las células, donde forman un complejo y

comienzan el proceso de edición genética:

1. Cas9 se mueve a lo largo de la molécula de ADN en busca de la secuencia

objetivo. Esto se identifica utilizando la secuencia guía en el extremo 5' del
pegRNA
2. Cuando el objetivo se reconoce en una de las dos hebras, se realiza un corte en
la secuencia complementaria de la otra hebra. Esto crea extremos 3' y 5' en esa
hebra
3. Las dos cadenas de ADN se separan y el ARN guía se une a la secuencia
objetivo mediante el emparejamiento de bases
4. El sitio de unión del cebador del pegRNA se une mediante emparejamiento de
bases a la otra cadena de ADN, en el extremo 3' del corte, lo que crea un sitio en
el que se puede iniciar la transcripción inversa
5. La transcriptasa inversa agrega nt de ADN, uno a la vez, para extender la
cadena de ADN desde el extremo 3' creado cuando se cortó el ADN. Los nt se
añaden en la dirección habitual 5' y 3', utilizando la plantilla RT para determinar la
secuencia de bases. Esta es la nueva información genética que sustituirá a la
secuencia eliminada
6. Las dos hebras de ADN se vuelven a emparejar. La secuencia ensamblada por
la transcriptasa inversa desplaza a la secuencia que está reemplazando, que se
convierte en una hebra monocatenaria sobrante
 7. Se eliminan nt de la hebra sobrante de ADN monocatenario; así es como se
eliminan las secuencias de bases originales
8. Habrá algunos errores en el emparejamiento de bases en el lugar donde se ha
vuelto a formar el ADN bicatenario, debido a diferencias entre las secuencias de
bases originales y la secuencia de reemplazo. Las enzimas reparadoras del ADN
corrigen el emparejamiento incorrecto. Una de las dos cadenas tiene entonces la
secuencia de reemplazo y la otra tiene la secuencia complementaria

13. Hipótesis para explicar secuencias conservadoras o altamente

conservadoras en genes
Las secuencias conservadas son idénticas o casi idénticas en una especie o grupo de
especies. Las secuencias altamente conservadas son idénticas o similares durante largos
períodos de evolución, por lo que se encuentran en una gama más amplia de especies

Muchas secuencias conservadas se encuentran en elementos codificantes de

proteínas del genoma

También en elementos que se transcriben para producir ARN de transferencia o

ribosomal y en secuencias utilizadas para regular la expresión génica. Todos estos
son elementos del genoma con una función obvia. Si su función permanece sin cambios,
podría haber pocos o ningún cambio en las secuencias de bases durante largos períodos de
tiempo evolutivo. Cuando ocurre la especiación, ambas especies resultantes podrían
heredar estas secuencias e incluso cuando los grupos divergen en muchos de sus rasgos,
podría haber poco o ningún cambio en estos genes y reguladores de genes. Esto explica
cómo algunas secuencias se encuentran en todos los mamíferos o incluso en todos los
vertebrados

Los elementos no codificantes también se conservan en los genomas de muchos

organismos. La función de estos elementos se desconoce en gran medida, pero su
conservación, a veces en una amplia gama de organismos, sugiere que sí tienen
funciones

Pero existe una hipótesis alternativa que se basa en el hallazgo de que los tipos de
mutación no son idénticos en todo el genoma. Los elementos no codificantes
conservados podrían estar en regiones del genoma donde las tasas de mutación son bajas

El gen HACNS1 tiene 548 pb y está altamente conservado en una amplia gama de aves
y mamíferos. Esto implica que se ha mantenido prácticamente sin cambios desde hace
cientos de millones de años. Sin embargo, muestra una tasa de cambio mucho más
rápida en la evolución humana desde los ancestros primates