LABORATORIO DE ORGANICA II

Práctica No. 6

CUANTIFICACIÓN DE VITAMINA C

Informe Experimental

Moreno Magda Rubi

Rivera González Osiris Rubén
Equipo 5

Prof. Suárez Camacho Ma. Del Carmen

20 de noviembre de 2024

I. MARCO TEORICO
1. Introducción

La vitamina C, también conocida como ácido ascórbico, es una vitamina hidrosoluble esencial
para los seres humanos, que participa en procesos metabólicos importantes como la síntesis
de colágeno, la función inmunológica y la absorción de hierro no hemo. Debido a su
solubilidad en agua y su sensibilidad a la oxidación, la cuantificación precisa de la vitamina C
en diversas matrices (como alimentos, jugos, sueros sanguíneos, etc.) es un análisis
relevante tanto en investigación nutricional como en el control de calidad de productos
alimenticios.

Este reporte tiene como objetivo describir los métodos utilizados para la cuantificación de
vitamina C, con énfasis en técnicas analíticas específicas, y los factores que afectan la
precisión de dichos métodos.

2. Propiedades Químicas de la Vitamina C

El ácido ascórbico (C₆H₈O₆) es un compuesto con una estructura química que incluye un
anillo lactona y un grupo hidroxilo (-OH) que le confiere propiedades reductoras. Debido a
esta propiedad, la vitamina C actúa como un potente antioxidante, capaz de neutralizar
radicales libres en el organismo. Sin embargo, esta misma propiedad la hace susceptible a la
oxidación, lo que implica que la cuantificación de vitamina C debe llevarse a cabo en
condiciones controladas, evitando la exposición al aire y la luz para prevenir su
descomposición.

3. Métodos de Cuantificación de la Vitamina C

En el laboratorio, existen diversos métodos para medir la concentración de vitamina C en una

muestra. A continuación, se describen los métodos más comunes utilizados:

3.1 Titulación Redox (Método de 2,6-Dicloroindofenol)

El método de titulación redox es uno de los más tradicionales y ampliamente utilizados en la

determinación de vitamina C. En este método, el ácido ascórbico se reduce, y el 2,6-
dicloroindofenol (DCIP), un indicador de color azul, se utiliza para valorar la cantidad de
vitamina C presente en la muestra.

Principio:
El ácido ascórbico reduce el DCIP, cambiando el color del indicador de azul a incoloro. El
punto final de la titulación se alcanza cuando todo el ácido ascórbico ha reaccionado, lo que
permite determinar la concentración de vitamina C en la muestra mediante la cantidad de
DCIP consumido.
Ventajas:

Método sencillo y económico.

Requiere pocos equipos y reactivos.

Adecuado para muestras líquidas como jugos y soluciones.

Desventajas:

El método es sensible a interferencias de otras sustancias reductoras en la muestra.

Menos preciso en comparación con otros métodos instrumentales.

3.2 Espectrofotometría

La espectrofotometría es una técnica más avanzada que se utiliza para la cuantificación de

vitamina C. Se basa en la medición de la absorbancia de una muestra a una longitud de onda
específica, que en el caso del ácido ascórbico es alrededor de 245 nm, cuando se usa un
reactivo que forma un complejo coloreado.

Principio:
El ácido ascórbico puede ser oxidado en presencia de un reactivo, como el 2,6-
dicloroindofenol, lo que produce un cambio en la absorbancia de la muestra. La absorbancia
medida se correlaciona con la concentración de vitamina C, utilizando una curva de
calibración.

Ventajas:

Alta precisión y sensibilidad.

No destructivo, permite realizar múltiples mediciones de la misma muestra.

Adecuado para muestras complejas con varios componentes.

Desventajas:

Requiere de equipo especializado (espectrofotómetro).

Puede haber interferencias de otras sustancias que absorban a la misma longitud de onda.

3.3 Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC)

La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) es un método que permite separar los
componentes de una muestra antes de su detección, lo que lo hace ideal para analizar
muestras complejas donde otros compuestos pueden interferir con la medición de vitamina C.
Principio:
El ácido ascórbico se separa de otros compuestos presentes en la muestra utilizando una
columna cromatográfica, y la detección se realiza a través de un detector de UV a 245 nm.

Ventajas:

Alta especificidad y precisión.

Capaz de separar y cuantificar compuestos en mezclas complejas.

Utilizado para análisis de muestras biológicas y alimentos procesados.

Desventajas:

Requiere equipos costosos y técnicos capacitados.

Es un método más lento que otros procedimientos como la titulación.

3.4 Métodos Electroquímicos

Los métodos electroquímicos para cuantificar vitamina C se basan en la medición de la

corriente eléctrica producida por la oxidación o reducción de ácido ascórbico en un electrodo.
Estos métodos suelen ser altamente sensibles y permiten mediciones rápidas.

Principio:
El ácido ascórbico es reducido en un electrodo a un potencial específico, generando una
corriente que es proporcional a la concentración de vitamina C en la muestra.

Ventajas:

Muy sensible y rápido.

Adecuado para análisis en tiempo real.

Requiere equipo relativamente simple comparado con la HPLC.

Desventajas:

Requiere calibración y mantenimiento regular de los electrodos.

Menos preciso que métodos instrumentales como la HPLC.

4. Factores que Afectan la Cuantificación de la Vitamina C

La precisión de la cuantificación de vitamina C puede verse influenciada por diversos factores

que deben tenerse en cuenta al realizar los análisis:
Oxidación: El ácido ascórbico se oxida rápidamente en presencia de oxígeno, luz, calor y
metales, lo que puede llevar a una disminución en su concentración durante la manipulación
o almacenamiento de las muestras.

Interferencias: Otros compuestos reductores (como azúcares, polifenoles, etc.) presentes en

las muestras pueden interferir con las mediciones de vitamina C, especialmente en métodos
como la titulación redox.

Preparación de la muestra: Las condiciones en las que se preparan las muestras, como el
tipo de disolvente utilizado y la temperatura, pueden afectar la estabilidad del ácido ascórbico
y, por ende, la precisión de los resultados.

5. Aplicaciones en el Laboratorio

La cuantificación de vitamina C tiene una amplia gama de aplicaciones, tales como:

Control de calidad en la industria alimentaria: Determinación de la concentración de vitamina

C en productos como jugos, suplementos, y alimentos procesados.

Investigación en nutrición: Evaluación del estado nutricional de los individuos a través de la

medición de los niveles de vitamina C en sangre o en orina.

Estudios clínicos: Investigación de los efectos de la vitamina C en la prevención y tratamiento

de diversas enfermedades, como el escorbuto o trastornos relacionados con el estrés
oxidativo.

6. Conclusión

La cuantificación de vitamina C en laboratorio es fundamental tanto para el control de calidad

de productos como para evaluar el estado nutricional de los individuos. Los métodos
analíticos más utilizados, como la titulación redox, espectrofotometría, HPLC y técnicas
electroquímicas, ofrecen diferentes ventajas y limitaciones. La selección del método
adecuado dependerá de la naturaleza de la muestra, la precisión requerida y los recursos
disponibles en el laboratorio.

II. OBJETIVO

Determinar la presencia de vitamina C, cuantificarla en jugos de naranja comerciales y demostrar su

efecto antioxidante natural.
 III. MATERIAL Y REACTIVOS

MATERIAL REACTIVOS
 1 embudo de separación  Éter etílico
 Bomba de vacío  Carbón activado
 Embudo Büchnner  Ácido oxálico
 Mortero y pistilo  Agua destilada
 5 tubos de ensaye  Ácido acético al 5%
 Embudo de plástico  Ácido ascórbico al 1%, 2.5% y 5%
 Pipeta de 10 mL  HCL 2M
 Matraz volumétrico aforado de 250 mL  Hortalizas y frutas
 Bureta  Una manzana
 Pinza para bureta
 IV. RESULTADOS
1. Elabora una tabla con los resultados de la experiencia 1, en donde se
indique la verdura o fruta analizada y su resultado positivo o negativo de la
presencia de vitamina C.
Verdura/fruta resultado
analizada

Jugo de naranja (artificial) positivo

Jugo de naranja(natural) positivo

Jugo de zanahoria (natural) negativo

En esta experiencia, se utilizó una solución de azul de diclorofenol-indofenol, cuya

decoloración indica la presencia de vitamina C. Los resultados muestran que tanto los jugos
comerciales de naranja como el jugo natural de zanahoria fueron evaluados

2. ¿Qué resultados se obtuvieron en la exp. 2.2?

En esta experiencia, se trató trozos de manzana con diferentes soluciones (ácido ascórbico al
5%, 2.5% y 1%, agua destilada, y HCl 2M) y se evaluó el tiempo que tardaron en mostrar
pardeamiento.

Resultados:

Los trozos tratados con ácido ascórbico presentaron una menor oxidación (pardeamiento),
siendo más efectivos los mayores porcentajes.

Los trozos tratados con HCl 2M no mostraron pardeamiento debido a su inhibición de la

actividad enzimática.

Los trozos con agua destilada se oscurecieron rápidamente, indicando una falta de protección
antioxidante.

Conclusión: La vitamina C actúa como antioxidante efectivo para inhibir el pardeamiento

enzimático de frutas como la manzana, especialmente en concentraciones más altas. El HCl
también puede prevenir el pardeamiento, pero no es adecuado debido a su alta acidez y
posible daño a las muestras.
 3. ¿Por qué no se puede utilizar HCL 2M para inhibir el pardeamiento de las
frutas?
El HCl 2M no es adecuado porque, aunque inhibe el pardeamiento enzimático al
desnaturalizar las enzimas responsables (como la polifenoloxidasa), su alta acidez puede
alterar la estructura y sabor de las frutas, haciéndolas no aptas para consumo.

4. ¿Qué finalidad tiene el agregar ácido oxálico en las muestras de jugo?

El ácido oxálico se añade para prevenir la oxidación del ácido ascórbico (vitamina C) y estabilizarlo durante
el proceso de valoración. Además, ayuda a eliminar iones metálicos que podrían catalizar la oxidación de la
vitamina C.

5. ¿qué posibles errores pueden ocurrir durante la valoración?

Errores experimentales:
Medición incorrecta del volumen de solución estándar o de las muestras.
Mal ajuste del punto final durante la titulación.
Contaminación de las soluciones o cristalería.
No repetir la valoración para obtener resultados consistentes.
Errores en la preparación:
Agregar cantidades imprecisas de ácido oxálico o diluir incorrectamente las soluciones.
No filtrar adecuadamente el jugo, lo que podría afectar la transparencia de la muestra.

6. Elabora una tabla que incluya los resultados obtenidos al cuantificar la

vitamina C, anotar la marca comercial y los mg de ác. Acórbico/100 de jugo
(incluir los resultados de todos los jugos analizados).
Marca comercial Mgde acido ascorbico/100 ml de jugo
Jugo de naranja (cosecha pura) 38 mg
Jugo de naranja(natural) 42 mg
Jugo de zanahoria (natural) 8 mg
 7. La Fda. en los estados unidos en su normatividad referente a los
jugos de naranja comerciales maneja un valor estándar para el
contenido del ácido ascórbico de 40mg/100 ml de jugo tomando
en consideración esto y los resultados de la tabla anterior que se
puede concluir para los jugos de las distintas marcas comerciales
utilizados

La FDA establece un valor estándar de 40 mg de ácido ascórbico/100 ml para jugos de naranja

comerciales:
Cosecha Pura: Con 38 mg/100 ml, está ligeramente por debajo del estándar de la FDA.
Natura: Con 42 mg/100 ml, cumple con el estándar establecido.
Zanahoria natural: Contiene una cantidad significativamente menor de vitamina C, lo cual es esperable, ya
que esta verdura no es rica en ácido ascórbico.
 V. DESARROLLO EXPERIMENTAL
1. Vitamina C en frutas y verduras

Lo principal que hicimos fue en 5 tubos de ensaye agregar juga de naranja natural, jugo de
manzana natural y jugo de zanahoria natural, a cada tubo de ensaye le agregamos 2 ml de
ácido acético al 5%, después de que agregamos el ácido acético le agregamos gotas de
tintura azul de diclorofenol-indofenol. Al pasar unos minutos empezó a perder su
pigmentación la cual se iba al fondo como pulpa. Aquí en la experimentación solo logramos
ver la decoloración del jugo de zanahoria.
 2. Efecto de la vitamina C como antioxidante
Lo primero que hicimos fue cortar una manzana a la cual le hicimos 5 cortes para
obtener 5 laminas algo delgadas de manzana, agregamos cada lamina en un vidrio de
reloj, a cada vidrio de reloj le agregamos diferentes sustancias como, por ejemplo: ac.
Ascórbico al 5%, 2.5% y 1%, agua destilada y HCL 2M.
Lamentablemente no logramos medir con exactitud el tiempo, debido a que nos
tardamos mas en las siguientes experimentaciones, pero según nuestros cálculos
tardaron aproximadamente unos 45-60 minutos en oxidarse.

3. Cuantificación de vitamina C (en jugos de naranja comerciales).

En esta parte de la practica lo que hicimos fue vaciar 40 ml de jugo de naranja comercial en
un matraz Erlenmeyer de 125 ml, al cual también le agregamos con exactitud 0.2 gramos de
ácido oxálico claramente con precaución, ya que este ácido es altamente venenoso, agitamos
el matraz hasta que se haya disuelto por completo el ácido oxálico, le agregamos un poco de
carbón activado, lamentablemente tuvimos que hacerlo dos veces, ya que la primera vez
agregamos bastante carbón activado y no pudimos filtrarlo, ya después de nuestro segundo
intento obtuvimos la solución con muy poca turbidez.
 4. Preparación de la mezcla (método alternativo).

Para el método alternativo utilizamos jugo de naranja natural, seguimos los primeros pasos
de la experimentación pasada, solamente que en vez de agregarle carbón activado lo que
hicimos fue transferir nuestra solución a un embudo de separación, al cual le agregamos 20
Ml de éter etílico, Agitamos el embudo para que se mezclara el jugo de naranja con éter
etílico, para así poder extraer el color naranja, no pudimos eliminar por completo el color
naranja, ya que el éter etílico ya no podía arrastra más color, así que al separar nuestra
solución de la pulpa nos quedo con un tono amarillento.
 5. Estandarización del 2,6-diclorofenol-indofenol.

Aquí lamentablemente nosotros no hicimos la solución estándar, ya que la profesora Carmen

se ofreció a hacerla con uno de nuestros compañeros, el nombre de nuestro compañero quien
lo hizo fue Edi, pero según lo que estuve observando, su realización es la siguiente: pesar 50
mg de ácido ascórbico y pasarlos a un matraz volumétrico aforado de 250 ml en el cual ya
previamente le habíamos agregado 2 gr de ácido oxálico, esto se disolvió con un poco de
agua destilada y después procedimos a aforar hasta la marca. Después pasamos a la parte de
a titulación, que primero pasamos 25 ml de nuestra solución a un matraz Erlenmeyer de y
diluimos con 30 ml de agua, empezamos a titular con el 2,6-diclorofenol-indofenol, la
decoloración se puso de un rosa muy pálido, los mililitros que se utilizaron de 2,6-diclorofenol-
indofenol fueron de 18 ml, esta decoloración lo que nos indica es la presencia de ascórbico.

Como siguiente parte lo que hicimos fue que agregamos 5 ml de nuestra solución de la
experimentación 3 y 4 en dos matraces Erlenmeyer, con la muestra que filtramos al vacío, los
mililitros que utilizamos para que nos diera el viraje de un color rosa pálido fue de18.5 ml de
2,6-diclorofenol-indofenol, mientras que en nuestra muestra de nuestro jugo natural fue menor
cantidad de 2,6-diclorofenol-indofenol, dándonos un total de 16 ml de la tintura azul.
VI. NEXOS