CAPÍTULO III.

TÉCNICAS DE LOS EXÁMENES PARASITOLÓGICOS

En revisiones realizadas se constata que en general no existe una técnica que sea
completamente eficaz para el diagnóstico de todas las parasitosis intestinales y la técnica
que se elija dependerá de cual sea el objetivo a diagnosticar. Por otra parte, en ocasiones es
tan o más importante la destreza del que realiza el diagnóstico que el tipo de técnica
seleccionada.
Otro aspecto significativo es la adecuada recogida de la muestra y la correcta identificación
del frasco donde se trasportará al laboratorio. Como la excreción de los quistes y huevos de
los parásitos tiene un ritmo cambiante resulta apropiada la indicación de exámenes seriados
(al menos 3) en diferentes días para su búsqueda.
Las muestras de heces deben ser transportadas inmediatamente al laboratorio después de
recogidas, pero si van a estar más de dos horas, se tienen que conservar en refrigeración a 4
°C y en caso de que se observen después de las 4 o 6 horas de recogida, sería conveniente
el uso de persevantes como la formalina al 5 o al 10 %, los que se deben mezclar con las
heces, en proporción de tres partes del líquido preservante por una de heces.
Principales métodos de diagnóstico coproparasitológicos
Método de examen directo con eosina roja al 1 % o solución de lugol
Es la más antigua de todas las técnicas y es utilizada para el diagnóstico de todas las
parasitosis intestinales, aunque puede ser especialmente útil para la observación de las
formas móviles de trofozoitos.
Procedimiento:
1. Se coloca en el centro de un portaobjetos una gota de una solución de Lugol.
2. Se toma un pequeño fragmento de heces de la superficie y se diluye en la gota de
lugol sobre el portaobjetos.
3. Si existen partículas groseras se apartan y se coloca un cubreobjetos (es importante
tomar partes mucosas o muco sanguinolentas, en el caso de que existan).
4. Se observa al microscopio con lente ocular 10 X. Primero con un objetivo 10 X y
después con 40 X.
5. Se observa toda la lámina con ocular 10 X y con objetivo 10 X para el diagnóstico
de larvas y huevos de helmintos. Los trofozoitos y quistes de protozoos se
destacarán como elementos nacarados translúcidos sobre el fondo lugol, que
impregnarán todos los elementos, excepto los protozoos cuando son viables. Con la
solución eosina se observarán quistes incoloros en un fondo rosado, y trofozoitos y
larvas con movimientos
6. Cuando estos elementos translúcidos y claros se localicen con el objetivo 10 X en
formas de pequeñas masas redondeadas se pasará al objetivo 40 X para
identificarlos.
En la preparación tratada con solución Lugol, la sustancia cromatínica se destaca sobre el
citoplasma pardo–amarillento, y es posible distinguir la estructura nuclear. Esta solución de
Lugol para uso parasitológico puede venir preparada comercialmente, pero en caso
contrario se podrá elaborar de la siguiente forma:
 Solución de Lugol parasitológico.
 Iodo cristaloide: 2 gr.
 Ioduro de potasio: 4 gr.
 Agua destilada: 100 ml.
 Técnica de Willis y Malloy (Modificada por Basnuevo)
Constituye un método de enriquecimiento de huevos a través del uso de un medio con una
densidad de 1200, lo que permite concentrar los huevos de los helmintos más frecuentes en
Cuba (Trichuris trichiura, Ascaris lumbricoides y Necator americanus). Este método fue
creado por Willis en 1921 y es especialmente útil para los huevos de Ancylostomidios. El
método original usa solo sal, pero en Cuba fue introducida hace más de 50 años una
modificación que emplea azúcar y formol, y disminuye la cantidad de cloruro de sodio, y es
en esa forma que se utiliza actualmente en la red nacional de laboratorios.
1. Preparar una solución de alta densidad a base de sal, azúcar y una pequeña cantidad
de formol, en las siguientes proporciones:
Cloruro de sodio..........................................180 g.
Azúcar........................................................500 g.
Formol al 40 %.............................................20 ml
Agua corriente...........................................1200 ml
Esta solución debe dar una densidad de 1200.
2. En un vasito plástico o de cristal de no más de 30 ml de capacidad, preferentemente
cilíndrico o cónico con el extremo inferior más estrecho, se vierten de 10 a 15 ml de
la solución anterior y en ella se disuelven aproximadamente 2 gramos de las heces
que se investigan. Esta debe hacerse con un aplicador desechable de madera o
plástico, se deben extraer las grandes partículas no disueltas que resulten de la
solución de las heces.
3. Se procede a llenar el vasito con la misma solución hasta el borde sin que rebose.
4. Se coloca un portaobjetos sobre el vasito, de manera que el líquido contacte con la
superficie del portaobjetos y se mantiene así de 15 a 20 minutos.
5. Pasado ese tiempo, se toma el portaobjetos con un movimiento de volteo rápido de
manera que el líquido no se escurra de la lámina y se lleva al microscopio para su
observación.
6. Observar con ocular 10 X y objetivo 10 X, debe recorrer toda la lámina con ese
aumento, antes de que la preparación comience a secarse.
Concentración de formol-éter/ etil acetato de Ritchie
Esta técnica es utilizada para concentrar quistes de protozoos y huevos de helmintos. Sin
embargo, no es adecuada para la observación de trofozoitos.
1. Si la materia fecal es dura se agrega solución salina y se mezcla hasta que quede
líquida en cantidad aproximada de 10 ml.
2. Se pasará por una gasa doble y húmeda, una cantidad aproximada de 10 ml de la
materia fecal líquida a un tubo de centrífuga de 15 ml.
3. Se centrifugará a 1500-2000 r.p.m. por dos minutos, y se decantará el sobrenadante.
4. Se diluirá el sedimento en solución salina, se centrifugará como antes y se
decantará. Este paso se puede repetir tantas veces como sea necesario hasta que el
sobrenadante salga claro.
5. Se agregará al sedimento aproximadamente 10 ml de formol al 10 % y se mezclará
bien, se dejará reposar por cinco minutos.
6. Se agregará 3 ml de éter o de acetato de etilo, se tapará el tubo con un tapón de
goma y se agitará de manera fuerte durante treinta segundos. Se destapará
cuidadosamente.
7. Se centrifugará a 1500 r.p.m. por cinco minutos más. Se formarán cuatro capas
distribuidas así: una de sedimento pequeño que contiene los huevos, quistes y otros
elementos una capa de formol, un anillo con restos de materiales fecales y el éter en
la superficie.
8. Con un palillo se aflojará el anillo con restos de materia fecal de las paredes del
tubo, para decantarlo cuidadosamente con las tres capas superiores. Se tratará de
que el sedimento no se contamine, para ese fin si es necesario se podrá limpiar con
un algodón las paredes del tubo para evitar que el sedimento se contamine con los
restos del anillo de residuos.
9. Se mezclará el sedimento con la pequeña cantidad de líquido que baje por las
paredes del tubo y se harán preparaciones en fresco con lugol para ser observadas en
el microscopio.
Coloración de Ziehl Neelsen modificada
Este procedimiento utiliza 4 soluciones en pasos continuos de la tinción. Se emplea para el
diagnóstico de certeza de los coccidios intestinales: en especial: Cryptosporidium y
Cyclospora cayetanensis.
1. Se realizará una extensión de la materia fecal.
2. Se fijará en metanol el extendido durante 5 minutos y se secará al aire.
3. Se colocarán las láminas durante una hora en una solución de fucsina fenicada.
4. Se lavará con agua de la pila (grifo).
5. Se diferenciará por la inmersión de la lámina en solución de H2SO4 al 2 % durante
20 segundos con agitación constante de la lámina.
6. Se lavará con agua de la pila.
7. Se coloreará con una solución de verde malaquita al 5 % durante 5 minutos.
8. Se lavará con agua de la pila.
 9. Se añadirá aceite de inmersión y se le colocará un cubreobjetos.
10. Se examinará al microscopio con objetivo 40 X.
Preparación de la solución de Ziehl Neelsen modificada
Solución A
Fucsina fenicada_________ 150 gr.
Alcohol (etanol L 95 %) _______ 1000 ml

Solución B
Solución A ___________ 10 ml
Agua fenicada al 5 % _______ 90 ml

Técnica de Kato-Katz
Es una técnica que consiste en una modificación volumétrica del método gravimétrico
original y es utilizada para el diagnóstico cuali-cuantitativo de las helmintiasis intestinales.
1. Embeber las tiras de acetato humectable en una solución al 50 % de glicerina verde
malaquita por no menos de 24 horas antes de usarse.
2. Transferir una pequeña porción de heces sobre un pedazo de papel de deshecho (el
papel de un periódico viejo puede ser ideal).
3. Colocar una malla de nylon sobre las heces y presionar se debe ayudar con un
aplicador plástico.
4. Tomar con la espátula la materia fecal colada y colocarla en el orificio de la placa
plástica previamente situada sobre un portaobjetos limpio.
5. Levantar con mucho cuidado el plástico de manera que la materia fecal quede sobre
el portaobjetos según la forma y volumen del orificio.
6. Cubrir la muestra fecal con el cuadrado de celofán embebido con la solución de
glicerina-verde malaquita.
7. Invertir la preparación y presionar sobre una superficie dura y lisa para extender la
muestra de forma pareja de manera que llegue a cubrir un área de 20 a 25 mm de
diámetro.
8. Se deja reposar la muestra durante una hora a temperatura ambiente antes de su
examen microscópico. La lámina puede ser leída mucho antes si se coloca en una
incubadora a 40 °C o debajo de una lámpara incandescente o de una fluorescencia
intensa.
9. El número de huevos multiplicado por 24 nos dará el número de huevos por gramo
de heces. Esto es debido a que la capacidad del orificio donde se midió el volumen
de heces, es equivalente a 41,7 mg.
Recomendaciones adicionales para la lectura:
1. Las láminas en el caso de huevos de Trichuris trichiura pueden ser leídas
inmediatamente después de haberse montado.
2. En el caso de Ascaris lumbricoides la lectura puede efectuarse en cualquier
momento.
3. Los huevos de Ancylostomidios (Necátor americanus y Ancylostoma duodenale) no
son visibles hasta después de 30 minutos como mínimo y deben leerse antes de las 6
horas de montada la lámina.
4. Los huevos de Hymenolepis nana también deben leerse antes de las 6 horas de
montada la lámina.
Preparación de la solución de glicerina-verde malaquita se prepara de la siguiente
forma:
o 100 ml de agua destilada.
o 100 ml de glicerina.
o 1 ml de verde malaquita al 3 % (azul de metileno al 3 % en su defecto).
Materiales empleados para la técnica de Kato-Katz.
1. Mallas de 105 perforaciones por mm2, espátulas, acetatos humectable la solución de
glicerina verde malaquita, y las plaquitas plásticas o de aluminio con los orificios de
6 mm de diámetro.
Método de coprocultivo de Harada - Mori
Es útil para diferenciar las larvas de Necator americanus y Ancylostoma duodenale entre sí,
porque las características morfológicas de los huevos no permiten la diferenciación
concluyente. (4,5)
El método consiste en obtener a partir de los huevos de Ancylostomidios las larvas que
podrían ser rabditoide o filariforme según el tiempo de evolución. Las características
morfológicas de las larvas hacen posible su diferenciación.
Los cultivos deben mantenerse durante un mínimo de 8 días a temperatura de 24 a 29 °C
para tener la seguridad de que todas las larvas tienen tiempo suficiente para llegar a la fase
infectante. Si los cultivos se han conservado a temperaturas inferiores el examen debe
demorarse dos o más días.
Procedimiento para el cultivo
1. Se realiza una extensión fina (1 a 2 mm) de heces fecales en una cara del tercio
medio de tiras de papel de filtro de 13 x 120 mm, el tamaño varía según el largo y
ancho del tubo que se utilice
2. Colocar las tiras de papel de filtro en tubos cónicos de centrífuga o tubos de ensayo
con rosca que contengan aproximadamente 3 ml de agua destilada sin que toquen
las heces, se contacta la parte limpia del papel con las paredes del tubo.
 3. Guardar el cultivo a temperatura ambiente (24 a 28 ºC) por 7 días, se debe revisar
diariamente el nivel de agua y añadir esta delicadamente por la pared del tubo,
siempre que sea necesario para mantener el nivel adecuado.
Obtención de larvas de los cultivos
1. Con una pipeta de Pasteur se extrae previamente agua del fondo del tubo y se vierte
en un tubo de cónico de centrífuga.
2. Añadir agua destilada hasta cubrir totalmente la tira de papel de filtro.
3. Reposar 2 horas o más.
4. Retirar con una pinza el papel de filtro y desecharlo en un recipiente con
desinfectante.
5. Pasar esta agua que contiene el tubo, a uno o más tubos de centrífuga adicionales.
6. Centrifugar y decantar.
Se debe examinar cada tubo por separado.
Examen de larvas
1. Se coloca una o dos gotas de sedimento que contiene las larvas muertas sobre una
lámina portaobjeto, colocar un cubreobjetos de tamaño adecuado.
2. La lámina se debe examinar con un aumento bajo de 100 x en el microscopio
compuesto, con luz reducida y diafragma cerrado para poder observar las larvas
refringentes, posteriormente pasar a mayor aumento para poder observar las
características diferenciales de las larvas observadas.
3. Utilizar microscopio con escala ocular y previamente calibrado para determinar las
características de las larvas.
Nota: Si se detectan larvas vivas en el sedimento, el fondo del tubo debe ser sumergido en
agua caliente a 50 ºC a 60 ºC o añadir unos ml de ácido acético (20 ml de ácido acético
glacial en 80 ml de agua destilada) a la suspensión, cuando se utiliza ácido acético hay que
volver a concentrar las larvas por centrifugación.
Clave para la diferenciación de las larvas filariformes de Nemátodos en coprocultivos
humanos. Strongyloides (S.stercoralis o S. fuelleborni)
El esófago tiene un tamaño aproximado que corresponde a la mitad de la longitud del
cuerpo y es delgado (14 – 17 µm) y está desprovisto de vaina cuticular, el extremo de la
cola no es puntiaguda y tiene un aspecto dentado. (4,5)
Necátor americanus:
 El cuerpo (sin incluir la vaina) presenta una longitud de 500-600 µm. Tiene notables
procesos dentarios paralelos de 15 µm de longitud. El intestino en la unión esófago-
intestinal es tan ancho como el bulbo esofágico. La cola (con el ano en la punta)
tiene menos de 72 µm (50 - 72 µm). Se observan estriaciones transversas notables
sobre la vaina en la región de la cola.
Ancylostoma duodenale:
 El cuerpo (sin incluir la vaina) presenta una longitud de 600-700 µm. Tiene unos
procesos dentarios no muy notables, de aproximadamente de 10 µm de largo. El
intestino en la unión esófago intestinal es más angosto que en el bulbo esofágico. La
cola tiene más de 73 µm de largo (75- 94 µm). Las estriaciones transversas sobre la
vaina en la región de la cola son poco notables.
Método de Baermann
 Este método sirve especialmente para la concentración de larvas de helmintos y
puede ser utilizado para concentrar otros parásitos como los trofozoitos de
Balantidium coli. Se basa en las propiedades del higrotropismo y termo-tropismo
positivo. Es decir, que las larvas de helmintos y trofozoitos de protozoos que tengan
estas propiedades emigrarán hasta la parte inferior del embudo donde estará el agua
a una temperatura más alta.
Procedimiento:
1. Colocar un embudo sobre el soporte, con las pinzas cerradas y sobre la parte ancha
del embudo se pone la tela de alambre sobre la cual se colocarán algunas bandas de
gasas. El tallo del embudo recibirá un trozo de caucho provisto de una pinza.
2. Colocar de 8 a 10 gramos de heces fecales sobre la gasa.
3. Llenar el embudo con agua, a temperatura de 37 a 39 ºC de manera que las heces
queden en contacto con el agua a través de la gasa.
4. Reposar durante 1 hora, tiempo en el cual las larvas que se encuentran en las heces
pasaran al agua tibia, para acumularse en el tubo de hule.
5. Pasado éste tiempo, abrir las pinzas y recoger el agua en el vaso o en los tubos para
ser precipitado.
6. Centrifugar 1 minuto a 1500 rpm.
7. Aspirar el sedimento con una pipeta de Pasteur.
8. Se coloca una gota del sedimento en una lámina portaobjetos, agregar una gota de
solución lugol y cubrir la preparación con un cubreobjetos.
9. Observar al microscopio con objetivo 10 x, pasar a 40 x para detallar las estructuras.
Método de la Copa Cónica
Este método sirve especialmente para huevos pesados de trematodos como los de Fasciola
hepática. (4,5)
Procedimiento:
1. Se toma una muestra de 5 o 6 gr. de heces, y se mezcla con 200 ml de agua.
2. Se filtra la suspensión y se recoge en una copa cónica graduada entre 250 y 500 ml.
3. Se deja reposar 1 hora, se decanta el sobrenadante y se le agrega agua
cuidadosamente, de nuevo se debe mezclar con el aplicador. Se deja reposar 1 hora
más.
 4. Se repite el lavado hasta que el líquido sobrenadante quede claro.
5. Decantar cuidadosamente de nuevo el sobrenadante y se analiza el sedimento con
objetivo de 10 x.
6. Si desea se puede centrifugar la muestra y hacer más fácil la observación.
Método de Graham
Este método debe su nombre a Graham quien introduce la cinta adhesiva de celofán para el
diagnóstico de Enterobius vermicularis. Comúnmente se observan los huevos del parásito,
pero en ocasiones pueden observarse hembras grávidas de Enterobius con el útero repleto
de huevos.
Procedimiento:
1. Se le orienta al paciente que previamente a la toma de la muestra no debe lavarse ni
defecar, para evitar el arrastre mecánico de los huevos de Enterobius vermicularis.
2. Se coloca una cinta adhesiva transparente en uno de los extremos de un depresor
con la parte adherente, se debe sujetar hacia fuera, de manera fuerte entre el pulgar
y el índice
3. Se debe inclinar al paciente de forma que quede expuesta la región anal, se presiona
la cinta adhesiva contra dicha región, hacia la izquierda y derecha, se debe tener
cuidado de cubrir toda el área entre la porción seca y húmeda.
4. Pegar la cinta sobre el portaobjeto, e identificar la lámina con los datos del paciente.
5. Observar al microscopio con lente ocular 10 X.