RANDY MEJÍAS GONZÁLEZ REPLICACIÓN

Características generales de la replicación del ADN

1- Ocurre solo en la fase S del ciclo celular

2- Carácter semiconservativo: Cada molécula de ADN que se forma contendrá una banda
que proviene del ADN que sirve de molde o patrón, y una de nueva formación.

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3- Por complementariedad de bases: La secuencia de base de cada hebra sirve

como molde o patron para la síntesis de proteínas

4- Crecimiento unidireccional de cada cadena: En dirección 5´ 3´.

Los desoxinucleótidos son añadidos uno a uno al extremo 3´-OH de la cadena en
crecimiento por ADN polimerasas.

5- Gradual y repetitivo:

6- Carácter antiparalelo: Las hebras nueva se forman en dirección 5´→3´ tomando como
molde las hebras orientadas en dirección 3´→5´.

7- Acoplada a la hidrólisis del pirofosfato (P-P)

Requerimientos de la replicación:
Para que la replicación tenga lugar, es necesario un número considerable de moléculas, en
especial de macromoléculas. Entre estas se encuentran los cuatro tipos de nucleósidos
trifosfatados y los cuatro desoxinucleósidos trifosfatados, así como iones divalentes,
especialmente el Mg2+ que siempre acompaña a los nucleótidos en sus reacciones
En primer lugar se encuentran las enzimas, de las cuales existen cinco tipos principales: las
polimerasas, las helicasas, las topoisomerasas, las ligasas y las nucleasas:
1. Las ADN polimerasas catalizan la unión de un nucleósido trifosfatado al 3´-OH de otro
nucleótido que forme parte de una cadena polinucleotídica. Esto significa que ninguna de
ellas es capaz de iniciar la polimerización, por lo cual se requiere de una molécula que
aporte el 3´-OH, por lo general es un ARN, que por ello recibe el nombre de ARN iniciador.
La adición de los desoxinucleótidos se hace de forma reiterativa, de manera que la hebra
crece de uno en uno. En la replicación del ADN intervienen cuatro polimerasas
(abreviadamente pol): pol-α/iniciadora, que además posee actividad de ARN polimerasa,
pol-ε, pol-δ y pol-γ. Las tres primeras replican el ADN nuclear y la última, el mitocondrial.
2. Las helicasas son enzimas que desenrollan la doble hélice del ADN y producen zonas
monocatenarias, para lo cual necesitan estar acopladas a la hidrólisis del ATP
3. Las topoisomerasas interconvierten los topoisómeros del ADN. Por lo general estas
enzimas introducen superenrollamientos negativos en el ADN, haciendo un corte en el
mismo y haciendo pasar una o las dos hebras por la hendidura creada
4. las ligasas unen dos fragmentos de una hebra de ADN que se encuentren contiguos, es
decir, entre dos nucleótidos sucesivos, siempre que estos fragmentos estén formando
parte de una molécula de ADN de doble hebra.
5. También se requiere de proteínas que no presentan actividad enzimática, entre ellas las
que marcan sitios en el ADN, las que reclutan otras proteínas, las que incrementan la
actividad o la procesividad de algunas enzimas, etc

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Etapas de la replicación:

PRE-INICIACION:
FORMACIÓN DEL COMPLEJO PRE-REPLICATIVO: El primer paso en la formación del
complejo prerreplicativo es la identificación y la marca de los orígenes de la replicación.
No se ha encontrado ninguna característica del ADN en la zona del origen en eucariontes
superiores, salvo que contiene regiones ricas en pares AT. Esto se realiza cuando el
complejo de reconocimiento del origen ORC se une al ADN en miles de sitios de los
cromosomas, de manera que en la transición M→G1 el ORC se ha unido al ADN en los
sitios donde potencialmente puede dar inicio la replicación. El complejo ADN-ORC recluta
la proteína Cdc6 que contribuye a estabilizar la unión del ORC al ADN.
Mientras tanto el APC con su cofactor Cdh1 ha marcado con ubiquitina a la geminina que
se mantenía unida a Cdt1 (también conocida como factor de licencia). Al ser destruida por
proteólisis la geminina, la Cdt1 queda libre de su efecto inhibitorio y es reclutada hacia el
complejo ADN-ORC-Cdc6. Los pasos siguientes son el reclutamiento y el ensamblaje de
la helicasa Mcm2-7 en el origen.
Al menos dos hexámeros de Mcm2-7 se montan en el origen de replicación, en una
disposición que se denomina “cabeza con cabeza”. Esta disposición permitirá que durante
la iniciación una helicasa se mueva en un sentido y la otra, en sentido contrario. De esta
forma, a mediados de la fase G1 queda constituido el complejo prerreplicativo.
Las helicasas separan las cadenas del ADN y la proteína replicativa A (RPA) estabiliza
las hebras simples e impide que se vuelvan a unir. Queda así formado el ojal de
replicación.
Se incorpora la polimerasa épsilon formando un complejo con otras proteínas, pero por
comodidad la representaremos sola. Queda formado ahora el llamado complejo de pre-
iniciación.

INICIACIÓN:
 Una vez que se separan las hebras, uno de los hexámeros Mcm2-7 se enrolla alrededor
de una de las hebras y el otro en la hebra complementaria, de acuerdo con su polaridad
de traslación, esto es 3´→5´, y comienzan a extender el segmento de hebra simple en los

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dos sentidos, a partir del origen. Las hebras simples se van cubriendo por la proteína
replicativa A (RPA) que impide que las hebras se vuelvan a unir
 Es bueno recordar que las ADN polimerasas sintetizan el ADN en la dirección 5´→3´ y
para ello utilizan como molde la cadena que tiene sentido 3´→5´.
 Al separarse las dos hebras, se forma una estructura similar a un ojal.
 Al sitio donde permanecen las dos hebras unidas y que existe uno en cada extremo del
ojal, se le denomina horquilla de replicación.
 En la medida que se produce el movimiento de cada horquilla, una hebra se desenrolla en
sentido 3´→5´ y la otra en sentido 5´→3´.
 La hebra simple que se desenrolla en sentido 3´→5´ representa el molde adecuado para
las polimerasas que pueden sintetizar la hebra complementaria de forma continua y se le
denomina hebra conductora. La otra hebra se desenrolla en sentido contrario al
movimiento de la polimerasa y se le denomina hebra conducida
 A continuación sucede la incorporación a las dos hebras simples de la ADN polimerasa α
(pol-α).
 En la iniciación del proceso, la ADN polimerasa épsilon no pueden comenzar por si sola la
replicación = no presenta actividad iniciadora, sino que solo puede alargar un segmento
polinucleotídico ya existente. Ese segmento es formado por otra polimerasa que es la alfa
, que sí tiene actividad iniciadora, la cual sintetiza un fragmento de ARN de unos 10
nucleótidos seguido de un fragmento de ADN de hasta 20 nucleótidos. Este polinucleótido
se conoce como iniciador.
 Al extremo 3´ del polinuceótido iniciador formado por la pol alfa se asocia el factor
replicativo C que carga al antígeno nuclear de células proliferantes (PCNA), al cual
entonces se asocia la pol épsilon y queda todo listo para alargar las cadenas durante la
siguiente etapa = elongación.

ELONGACIÓN:
 Al terminar la iniciación, cada una de las hebras del ADN tiene un sector duplohelicoidal,
formado por la hebra molde (del ADN original) y los 20 nucleótidos del iniciador.
 En la iniciación del proceso, a la zona abierta se une la polimerasa delta o la epsilon. Estas
polimerasas no pueden comenzar el proceso = no presentan actividad iniciadora, sino que
sólo pueden alargar un segmento polinucleotídico ya existente. Ese segmento es formado
por la polimerasa alfa, que sí tiene actividad iniciadora, la cual sintetiza un fragmento de
ARN de unos 10 nucleótidos seguido de un fragmento de ADN de hasta 200 nucleótidos.
 Al extremo 3´ del polinuceótido iniciador formado por la pol alfa se asocia el factor
replicativo C que carga al antígeno nuclear de células proliferantes (PCNA), al cual
entonces se asocia la pol delta-epsilon que alarga el polímero, durante la etapa de
elongación o alargamiento de la cadena.
 Como las polimerasas sólo alargan la cadena en el sentido 5´-3´, una hebra se sintetiza
de forma continua = hebra conductora, mientras que la otra se tiene que sintetizar de forma
discontinua o por fragmentos =hebra conducida. Para la formación de la hebra conducida
es necesario la actividad repetida de la pol alfa iniciadora.
 Los segmentos iniciadores son eliminados por la acción combinada de una helicasa y una
endonucleasa. El espacio es rellenado por la pol delta o epsilon y las brechas son selladas
por la ADN ligasa.

TERMINACIÓN:
 Se funden las horquillas de replicación

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 Cada cromosoma tiene de 50-350 millones de pb, pero los múltiples orígenes de
replicación permiten que el proceso ocurra en pocas horas.
 Cuando las horquillas de replicación que avanzan en sentidos opuestos se encuentran,
termina el proceso.

POS-TERMINACIÓN:

Fidelidad del proceso

• Elevada especificidad de las polimerasas.
• Elevada especificidad del apareamiento de bases.
• Utilización de un ARN iniciador.
• Existencia de un mecanismo de corrección de errores

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Simultáneamente con la replicación:

• Se incrementa la síntesis y asociación al ADN de las histonas y de las otras proteínas que
forman parte de la cromatina.
• Se adicionan las proteínas cohesinas, que forman un anillo alrededor de las 2 moléculas
de ADN recién formadas manteniéndolas unidas hasta que se produzca la mitosis.

CONCLUSIONES:

La información contenida en el ADN

sólo es útil cuando sirve para dirigir la
síntesis de moléculas que realicen
funciones específicas en la célula o el
organismo.

La transcripción es uno de los

procesos implicados en esta
expresión de la información genética.

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DUPLICACIÓN DEL ADN

1- ¿En qué consiste la duplicación del ADN?

2- ¿Cuál es su localización celular?

3- ¿En cuál etapa del ciclo celular se realiza?

4- ¿Cuáles son sus características generales y en qué consiste cada una?

5- ¿Cómo, ¿cuándo y dónde se forma el complejo pre-replicativo?

6- ¿Por qué la vía ubiquitina proteasoma está implicada en la formación del complejo pre-
replicativo?

7- ¿Cuándo y cómo se activa el complejo pre-replicativo?

8-Describa la fase de iniciación de la replicación.

9- ¿Cómo ocurre la elongación en la hebra conductora?

10- ¿Cómo ocurre la elongación en la hebra conducida?

11- ¿Cómo se logra la integridad de la hebra conducida?

12-Describa la fase de terminación de la duplicación.

13- ¿Qué proceso ocurre simultáneamente con la duplicación?

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14- ¿Cuál es el evento que ocurre una vez terminada la replicación?

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