Clase 9 Contracción Muscular y Técnicas Biología Celular 2024

Clases:
Contracción Muscular.
Técnicas usadas en Biología
Celular.
Dra. Ana María Meneses

Curso: Biología Celular y Genética
Año 2024
Contracción Muscular - Célula Muscular o Fibra Muscular.
Miosina
Actina
Sarcolema = membrana plasmática.

Retículo sarcoplásmico = retículo
endoplasmático especializado, almacena Ca2+
Túbulos T = invaginaciones del sarcolema
hacia el interior celular que hacen llegar el
potencial de acción a toda la fibra muscular.
• El impulso nervioso llega a la unión neuromuscular, ésta libera un
neurotransmisor llamado Acetilcolina. Se transmite un potencial de
acción a través del sarcolema que llega al R.S.
(Bandas Oscuras)
(Bandas Claras)
•I (se une a actina)
actina
troponina •C (se une a calcio)
•T (se une a tropomiosina) tropomiosina
Filamentos delgados
Contracción Muscular.
Contracción muscular – mecanismo:

Video 1: https://vimeo.com/385383368
Video 2: https://www.youtube.com/watch?v=C4fmTtO1bbo
Modelo Esquemático del Modelo Contráctil de la Actina – Miosina.
Figura extraída de Karp, Biología Celular y Molecular.

Técnicas usadas en Biología Celular.
Muestras:
Se obtienen, por ejemplo, desde:
1.- Pacientes: sangre, médula ósea.
2.- Cultivos celulares.
¿Qué se analiza?: DNA, cDNA (ADNc),

proteínas, mRNA (ARNm), organelos,
hormonas, entre otros.
Cultivos Celulares.
Clasificación:
Cultivo Celular Primario: Células

suspendidas o que se adhieren a un
sustrato (extraídas directamente desde un tejido u órgano)
Cultivo Celular Secundario: subcultivo.
Línea Celular: finita o continua.

Equipos usados en Cultivo Celular.
Comúnmente:
5% CO2
95% O2
37°C
Microscopio invertido
Microscopio Invertido.
Figura. Microscopio invertido con el revólver y objetivos por debajo de la platina. La fuente de luz se
ubica en la parte superior. Tomado de Instrumental Pasteur. Microscopio Olympus.
Cámaras o Campanas de Flujo Laminar.
HEPA: High Efficiency Particulate Air

Materiales para Cultivo Celular.
Medios de cultivo contienen:

Preparación de Cultivos Primarios.
Si uno o varios tipos de células

de un cultivo primario se re-
siembran (sub-cultivo), el
cultivo obtenido se denomina
cultivo secundario.
Aunque potencialmente se puede obtener un cultivo primario a partir de cualquier tipo de

tejido, normalmente los tejidos embrionarios dan los mejores resultados, debido a que su
grado de diferenciación es menor y su capacidad de división mayor.
Línea Celular:
-Deriva de un cultivo primario (primer sub-cultivo).
-Una línea celular humana muy comúnmente usada es la línea

celular HeLa.
-Deriva de un cáncer cervical (Henrietta Lacks, 1920-1951).

Técnicas donde se usa cultivo celular: Inmunotécnicas.
Inmunofluorescencia
PCR: técnica para
amplificar una
secuencia específica
de DNA.
Las moléculas de DNA o RNA se tiñen con colorantes (bromuro de etidio o Gel Red).
Finalmente se visualizan usando luz UV.
Técnica de Estudio para Biomoléculas.
Electroforesis: técnica para análisis de DNA,

RNA y proteínas.
(-)
Proteínas más
grandes avanzan
menos en el gel.
(+)
Desde la muestra se extrae ARN total.
Muestra de
RNA
Se realiza una reacción de transcripción reversa.

1- Transcripción reversa
PCR en tiempo real.
DNA c copiado
2- Reacción de PCR en
tiempo real
SYBR Green
Sonda
marcada
Tinción de Coomassie: el azul de Coomassie se une
específicamente a las proteínas.
Western blot:
Una proteína específica puede ser
identificada y visualizada en un 'Western
blot' empleando técnicas de
inmunodetección. Estas técnicas emplean la
capacidad de reconocimiento de los
anticuerpos a sus antígenos.
Block the
membrane
En este método se emplea un anticuerpo primario para localizar la proteína de

interés.
Un segundo anticuerpo, marcado con un enzima, y contra la especie en la que

se ha producido el primero, se emplea para localizar los complejos antígeno-
anticuerpo.
Este anticuerpo secundario se marca con el fin de producir una señal

detectable (por ejemplo una señal sobre una película radiográfica o una
mancha de color en el filtro).
Western blot:
Peroxidasa
Anticuerpo II
Anticuerpo I
Proteína

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Sarcolema = membrana plasmática.

Contracción muscular – mecanismo:

Figura extraída de Karp, Biología Celular y Molecular.

Se obtienen, por ejemplo, desde:

1.- Pacientes: sangre, médula ósea.

2.- Cultivos celulares.

¿Qué se analiza?: DNA, cDNA (ADNc),

Cultivo Celular Primario: Células

Cultivo Celular Secundario: subcultivo.

Línea Celular: finita o continua.

HEPA: High Efficiency Particulate Air

Medios de cultivo contienen:

Si uno o varios tipos de células

Aunque potencialmente se puede obtener un cultivo primario a partir de cualquier tipo de

-Deriva de un cultivo primario (primer sub-cultivo).

-Una línea celular humana muy comúnmente usada es la línea

-Deriva de un cáncer cervical (Henrietta Lacks, 1920-1951).

Electroforesis: técnica para análisis de DNA,

Se realiza una reacción de transcripción reversa.

PCR en tiempo real.

En este método se emplea un anticuerpo primario para localizar la proteína de

Un segundo anticuerpo, marcado con un enzima, y contra la especie en la que

Este anticuerpo secundario se marca con el fin de producir una señal

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