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BIOLOGÍA.

4to GRADO - COLEGIO HUMBOLT

INICIACIÓN:

La replicación comienza en una secuencia especifica del ADN "Cromosoma bacteriano"


conocida como Ori C (fig. 2-2), secuencia de casi 245pb, de estas solo 5 a 10pb (esenciales
para Iniciar la replicación) son reconocidos por 6 subunidades llamadas proteinas "n" del
complejo de 30 coplas de una proteina iniciadora especifica, la cual forma un complejo con
el ADN enrollado sobre su periferia, acontecimiento que Induce a la separación de las
cadenas de ADN en un sitio adyacente rico en pares de bases de A=T (fig.2). La separación
de las cadenas va seguido por el Ingreso inicialmente de una proteína topoisomerasa II o
girasa y luego de unas proteinas helicasas (Rep y DnaB) en cada cadena con ayuda de la
proteina DnaA, seguido de la fijación de proteinas estabilizadoras de cadena sencilla (SSB
& single strand binding) y finalmente el reclutamiento de las otras proteinas necesarias para
establecer una bifurcación de replicación activa.

1. Reconocimiento del Ori C, apertura de la burbuja y en ella la formación de las horquillas


de replicación, ingreso de la girasa, fijación de proteínas SSB y primosoma (complejo de
enzimas primasa y helicasa) e inicio de la síntesis de ARN primer o ADN cebador.

Ori C.- Sitio de inicio de la replicación constituido por 245bp, solo algunos son esenciales
para iniciar la replicación.

Proteínas n.- Reconocen secuencias específicas de 5 a 10 bases; donde las primasas.


empiezan a sinterizar el ARN (ARN primer o "ADN cebador") requerido por la ADN
polimerasa III
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Proteinas SSB.- Complejo de proteinas que brindan estabilidad a las cadenas sencillas del
ADN evitando su enrollamiento.

2. Formación de la burbuja y horquillas de replicación.

Desenrrollamiento del ADN y apertura de la doble hélice con separación de puentes de


Hidrógeno por acción de ADN helicasas; son de 2 tipos:

Proteina Rep - Dirige la sintesis de la cadena lider en el templado 3'-5'.

Proteina DnaB Consiste en seis subunidades polipeptidicas estructurada formando un anillo


que encierra a una sola cadena de ADN. Dirige la sintesis de la cadena rezagada en la
cadena molde 53 para producir los iniciadores conjuntamente con la primasa, desenrollando
la bihebra del ADN en una reacción que utiliza energla liberada a partir de la hidrólisis del
ATP para separar los puentes de hidrógeno que mantienen unidas a las dos cadenas.

3. Mantenimiento de la separación de las hebras de ADN por proteinas desestabilizadoras


de la doble hélice o proteinas de unión a cadena sencilla o
proteinas SSB (single-strand DNA binding) que mantienen rigidas y extendidas a las
cadenas de la molécula de ADN, forma ideal para la replicación, así también protegen al
ADN, de cadena sencilla de la acción de las enzimas nucleasas de cadena sencilla.

B. ELONGACIÓN:

La polimerización en dirección 35' no puede realizarse por ausencia de actividad de


polimerización en esa dirección. Ambas cadenas recién sintetizadas se ensamblan en la
dirección 5' 3. Durante la reacción de polimerización, el grupo OH del extremo 3' lleva a
cabo un ataque nucleofilico en el fosfato a 5' del dNTP (desoxirribonucleótido trifosfatado)
que ingresa (animación). En consecuencia una de las cadenas crece en dirección de la
horquilla de replicación donde las cadenas de ADN parentales (templado-molde) se
separan, mientras la otra cadena crece y se aleja de la horquilla. Por lo tanto, las dos
cadenas hijas se sintetizan por procesos muy diferentes. La cadena que se sintetiza de
modo continuo se conoce como cadena adelantada o lider, debido a que lo hace conforme
avanza la horquilla de replicación y la cadena que se sintetiza de forma discontinua en
pequeños fragmentos de ADN de unos 1,000 a 2,000 nucleótidos de longitud (mas tarde
conocidos como fragmentos de Okazaki), se llama cadena retrasada, dado que el inicio de
cada fragmento debe esperar a que las cadenas progenitoras se separen y expongan un
fragmento (fig. 2-4).

4. Biosintesis de las cadenas nacientes o primers, llevada a cabo por complejos proteicos y
enzimáticos denominados replisomas.

5. Se Inicia con la sintesis de ARN primer (ADN cebador) por un tipo de ARN polimerasa-
Primasa, requerido por la ADN polimerasa III, ya que contiene el grupo 3'OH libre para
añadir el nucleótido entrante.

6. Sintesis de una nueva cadena polinucleotídica por la ADN polimerasa III. Esta enzima
cataliza la formación de un enlace fosfoester entre el grupo 3' hidroxilo terminal de una
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cadena de ADN (o ARN) preexistente y un nucleótido cuya base nitrogenada sea


complementaria del nucleótido que se enfrenta a él en la cadena parental y adiciona
sucesivamente los desoxirribonucleótidos resultado de la hidrólisis de los
desoxirribonucleótidos trifosfatados por el ataque nucleofilico del extremo OH 3' del
nucleótido antecesor (animación).

7. A medida que avanza la apertura de la doble hélice, en la cadena molde (5' 3'), por
delante del punto de origen de replicación, se realiza la replicación de forma discontinua, en
fragmentos de -800-1000 nucleótidos de largo llamados fragmentos de Okazaki.

8. El fragmento de ARN-primer es hidrolizado posteriormente a partir del extremo 5 por la


ADN polimerasa I que tiene actividad exonucleasa.

En la cadena retardada, una vez sintetizados los fragmentos de Okazaki las regiones de
ARN primers, también son hidrolizadas por la ADN polimerasa I a partir del extremo (5'3'),
luego rellena los espacios con los dNTPs adecuados.

9. Posteriormente, los distintos fragmentos son unidos entre si por la enzima ligasa.

10. Otras enzimas como Topolsomerasas I y II.

Las ADN topolsomerasas, ayudan en el desenrrollamiento de la doble hélice.


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La apertura de la doble hélice supone su desenrrollamiento.

El desenrrollamiento de una doble hélice circular y por tanto cerrada provoca un


superenrollamiento positivo por delante de la horquilla de replicación que llegaria a impedir
el avance de esta, a no ser por el giro de todo el cromosoma en sentido contrario. Ello se
produce gracias a la acción de topolsomerasas, que provocan la ruptura de una de las
hebras de ADN, lo que conlleva la liberación de la tensión existente por el giro de toda la
molécula, restableciéndose después la continuldad de la cadena y la topoisomerasa II
también conocida como girasa (utiliza energla liberada por la hidrólisis del ATP), que actúa
de forma similar, pero cortando las dos cadenas a la vez, que vuelven a unirse al liberarse
la tensión.

C. TERMINACIÓN:

Cuando las dos bifurcaciones (horquillas de replicación) se encuentran en una región del
cromosoma llamada ter, donde la replicación concluye, las enzimas replicativas se
desconectan de los sitios donde se asocian al ADN y las dos moléculas de ADN
"Cromosomas hijos" se separan, mediados por la topoisomerasa II o girasa, que lleva a la
formación del septum y a la bipartición de dos células hijas.

ADN POLIMERASAS EN PROCARIOTAS

Cumplen la misma actividad catalítica básica, que consiste en añadir desoxirribonucleótidos


sobre el extremo en crecimiento 3'0H; sin embargo, las polimerasas de ADN difieren en sus
diversas funciones dentro de la célula. Tienen dos requerimientos: Una cadena de ADN
templado y una cadena iniciadora que provee el OH 3' terminal, en la cual los nucleótidos
puedan agregarse.

ADN Polimerasa | (300-400 moléculas): Consiste en una sola subunidad proteica, presenta
tres dominios, cada uno con actividades específicas diferentes (tres enzimas en una). Las
funciones que desempeña son: Escinde los Iniciadores de ARN (función exonucleasa 5' 3'),
repara ADN dañado durante la replicación (función exonucleasa 3' 5') y rellena las brechas
(Polimerización).

ADN Polimerasa III (10 moléculas): Principal enzima replicativa, sintetiza las cadenas de
ADN

durante la replicación y es parte constituyente de una "maquinaria de replicación llamada


holoenzima de ADN polimerasa III o replisoma (fig. 2-6).

La estructura del complejo holoenzima de ADN polimerasa III está constituido por los
siguientes componentes:

Core Tau (ζ).- Compuesto por cinco subunidades, dos ζ, dos d y una a. Estabiliza el
complejo holoenzima, mantiene unidas a las polimerasas en el complejo y se unen a la
helicasa (no consideradas parte del replisoma).

Pinza Gamma (y).- Encargada de cerrar cada una de las pinzas deslizantes en el ADN.
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Pinza Beta (B).- Componente no catalítico que mantiene a la ADN polimerasa III relacionada
con el molde de ADN.

Cebador de la pinza B.- Participa en el ensamblaje de la pinza ẞ alrededor del ADN,


mediante una subunidad denominada llave, encargada de abrir la pinza B.

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