LABORATORIO N°1

MICROSCOPIA
FUNDAMENTO TEÓRICO

El microscopio es un instrumento que permite observar objetos no perceptibles a simple vista

mediante un sistema óptico compuesto por lentes de cristal que al ser atravesadas por la
imagen del objeto la amplifican. Existen dos tipos básicos de microscopio, el simple y el
compuesto. Podríamos definir el simple como cualquier lente convergente utilizada de forma
tal que de una imagen virtual directa y mayor que el objeto. Por ejemplo, una lupa.

El microscopio compuesto es aquel que está constituido por la combinación de dos sistemas de
lentes convergentes; uno próximo al ojo del observador (ocular), y otro próximo al objeto
denominado objetivo

El microscopio fue inventado por el holandés Zaccharias Janssen en el siglo XVI. Años más
tarde, en 1655, el inglés Robert Hooke creó el primer microscopio compuesto, que utilizaba dos
sistemas de lentes: oculares y objetivos. Por su parte, el holandés Antoni Van Leeuwenhoek, un
comerciante y científico neerlandés, fabricó sus propios microscopios monoculares de buen
poder de resolución, que lo llevaron al descubrimiento de los glóbulos rojos en 1673, como
también al descubrimiento de algunas bacterias y espermatozoides humanos. Por lo anterior,
Leeuwenhoek es reconocido como la primera persona en interesarse en observar la naturaleza
a través del microscopio. Durante los siglos XVIII y XIX se realizaron avances para su
mejoramiento, principalmente en Inglaterra. Durante la segunda mitad del siglo XIX, las
empresas alemanas Leitz y Zeiss popularizaron el uso del microscopio de luz.

En la actualidad, el campo de la microscopia ha avanzado enormemente y se han desarrollado

diferentes tipos de microscopios, entre los cuales podemos encontrar el microscopio simple, el
compuesto (invertido, de fluorescencia, de luz ultra violeta, luz polarizada, de contraste de
bases de campo oscuro), el electrónico (transmisión y de barrido), entre otros. El microscopio
es un equipo que puede ser monocular o binocular y combina dos sistemas de lentes (el lente
ocular y los objetivos) que le permiten aumentar la imagen de un objeto. El lente más cercano
a la muestra, el objetivo, posee una distancia focal muy corta, por lo cual la luz lo atraviesa y la
imagen formada se invierte en cada ocular; la imagen de cada ocular finalmente se integra en
el cerebro convirtiéndose en una imagen bidimensional. Otra característica del microscopio es
su poder de resolución, cuanto mayor sea el poder de resolución de un equipo, mayor será la
definición de la muestra. Esta resolución depende de la longitud de onda que se utiliza y la
apertura numérica.

El sistema de iluminación cumple un papel importante, la luz se debe enfocar sobre la muestra
y para ello se utiliza otro sistema de lentes llamado condensador, el cual focaliza la luz, y con
ayuda del diafragma que posee controla el diámetro de luz que será dirigido hacia la muestra.
Este equipo se utiliza principalmente para examinar muestras en montajes frescos o con
tinciones.

OBJETIVO:

Reconocer la importancia del microscopio en el desarrollo de las ciencias biológicas, a partir de

la observación de diferentes elementos trabajando correctamente este instrumento óptico.
BJETIVOS ESPECÍFICOS

 Aprender y reconocer las partes que constituyen un microscopio óptico, así como
también usarlo correctamente y además aprender a preparar muestras para
observación.
 Adquirir destreza en la correcta manipulación y utilización del microscopio óptico.
 Identificar cada una de las partes del microscopio, su funcionamiento y cuidado para
mantener el instrumento óptico en buen estado.
 Diferenciar y clasificar los componentes ópticos, mecánicos y del sistema de
iluminación del microscopio.
 Comprender los diferentes poderes de aumento del microscopio, mediante la
observación de muestras con diferentes enfoques: 4X, 10X, 40X, 100X.

MATERIALES:

1. Laminas
2. Laminillas
3. Goteros
4. Papel lente
5. Lana o algodón
6. Una hoja de periódico
7. Tijeras
8. Estiletes
9. Microscopio optico
 CUESTIONARIO 1°

1. ¿Qué características tiene las imágenes que produce el objetivo y el ocular?

El objetivo recoge la luz que atravesó el

objeto examinado y proyecta una imagen
real, invertida y aumentada que se forma
dentro del tubo y que es recogida por el
ocular que es la segunda lente, la cual forma
una imagen virtual, invertida y aumentada del
objeto examinado.

2. Describa la apariencia de las hebras de lana a bajo aumento

Las hebras de las lanas a bajo aumento se observan

superpuestas en su superficie, además las hebras de lana que
se observan de color verde, pero de mayor intensidad, se
observan con mayor nitidez.

3. Describa la imagen y posición de la letra

Se puede analizar que la letra “e”, se ve invertida debido a

que el microscopio compuesto se encuentra conformado de
2 lentes que convergen la luz que lo atraviesa, generando
que el objetivo forme una imagen real, aumentada e
invertida. Esto también se debe a que el lente objetivo tiene
una corta longitud focal. Además, puede decirse que el
aumento de 40X y 10X permiten ver en detalle la
conformación de la tinta plasmada en el papel, con lo cual
se comprobó que esta no es uniforme, viéndose así líneas desordenadas

4. Mueva la lámina a la izquierda, ¿En qué sentido parece moverse la letra?

Al movilizar la lámina a la izquierda la letra parece moverse en sentido contrario, es

decir hacia la derecha y esto se debe a que el lente objetivo invierte la imagen.

5. Cambie al objetivo de mayor aumento. Describa las diferencias en el campo visual.

El campo de visión en el microscopio, se reduce en cada aumento de objetivo, por lo

que es necesario el uso del micrómetro para un ajuste fino de la muestra observada.
En la práctica tuvimos que observar la letra “e”, el primer objetivo era con 4X, por lo
que la letra se veía completa, invertida y aumentada. Posteriormente se observó con el
objetivo 10X donde la letra “e” ya no se visualiza completa.
6. ¿Qué importancia tiene el microscopio en el campo de la investigación?

La importancia del microscopio suele ser el hecho de descubrir el mundo microscópico

(bacterias, virus, protozoarios) por lo que ayudó a rechazar teorías mágicas o religiosas
sobre el funcionamiento y origen de las enfermedades, pudiendo desarrollar curas
efectivas que salvarían millones de vidas.

7. ¿Qué se podría emplear para calibrar el micrómetro ocular, cuando no se dispone de

un portaobjetos micrómetro?

Se podría usar el ocular micrométrico, que son unos

discos de vidrio que se adhiere a un ocular de un
microscopio. Un micrómetro ocular tiene una regla que
permite al usuario medir el tamaño de los objetos
magnificados. La distancia entre las marcas de la regla
depende del grado de ampliación. La regla sobre un
micrómetro ocular típico tiene entre 50 y 100 marcas
individuales, es de 2 mm de largo y tiene una distancia
de 0,01 mm entre las marcas.

8. ¿Por qué razón se usa el aceite de inmersión con el objetivo de 100 aumentos?

Por el alto índice reflectivo. Sin embargo, una vez que usa la lente del objetivo de 100x,
la refracción de la luz cuando usa una lente seca es notable. Al colocar una sustancia
como aceite de inmersión con un índice de refracción igual al del portaobjetos de
vidrio en el espacio lleno de aire, se dirige más luz a través del objetivo y se observa
una imagen más clara. La lente 100x se sumerge en una gota de aceite colocada en la
diapositiva en para eliminar los espacios de aire y la pérdida de luz debido a la
refracción (curvatura de la luz) cuando la luz pasa del vidrio (portaobjetos) → aire →
vidrio (lente del objetivo). El aceite de inmersión tiene el mismo índice de refracción
del vidrio.
 LABORATORIO N°2
COMPONENTES QUIMICOS DE LA MATERIA VIVA: CARBOHIDRATOS
Los glúcidos, generalmente conocidos como hidratos de carbono o carbohidratos son
biomoléculas constituidas principalmente de carbono, hidrogeno y oxígeno. Su fórmula es
Cn(H2O)n.

Unas de las principales funciones que cumplen los hidratos de carbono en los seres vivos es
energética, por el ahorro de proteínas y la regulación del metabolismo

A los carbohidratos se los clasifica de acuerdo al numero de monómeros en monosacáridos

pueden ser de tres tipos: triosas como el caso de glicerol; pentosas como la ribosa y la
desoxirribosa; hexosas como la glucosa, fructuosa y la galactosa.

Los disacáridos se forman por la unión de dos monosacáridos mediante enlaces glucosídicos ya
sean alfa o beta; en este caso tenemos la maltosa (glucosa + glucosa), lactosa (glucosa +
galactosa) y la sacarosa (glucosa + fructuosa).

Reactivo Benedict: La solución de Benedict se utiliza para detectar azúcares reductores ,

normalmente monosacáridos o disacáridos. Proporcionará un resultado positivo para los
azúcares reductores como la glucosa, la fructosa, la lactosa, la maltosa y la
galactosa. Proporcionará un resultado negativo para los azúcares no reductores, como la
sacarosa o el almidón.

OBJETIVO GENERAL:

Determinar experimentalmente el comportamiento químico de los carbohidratos más

conocidos en los sistemas biológicos, con la ayuda de reacciones cualitativas de coloración.

OBJETIVO ESPECÍFICOS:

 Reconocer las propiedades de los carbohidratos.

 Comprender el significado de azúcar reductor usando las técnicas de Fehling.
 Identificar los polisacáridos
 Preparar soluciones de glucosa, sacarosa, fructuosa, almidón y celulosa

MATERIALES Y MÉTODOS

 Solución al 1% de glucosa, fructosa, maltosa, sacarosa y almidón

 Materiales de estudio. Muestras de: Manzana, cebolla, yuca y papa.
 Reactivos de Benedict, lugol, agua destilada.
 Tubos de ensayo, goteros, gradillas, pipetas de 1, 5 y 10 ml, marcador de proyección
permanente, mecheros de alcohol o cocinillas.
 Vasos de precipitación de 50, 100, 250 y 600 ml
 Mortero, espátula

DESARROLLO EXPERIMENTAL
 IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS

1. DETERMINACIÓN DE AZUCARES REDUCTORES:

FUNDAMENTO

Cuando un azúcar reductor se somete a la acción del calor en el medio alcalino de Benedict
sufre fenómenos de enolización y al fragmentarse su molécula se forman cuerpos fuertemente
reductores para el cobre transformándolo en ión cuproso (Cu+), el que a su vez reacciona con
los iones OH- del medio para dar óxido cuproso de color ladrillo (Cu2O).

En resumen, cuando un azúcar reductor se somete a la acción del calor en el medio alcalino de
Benedict: el ion cúprico procedente del CuSO4 se encuentra en forma de hidróxido cúprico
Cu(OH)2 (de color azul) al calentar y en presencia de un compuesto reductor se forma óxido
cuproso (de color anaranjado- ladrillo).

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

1. En tubos de ensayo separados se colocó los carbohidratos comerciales con la cantidad

exacta de cada solución, glucosa 1ml, fructuosa 1ml y almidón 1ml.

2. Se procedió a calentar el agua a 420°.

3. Se colocó 1ml (20 gotas) de reactivo benedict a cada uno de los tubos de ensayo que
contienen las soluciones de carbohidratos, procediendo a agitar muy bien.

4. Finalmente se introdujo los tubos de ensayo en un baño de agua hirviendo durante 5

minutos.

RESULTADOS:

Primero se realizó la técnica de azúcar reductor, en el cual a la glucosa se le colocó reactivo de

benedict, tornándose de color celeste y luego de los 5 minutos a baño maría su color fue
cambiando a un color rojo ladrillo.

La fructuosa tenia un color celeste igualmente cuando se colocó el reactivo benedict y después
del baño maría tenía una pequeña coloración anaranjado ladrillo.

El almidón al igual que los demás se agregó reactivo benedict y se agitó tornándose de color
celeste, posteriormente se colocó en baño maría quedando con la misma tonalidad celeste.

TUBOS 1 2 3
Sol. Al 1% del
Glucosa 1ml Fructuosa 1ml Almidón 1ml
carbohidrato
Agua Destilada - - -
Reactivo de Benedict 1ml 1ml 1ml
Resultados Positivo Positivo Negativo

1.1. INVESTIGANDO LA PRESENCIA DE GLUCOSA EN LA PRESENCIA DE GLUCOSA EN LA

MATERIA VIVA.
Para esta investigación se utilizó las siguientes materias vivas:

1. Manzana
2. Uva
3. Yuca
4. Papa

Procedimiento:

1. En el procedimiento se dividió la manzana en dos mitades y luego se trituró una de

ellas en el mortero hasta obtener el zumo.
2. Luego de vierte sobre el mortero unas gotas de agua, se remueve con el agitador y se
procede a colocar en el tubo de ensayo 20 gotas.
3. Posteriormente se añade al tubo de ensayo 20 gotas (1ml) de reactivo benedict. Este
proceso se repite tanto para la muestra de uva, yuca y papa, lavando bien el mortero
antes de iniciar cada proceso.
4. Se procede a calentar la mezcla.

MATERIAL COLOR DE REACTIVO VARIACIÓN DE COLOR

Manzana Celeste rojo ladrillo
Uva Celeste Amarillo oscuro
Yuca Celeste Celeste
Papa celeste Celeste

PREGUNTAS PARA RESOLVER CON RESPECTO A LA INVESTIGACION EN LA MATERIA VIVA

¿QUÉ SUCEDE?:

RESULTADOS: En el caso de las frutas como la manzana y la uva que contienen una gran
cantidad de fructuosa y glucosa, siendo azúcares reductores, pasa de un color celeste a un
color rojo ladrillo, esto ocurre porque al reaccionar con el reactivo benedict en un medio
alcalino caliente detecta la presencia de glucosa que es un azúcar reductor y este color indica la
formación del oxido cuproso, por lo que se puede observar que da positivo en la prueba.

Tengamos en cuenta que el método de Benedict está basado en la acción reductora de los
azúcares sobre el Cu2+, de coloración azul, que lo transforma en Cu+ que da un color
anaranjado-ladrillo de óxido cuproso.
 2. IDENTIFICACION DE ALMIDON
FUNDAMENTO:

El almidón es un polisacárido vegetal formado por dos componentes: la amilosa y la

amilopectina. La primera se colorea de azul en presencia de yodo debido, no a una reacción
química sino a la adsorción de yodo en la superficie de la molécula de amilosa, lo cual sólo
ocurre en frío. Como reactivo se usa una solución denominada lugol que contiene yodo y
yoduro potásico. El almidón en solución acuosa la amilosa forma estructuras helicoidales
lineales y la amilopectina ramificada, gracias a la formación de puentes de H entre los grupos
OH de la glucosa y las moléculas de H2O.

El Lugol (yodo en yoduro de potasio) colorea las micelas de almidón de color azul negruzco. El
almidón es una mezcla (en diferentes proporciones según las especies) de los polisacáridos
amilosa (10-20%) y amilopectina (80-90%). El almidón es coloreado de azul en presencia de
Lugol, debido a una absorción o fijación del yodo sobre las unidades de glucosa de la amilosa, y
ayuda a mantener su estructura. Al calentar hasta ebullición, desaparece la estructura ternaria
(incoloro) y reaparece al enfriar (azul-violeta).

**En resumen, al mezclarse la solución de almidón más el Lugol cambia a un color azul, pero
cuando se calienta en agua el iodo se separa del almidón y cambia a un color transparente,
posteriormente cuando se enfría en agua regresa a su color azul.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Se colocó un tubo de ensayo con una muestra de almidón. Agregándose 1 ó 2 gotas de Lugol.
La formación de un color azul negruzco indicará la presencia del almidón. Si es un color rojo
indicará la presencia de glucógeno o eritodextrina.

2.1 INVESTIGANDO LA PRESENCIA DE ALMIDON EN LA MATERIA

Para esta investigación se utilizó las siguientes materias vivas:

- Manzana, Uva, Yuca, Papa

Procedimiento

1. Utilizando la otra mitad de las muestras, tritúralas en el mortero y luego prepara soluciones
de cada una de ellas, colocándolas en 4 tubos por separado. No olvides lavar bien el mortero
antes de emplearlo con otra muestra.

2. Ensaya la prueba del Lugol con cada una de las muestras en forma independiente, anotando
los resultados en el cuadro siguiente.

MATERIAL COLOR DE REACTIVO VARIACIÓN DE COLOR

Manzana Caramelo No hay reacción
Uva Caramelo No hay reacción
Yuca Caramelo Negro
Papa caramelo Negro
PREGUNTAS PARA RESOLVER CON RESPECTO A LA INVESTIGACION EN LA MATERIA VIVA

1. ¿Qué materiales orgánicos investigados, contenían azúcar? ¿Por qué?

Uva y manzana, se observó que contenían azúcar por que reaccionaban con el reactivo
benedict que es un se utiliza para detectar azúcares reductores, proporcionando un
resultado positivo.

2. ¿Cuáles de los materiales orgánicos, contenían almidón? ¿Por qué?

Los que contenían almidón son la yuca y papa, porque reaccionan al Lugol (compuesto
de yodo, yoduro potásico y agua destilada) ya que estas identifican polisacáridos.
Cuando se agrega sustancia que lleva almidón a una solución de yodo (lugol), estas se
tiñen de color violeta intenso. Esto es debido a que los átomos de yodo se introducen
en las espirales (amilosa), dándole esa coloración. El color desaparece, al calentar la
disolución, volviéndose transparente, porque los átomos de yodo se salen de la espiral.
Al enfriar la disolución retorna el color violeta. Asimismo, saber que no es una reacción
química sino una inclusión del iodo al polisacárido
Hay que tener en cuenta que el lugol NO cambia de color al calor.

DISCUSIÓN

En la práctica pudimos observar que al reaccionar el yodo con una muestra que contenía
almidón, este se tornó de color violeta mientras que al reaccionar con el agua solo tomo el
color característico del yodo, esto se debió a que el yodo o lugol solo identifica muestras que
contienen almidón es por eso que con el agua no produjo reacción alguna.

CONCLUSIONES

- La característica que presenta la reacción de yodo o lugol es que sirve para determinar
almidón, al reaccionar el almidón con el lugol forma un color violeta debido a que el
almidón está constituido por amilosa que al reaccionar con el yodo da un color azul y
amilopectina da un color rojo es por eso que al combinarse dan un color violeta, y es
una reacción de coloración.
- En el caso de la Investigación de polisacáridos (Almidón), la coloración fue producida
por el Lugol y esto se debió a que el yodo se introduce entre las espiras de la molécula
de almidón. La prueba del yodo es una reacción química usada para determinar la
presencia de almidón u otros polisacáridos. Esta reacción es el resultado de la
formación de cadenas de poliyoduro a partir de la reacción del almidón con el yodo,
mientras que el agua con el yodo (lugol), solo toma la coloración del yodo que es
amarillento. ya que no reacciona.
- Cambia de color porque el almidón estructuralmente es amilosa y amilopectina, la
primera al reaccionar con I2 va a dar un color azul, mientras que la amilopectina al
reaccionar con el I2 va dar un color rojo, por lo tanto, la mezcla de los dos nos va a dar
la tonalidad violeta.
 CUESTIONARIO 2°

1. ¿Por qué la sacarosa no es un azúcar reductor? ¿Qué ocurre si la disolución de

sacarosa es tratada previamente con ácido clorhídrico? Explica tu respuesta.

Porque el azúcar reductor tiene un grupo funcional aldehído con capacidad de

oxidarse y que pueda reducir, por ende, la sacarosa es una azúcar NO reductora ya
que no tiene ningún aldehído libre o un grupo ceto. Además, su carbono
anomérico no está libre y no se puede abrir fácilmente su estructura para
reaccionar con otras moléculas.
Si la disolución de sacarosa es tratada previamente con ácido clorhídrico se
hidroliza y se descompone en glucosa y fructuosa.
hidrólisis ácida (el HCl es el catalizador) y produce dos monosacáridos: glucosa y
fructosa: H2O + C12H22O11---> 2 C6H12O6 (1 mol de glucosa y 1 mol de fructosa)

2. ¿Cuál es la diferencia entre aldosas y cetosas?

La principal diferencia radica en que la Aldosa está formada por grupos de

aldehídos COH, mientras que la cetosa se forma con grupos aldehídos de C=O, de
tal forma que el carbono y el oxígeno se unen mediante un enlace doble formando
una configuración SP2.

3. ¿Cuál es la reacción que ocurre entre el almidón y el reactivo Lugol? Fundamente.

Cuando se agrega sustancia que lleva almidón a una solución de yodo (lugol), estas
se tiñen de color violeta intenso. Esto es debido a que los átomos de yodo se
introducen en las espirales (amilosa), dándole esa coloración. El color desaparece,
al calentar la disolución, volviéndose transparente, porque los átomos de yodo se
salen de la espiral. Al enfriar la disolución retorna el color violeta.

4. ¿Cuál es función que cumplen los carbohidratos en los seres vivos?

1. Casi todas las plantas y animales sintetizan carbohidratos y los emplean para
almacenar energía y suministrarla al organismo para que realice sus
actividades celulares, como la síntesis de sus propias moléculas.
 2. Los carbohidratos cumplen cinco funciones principales en el cuerpo humano,
que son la producción de energía, el almacenamiento de energía, la
construcción de macromoléculas, la conservación de proteínas y la ayuda al
metabolismo de los lípidos.

5. ¿Qué ocurrirá si el almidón es tratado previamente con HCl y luego se le agrega el

reactivo Lugol? Fundamente.

El almidón rompe enlaces (hidrolizacion) al reaccionar HCL, provocando

monosacáridos lo cual no reaccionan cuando se le agrega lugol.

6. ¿Qué entiende usted por hidrólisis? Ejemplos

Un enlace se rompe (lisis) al incorporar una molécula de agua.
Durante una reacción de hidrólisis, una molécula compuesta de varias subunidades
se divide en dos: una de las nuevas moléculas gana un átomo de hidrógeno,
mientras que la otra gana un grupo hidroxilo (-OH), los cuales son donados por el
agua. Esto es simplemente la reacción inversa de la síntesis por deshidratación,
que libera un monómero que se puede utilizar en la formación de un nuevo
polímero.

Por ejemplo, en la reacción de hidrólisis siguiente, una molécula de agua divide a la

maltosa para liberar dos monómeros de glucosa, una reacción inversa de la síntesis
por deshidratación ya señalada.

7. ¿Cuál es la importancia de los enlaces glucosídicos para la vida?

Son considerados como enlaces esenciales para la vida, básicamente se podría
decir que no podría existir la vida sin ellos pues incluso forman parte del ADN del
cuerpo humano. Además, los enlaces glucosídicos permiten la formación de
disacáridos (fructuosa, glucosa, etc.) y polisacáridos (almidón, glucógeno y quitina).
 LABORATORIO N°3
COMPONENTES DE LA MATERIA VIVA: PROTEÍNAS Y LÍPIDOS
FUNDAMENTO

Las proteínas y los lípidos son biomoléculas muy importantes para cualquier organismo vivo.
Sus funciones son muy variadas en el caso de las proteínas son especificadas por el tipo de
proteína, algunas son: función estructural, función enzimática, hormonal, homeostática,
defensiva, transporte, reserva. En el caso de los lípidos no son tan variados como las proteínas,
pero tienen funciones igual de importantes como fuente de reserva de agua debido a su
combustión aeróbica, productor de calor en el caso del tejido adiposo especializada, función
estructura como parte de la membrana celular, etc. En este informe veremos las reacciones
que hacen posible su identificación y diferenciación de otras moléculas, como la reacción
biuret del CUSO4 reaccionando en una solución alcalina con la proteína. También la reacción
Sudan III debido a que el sudan contiene un solvente orgánico lo cual reacciona con los lípidos.

En esta ocasión hacemos la identificación de proteínas mediante reactivos y reacciones, por lo

cual usaremos la reacción de biuret, la reacción con la ninhidrina y la acción de los agentes
físico y químicos.

La reacción o prueba de Biuret: es un método que detecta la presencia de compuestos de tres

o más enlaces peptídicos y, por tanto, sirve para todas las proteínas y péptidos cortos. El
reactivo de Biuret consiste en una solución acuosa de sulfato cúprico (CuSO4) en medio
alcalino (NaOH). Este reactivo da un ensayo positivo con los enlaces peptídicos entre
aminoácidos, cuando la solución queda de color violeta. Esto se debe a que el cobre tiene la
propiedad de formar iones complejos, especialmente entre los enlaces peptídicos.

Reacción con la ninhidrina: Se basa en la interacción de la ninhidrina con el grupo amino de los
aminoácidos, péptidos y proteínas. La ninhidrina reacciona con los grupos α-amino
liberando amonio, el cual se condensa con la nihindrina reducida y con otra
molécula denihindrina formando un compuesto coloreado que varía de azul a violeta púrpura.
La ninhidrina reacciona con el aminoácido formando una base de schiff, esta base se
descompone con la liberación de anhidrido carbónico y por hidrolisis da el 2 amino-1, 3- diceto
hidrindeno y un aldehído.

Y por último la acción de los agentes físicos y químicos, en estos mayormente se basan en la
acción del calor, solventes orgánicos, metales pesados y de ácidos inorgánicos.

En la identificación de lípidos usaremos la solubilidad y el reactivo de sudan III.

Reactivo de Sudan III: El colorante Sudán III es utilizado para identificar grasas, mediante la
tinción de triglicéridos, aunque también tiñe otros lípidos es soluble en grasas y reacciona
dando una coloración rojo rosada.

Solubilidad: Se basa en la propiedad de los lípidos de ser solubles en solventes orgánicos. La

sustancia que se disuelve se conoce como soluto, mientras que la sustancia donde se disuelve
el soluto recibe el nombre de solvente o disolvente. La concentración por otra parte, hace
referencia a la proporción existente entre la cantidad de soluto y la cantidad de disolvente en
una disolución.
OBJETIVOS:

Determinar experimentalmente el comportamiento químico de las proteínas y lípidos más

conocidos en los sistemas biológicos, con la ayuda de reacciones cualitativas de coloración.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS:

1. Identificar los lípidos y proteínas

2. Determinación de la solubilidad
3. Realizar reacciones de aminoácidos y lípidos
MATERIALES:

1. Reactivos: alcohol, cloroformo, éter etílico, agua destilada, Sudan III, reactivo de Biuret.
2. Muestras: Clara de huevo al 10%, aceite de diversas procedencias.
3. Tubos de ensayo, goteros.

DESARROLLO EXPERIMENTAL:

1. IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS
- PROCEDIMIENTO CON REACCIÓN DE BIURET:

En un tubo de ensayo coloque 2 mL de una solución de albúmina al 10%, agregue unas gotas
de NaOH al 20%, mezclar bien y añadir 1 ó 2 gotas de CuSO4 al 0,5%, agitar y observar la
aparición de la coloración.

- PROCEDIMIENTO CON REACCIÓN CON LA NINHIDRINA

En un tubo de ensayo colocar 1 ml de solución de albúmina al 10% y solución de aminoácidos

al 1% agregar gotas de ninhidrina al 0.1%, llevar al baño maría y observar la aparición de un
color púrpura.

- ACCIÓN DE LOS AGENTES FÍSICOS Y QUÍMICOS

1. Acción del calor

2. Acción de solventes orgánicos

3. Acción de metales pesados

4. Acción de ácidos inorgánicos

2. IDENTIFICACIÓN DE LÍPIDOS
- SOLUBILIDAD

TUBO 1 2 3 4
SOLVENTE Agua destilada Alcohol Cloroformo éter etílico
1ml 1ml 1ml 1ml
ACEITE 1 gota 1 gota 1 gota 1 gota
 RESULTADOS

- RECONOCIMIENTO DE LIPIDOS

TUBO 1 2
AGUA DESTILADA ----- 1 ml
ACEITE 20 GOTAS ----
REACTIVO SUDAN III 0,5
RESULTADOS
 CUESTIONARIO N°3
1. ¿Cuál es la importancia de las proteínas para los seres vivos?

Las proteínas cumplen un papel muy importante en el desarrollo y crecimiento,

además de realizar funciones químicas vitales para tu organismo. Algunas se encargan
de formar pelo y músculos; otras actúan como anticuerpos como la hemoglobina que
lleva el oxígeno. Por ende, realizan la mayor parte del trabajo en las células y son
necesarias para la estructura, función y regulación de los tejidos y órganos del cuerpo.,
hormonas, enzimas o transportan sustancias al interior de tu organismo.

2. ¿Qué otras pruebas de coloración se utilizan para reconocer proteínas? Fundamento

de ellas.

Existe también la prueba de Ninhidrina, a diferencia del reactivo de Biuret, esta es

usada principalmente para la detección de aminoácidos libres en una solución dando
una coloración violeta.

3. ¿Por qué se desnaturalizan las proteínas? Principales agentes de este proceso.

Las proteínas son muy sensibles a las condiciones de su entorno, como la temperatura,
el pH y los solventes orgánicos. Las variaciones drásticas de estos parámetros pueden
alterar irreversiblemente las estructuras superiores de las proteínas, con lo cual,
pierden irremediablemente su función, produciéndose la ruptura de puentes de
hidrógeno, fuerzas iónicas y otras interacciones que mantienen las estructuras
secundaria, terciaria o cuaternaria.

4. ¿Por qué se coagulan las proteínas con el calor?

La coagulación se refiere al cambio de la estructura de una proteína que puede

producirse de varias maneras, por acción enzimática, adición de ácido o adición de
ácido/calor. Cuando se calientan su pH isoeléctrico y las cadenas polipeptídicas se
rompen, se desenrollan y se adhieren entre sí y forman masas insolubles. La masa que
se forma no se disuelve de nuevo en el líquido.

5. ¿Qué es una emulsión y su importancia para la vida?

Una emulsión es un tipo de mezcla especial que se realiza mediante la combinación de

dos líquidos que normalmente no se mezclan.
En medicina, hablamos de emulsión en el caso de una sustancia grasas en suspensión
en un líquido fisiológico. Por ejemplo, la película hidrolipídica es una emulsión
compuesta por una mezcla de sudor, células muertas y sebo, sustancia grasa de la piel.
Está presente en toda la superficie del cuerpo y lo protege de las agresiones externas
microbianas o químicas y forma una barrera natural. También ayuda a regular la
hidratación de la piel. Las llamadas emulsiones lipídicas se utilizan en la alimentación
 parenteral, es decir, suministrando nutrientes por otras vías diferentes al tubo
digestivo, a menudo por vía intravenosa.

6. Si calentamos una solución de ovoalbúmina, y posteriormente le añadimos NaOH y

sulfato cúprico, ¿qué resultado obtendremos?, ¿a qué se debe este resultado? Explicar
sus respuestas.

Al calentar la solución de ovoalbúmina estaríamos provocando la desnaturalización de

su estructura, pero esta aún reaccionaría con el sulfato cúprico y el hidróxido de sodio
debido a que solo se rompieron los enlaces no covalentes de la proteína y no las
cadenas de aminoácidos de esta.

7. ¿Se pueden renaturalizar las proteínas? ¿Explique?

En algunos casos si es posible la renaturalización de estas, pero depende de diversos

factores como el grado de desnaturalización, la naturaleza de la proteína o las
condiciones en las que se hizo el proceso. Sin embargo, las proteínas no suelen
recuperar su función y estructura correctamente.

8. ¿Cuál es la importancia del colesterol en los seres que lo tienen?

El colesterol está presente en la membrana celular de ciertas células y les permite

tener un mayor grado de permeabilidad y fluidez. También es usada como base para la
formación de ciertas hormonas como la testosterona, estrógeno o progesterona.
Interviene en la fabricación de los ácidos biliares, imprescindibles para una correcta
digestión. Preserva la estructura de nuestro sistema nervioso, ya que las células
nerviosas lo utilizan para la trasmisión del impulso nervioso. Ayuda en la formación de
hormonas sexuales: estrógenos, progesterona y testosterona, necesarios para un buen
funcionamiento del organismo. El HDL (colesterol bueno) es un gran antioxidante,
ayudando a eliminar los radicales que provocan daño oxidativo. Es imprescindible para
el desarrollo del feto y los recién nacidos.

9. ¿Cuál es la importancia de los lípidos esenciales en el hombre?

Los lípidos esenciales son importantes en procesos biológicos y forman parte de la

membrana celular (fosfolípidos). Entre ellos tenemos: grasas aceites, fosfolípidos,
esteroides, colesterol, prostaglandinas, carotenos, vitaminas (A, D, K, E) y otros.
 LABORATORIO N°4
ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA CATALASA
FUNDAMENTO

Las enzimas son proteínas especializadas que se encuentran en todos los sistemas
vivientes, son mediadoras del metabolismo, encargadas de catalizar casi todas las
reacciones que ocurren en la célula. En ausencia de las enzimas, las reacciones
metabólicas serían demasiado lentas para suministrar los productos que el organismo
metabolizador requiere para la supervivencia. Hay factores que afectan la velocidad de
reacción de las enzimas como la temperatura, el pH, la concentración de sustrato, la
concentración de enzima y ciertas sustancias denominadas inhibidores.

En los organismos ocurren reacciones de oxidación-reducción que generan radicales libres

como el superóxido, el hidroxilo y especies reactivas del oxígeno (ERO) ejemplo el
peróxido de hidrógeno (H2O2). La producción descontrolada de estas sustancias puede
oxidar biomoléculas (carbohidratos, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos), por lo que la
célula cuenta con mecanismos eficientes de defensa antioxidante, entre los que se
incluyen ciertas enzimas: superóxido dismutasa, catalasa y peroxidasas, las cuales
neutralizan la actividad oxidante y limitan o evitan lesiones tisulares reversibles o
irreversibles. El peróxido de hidrógeno se forma por la dismutación del radical superóxido
y también en la reacción de algunas oxidasas. Hay varias enzimas capaces de degradar el
peróxido de hidrógeno: las catalasas, las peroxidasas y las peroxirredoxinas. La catalasa es
una hemoproteína homotetramérica con un grupo hemo en cada subunidad y forma parte
del sitio activo. Es una enzima antioxidante presente en la mayoría de los organismos
aerobios. En mamíferos esta enzima está presente en la sangre, médula ósea, membranas
mucosas y en altas concentraciones en hígado y riñón. Se encuentra principalmente en los
peroxisomas y en menor cantidad, en el citosol y la fracción microsómica de la célula.

La catalasa tiene actividad enzimática más alta en tejidos con gran contenido de
peroxisomas (riñones e hígado) y cataliza la conversión del peróxido de hidrógeno (H2O2)
en agua y oxígeno molecular, y libera energía en forma de calor. Tiene la capacidad de
utilizar una molécula de peróxido de hidrógeno (H2O2) como sustrato donador de
electrones y otra molécula de H2O2 como oxidante o aceptor de electrones. En las células
del sistema inmunitario, la catalasa protege a estas contra su propio estallido respiratorio.

En medicina la prueba de catalasa tiene importancia en el diagnóstico de infecciones

bacterianas. La mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas tienen catalasa
excepto el género Streptococcus y algunos otros. Los resultados de esta prueba
demuestran la presencia (catalasa positiva) o ausencia (catalasa negativa) de esta enzima
en cultivos bacterianos. La catalasa se obtiene fundamentalmente a partir de
microorganismos y se usa para extender la vida útil de zumos de cítricos, cerveza y vino ya
que, al degradar el agua oxigenada (un agente oxidante) en sustancias no reactivas (agua y
oxígeno) se inhiben las reacciones oxidativas que afectan las propiedades de los productos
alimenticios a comercializar.
 a) Describa la enzima catalasa. Consulte el pH, temperatura óptimos y KM de la catalasa.

b) Cuál es la función biológica de la catalasa y su importancia en el organismo.

c) Escriba la ecuación de la reacción de catálisis y el mecanismo de la reacción.

d) Como se identifica experimentalmente la producción de oxígeno en la reacción de

catálisis de la catalasa.

e) Cuál es la función de la hidroquinona en este experimento.

f) Cuáles son las ventajas y desventajas de los procesos oxidativos en la célula.

OBJETIVOS

• Comprobar la presencia de catalasa en tejidos animales y vegetales

• Determinar la actividad enzimática de la catalasa en función del tiempo
• Analizar algunos factores que inciden sobre la actividad enzimática
• Interpretar y correlacionar la importancia fisiológica de la catalas
Comprobar la presencia de catalasa en tejidos animales y vegetales
• Comprobar la presencia de catalasa en tejidos animales y vegetales
• Determinar la actividad enzimática de la catalasa en función del tiempo
• Analizar algunos factores que inciden sobre la actividad enzimática
• Interpretar y correlacionar la importancia fisiológica de la catalasa
- Comprobar la presencia de catalasa en tejidos animales y vegetales.
- Determinar la actividad enzimática de la catalasa en función del tiempo.
- Analizar algunos factores que inciden sobre la actividad enzimática.
- Interpretar y correlacionar la importancia fisiológica de la catalasa.

MATERIAL

- Una papa y un trozo de hígado FRESCO de pollo. Peróxido de hidrógeno 30 grados.

PROCEDIMIENTO

1. Picar la papa y el hígado y colocar cada muestra en 2 tubos de 15X150 mm.

2. A dos tubos colocar 20 gotas de peróxido de hidrógeno y observar.
3. Dos tubos con cada muestra diferente calentar sobre un mechero o en una plancha de
calentamiento con agua caliente. Luego agregar 10 gotas de peróxido de hidrógeno a
cada tubo, observar y anotar.
 CUESTIONARIO N°4

1. ¿Cuál es la definición de enzima, sustrato y producto?

- Enzima: Proteína de estructura tridimensional capaz de acelerar reacciones al

interactuar con un sustrato específico.
- Sustrato: Compuesto con el cual la enzima es capaz de reaccionar.
- Producto: Resultado de la interacción de la enzima y el sustrato.

2. ¿Cuál es el sustrato de la reacción y cuál es el producto de la reacción enzimática?

En la reacción de la catalasa (1.11.1.16) el sustrato de la reacción es el peróxido de

hidrógeno y los productos serían el agua y el O2.

3. ¿Cuáles son los factores que participan en la reacción enzimática?

Los factores que participan en las reacciones enzimáticas son:

- Temperatura.
- PH
- Concentración del sustrato
- Concentración de la enzima
- Inhibidores
- Regulación por alosterismo.

4. ¿Qué otros experimentos se podrían realizar para verificar la acción de la catalasa

sobre el agua oxigenada?

Se podrían hacer experimentos para evaluar la efectividad de la enzima alterando los

factores y ver los parámetros en los que su efectividad es la más óptima.

5. ¿Cuál es el mecanismo de acción de las enzimas?

Las enzimas tienen 2 mecanismos de acción para efectuar sus reacciones catalíticas:
- Teoría de llave-cerradura: Se basa en que el centro activo de la enzima tiene la forma
del sustrato y haciendo que esta solo reaccione con ese sustrato en específico.

- Teoría del ajuste inducido: Se basa en que el centro activo de la enzima se estira para
adaptarse más al sustrato y poder reaccionar con mayor efectividad o disminuir su
acción.