UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL

FACULTAD DE TECNOLOGÍA MÉDICA

LABORATORIO CLÍNICO Y ANATOMÍA PATOLÓGICA

ASIGNATURA: INMUNOLOGÍA II
INFORME 4 y 5:
“ DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS ANTIESTREPTOLISINAS O (PRUEBA DE
LATEX)- PRUEBAS NO TREPONÉMICAS Y TREPONÉMICAS EN EL DIAGNÓSTICO
DE LA SÍFILIS: VDRL-RPR-FTA-ABS ”

ESTUDIANTES:

Milla Trujillo, Wilber Alexander

Becerra Miranda Jahila Maria

GRUPO PRÁCTICA:
Lunes 8:00 a.m. – 12:00 p.m. (Sección A)

DOCENTE:
Mg. Hernández Acasiete Mirtha Amada
Mg Arturo Alexander Rivas Cárdenas
LIMA- PERÙ

2024
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LABORATORIO CLÍNICO Y ANATOMÍA PATOLÓGICA
PRACTICA N° 4. DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS ANTIESTREPTOLISINAS O
(PRUEBA DE LATEX)

I. INTRODUCCIÓN
Los estreptococos del grupo A betahemolíticos producen varios antígenos
intracelulares y extracelulares que estimulan la producción de anticuerpos por parte
del paciente infectado. Muchos de estos anticuerpos son detectables mediante pruebas
serológicas apropiadas. El más familiar de los cuales es la Estreptolisina O, una toxina
con características de enzima. La prueba de ASO fue seleccionada por qué: a) Tiene
buena reproducibilidad. b) El antígeno es producido por la mayoría de las cepas de
estreptococos del grupo A. c) El antígeno es asequible comercialmente. d) Es la
prueba más estudiada. En este tipo de prueba la Estreptolisina O se adsorbe a
partículas tales como látex. Las partículas recubiertas se mezclan con el suero del
paciente, sobre una placa portaobjetos. Las partículas se aglutinan en pocos minutos si
el anticuerpo ASO está presente en el suero. La principal ventaja de este tipo de
prueba es que las serolipoproteinas, los productos de desarrollo bacteriano, la
Estreptolisina O oxidada, no causan falsos títulos positivos.
<Un título elevado de ASO es, por lo común, índice de una infección reciente por
estreptococos del grupo A betahemolítico, y como tal puede ser de ayuda para el
médico en el diagnóstico de fiebre reumática aguda o glomerulonefritis aguda.
La prueba de ASO no es la única prueba útil para el diagnóstico de glomerulonefritis
aguda, su importancia radica en que ha sido la más ampliamente utilizada de las
pruebas de anticuerpo estreptocócico y por esto la más familiar, algunas son sus
desventajas: a) Los bajos títulos asociados con las infecciones cutáneas y sus secuelas
b) Los falsos títulos positivos causados por el desarrollo de ciertas bacterias en la
muestra de suero c) Y los falsos títulos positivos provocados por la oxidación del
reactivo Estreptolisina Antígenos del Estreptococo grupo A
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II. OBJETIVOS:
● Detectar la presencia de anticuerpos antiestreptolisina O (ASO) en muestras de
suero mediante técnicas cualitativas y semicuantitativas, utilizando una
suspensión de partículas de látex poliestireno recubiertas con estreptolisina O.

III. MATERIALES
● Placas de plástico o vidrio fondo negro
● 1 tapa gotero de 25 ul
● Pipetas y micropipetas
● Palillos mezcladores descartables
● Cronómetro
● Lámpara o fuente de luz
● Tubos de Kahn
IV. REACTIVOS

Reactivo A

Control positivo

Control negativo
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V. PROCEDIMIENTO y RESULTADOS
A. Agregar la muestra o los controles (25 μl)

Se colocó 25ul de muestra de suero de No pacientes*.

*La muestra del paciente o el control se mezclan con el
Reactivo A. Si la muestra contiene anticuerpos ASO, estos se unirán a
la estreptolisina O recubierta en las partículas de látex, facilitando la
aglutinación.

B. Colocar el Reactivo A* (1 gota, 25 μl) en la placa oscura con la muestra ya

presente

*El Reactivo A contiene partículas de látex recubiertas con

estreptolisina O (SLO), que son fundamentales para detectar la
presencia de anticuerpos antiestreptolisina O (ASO) en la muestra.
Estas partículas permiten la formación de un complejo
antígeno-anticuerpo visible.
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C. Mezclar con un palillo descartable
Este paso garantiza una suspensión uniforme de los reactivos, lo que es
crucial para que las partículas de látex entren en contacto con los anticuerpos
presentes en la muestra. La mezcla debe hacerse con un palillo limpio y
diferente para cada muestra para evitar la contaminación cruzada.

D. Iniciar el cronómetro y balancear suavemente la placa

El cronómetro se dispara inmediatamente después de mezclar para
asegurar que la aglutinación, si ocurre, se observe dentro del tiempo adecuado
(2 minutos). Balancear la placa suavemente ayuda a distribuir uniformemente
los componentes de la mezcla sobre la superficie, favoreciendo una reacción
completa.

E. Observar macroscópicamente el resultado dentro de los 2 minutos

La observación visual de la aglutinación es el indicador de un
resultado positivo. La aglutinación indica la presencia de anticuerpos ASO,
mientras que una suspensión homogénea sin aglutinación indica un resultado
negativo. El tiempo de 2 minutos es crucial para asegurar una correcta
interpretación.

RESULTADOS: NO REACTIVO

INTERPRETACIÓN :No es necesario realizar la prueba cuantitativa porque

el resultado sugiere que no hay una cantidad significativa de anticuerpos
antiestreptolisina O (ASO) detectados en la muestra, o que están por debajo del
límite de sensibilidad de la prueba. Al no haber aglutinación visible, se
interpreta que la concentración de ASO es baja o nula, y, por tanto, no es
necesario proceder a una titulación para cuantificar los anticuerpos, dado que
los niveles de ASO no parecen estar elevados.
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VI. RECOMENDACIONES
● No llevar los reactivos o muestras a temperatura ambiente, lo que puede afectar
la reacción de aglutinación.
● No agitar adecuadamente el Reactivo A antes de su uso, lo que puede provocar
una distribución desigual de partículas de látex.
● Uso incorrecto de volúmenes de reactivos o muestras, alterando los resultados.
● No mezclar uniformemente las muestras, lo que puede llevar a resultados
falsos negativos o positivos.
● Exceder el tiempo de lectura de 2 minutos o no agitar adecuadamente la placa,
afectando la interpretación de aglutinación.
● Errores en las diluciones seriadas en la técnica semicuantitativa, lo que
alteraría los títulos obtenidos.

VII. CONCLUSIONES :

El procedimiento descrito permite la detección precisa de anticuerpos

antiestreptolisina O (ASO) mediante técnicas cualitativas y semicuantitativas,
proporcionando resultados cruciales para el diagnóstico de infecciones
estreptocócicas. En las muestras de suero evaluadas no se evidencio una cantidad
significativa de anticuerpos antiestreptolisina O (ASO) detectados en la muestra. Al no
haber aglutinación visible, se interpreta que la concentración de ASO es baja o nula.
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PRÁCTICA 5. PRUEBAS NO TREPONÉMICAS Y TREPONÉMICAS EN EL
DIAGNÓSTICO DE LA SÍFILIS: VDRL – RPR

I. INTRODUCCIÓN

La sífilis es una enfermedad de transmisión sexual causada por Treponema pallidum

subespecie pallidum, una espiroqueta de la familia Spirochaetaceae. Esta bacteria se
caracteriza por su morfología enrollada y su capacidad para moverse de forma rotatoria, lo
que facilita su invasión en el organismo. T. pallidum es un parásito obligado del ser humano y,
a diferencia de otras espiroquetas, no tiene un reservorio animal conocido. Aparte de causar
sífilis, los treponemas pueden originar otras enfermedades en humanos, como la frambesia (T.
pallidum ssp. pertenue), el bejel (T. pallidum ssp. endemicum) y la pinta (Treponema
carateum), todas ellas morfológica y serológicamente indistinguibles. La sífilis tiene una
distribución global, pero su incidencia varía según factores socioeconómicos y geográficos.
La vía de transmisión más común es el contacto sexual directo, aunque también puede
transmitirse de manera congénita, a través de transfusiones sanguíneas contaminadas, o por
inoculación accidental. Su forma congénita ocurre principalmente cuando el feto se infecta en
el útero, aunque también puede adquirirla durante el parto.

Una de las características más notables de T. pallidum es su capacidad de penetrar las

mucosas intactas o pequeñas heridas en la piel, permitiendo la diseminación de la infección
por todo el cuerpo a través de los vasos linfáticos o sanguíneos. El curso clínico de la
enfermedad se divide en varias fases: incubación, sífilis primaria, secundaria, latente y tardía.
Durante la sífilis primaria, el signo más distintivo es el chancro, una lesión indolora que
aparece en el lugar de inoculación. En la etapa secundaria, la enfermedad presenta una gran
variedad de manifestaciones, siendo la más común el exantema que afecta palmas y plantas.
La fase latente se caracteriza por la ausencia de síntomas clínicos, aunque las pruebas
serológicas siguen siendo positivas. Para el diagnóstico de laboratorio, se utilizan técnicas
directas e indirectas para la detección del treponema. Las pruebas no treponémicas, como
VDRL y RPR, son útiles para el cribado, mientras que las pruebas treponémicas específicas,
como FTA-Abs y TPHA, confirman la infección. Es importante tener en cuenta la posibilidad
de falsos positivos, especialmente en las pruebas no treponémicas, lo que requiere un
diagnóstico serológico complementario para confirmar el caso clínico.
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II. OBJETIVOS
● Detectar la presencia de anticuerpos no treponémicos que reaccionan con antígenos de
cardiolipina, lecitina y colesterol en muestras de suero mediante técnicas cualitativas y
semicuantitativas, utilizando una suspensión de partículas de látex poliestireno
recubiertas con antígenos de estas reaginas para diagnóstico de sífilis.

III. MATERIALES
● Tarjetas de reacción
● Gotero metálico para dispensar el Reactivo
● Goteros plásticos descartables para dispensar y distribuir las muestras
● Agitador rotativo de 100 rpm (no se utilizó)
● Muestra de suero o plasma y muestra de LCR
● Placa de vidrio transparente con sectores de 14 mm de diámetro cada uno.
● Micropipetas 10-100ul y 100-1000ul
● Microscopio óptico
● palillos descartables
● Parafilm
● Tubos 12x100
● Solución fisiológica 0.9%
● Solución de cloruro de sodio 10 g/dl (10%)

IV. REACTIVOS
A. RPR
■ Reactivo A: suspensión de antígeno de cardiolipina 0,003%, lecitina 0,02% y
colesterol 0,09%, adsorbido sobre partículas de carbón 0,02% especialmente
tratado en buffer fosfatos 0,01 mol/l con cloruro de colina 0,72 mol/l, EDTA
12,5 mmol/l y conservantes apropiados.
■ Control Positivo: dilución de suero reactivo.
■ Control Negativo: dilución de suero no reactivo.

B. VLDR
■ Reactivo A: suspensión acuosa de antígeno de cardiolipina y lecitina
purificados, en buffer fosfatos con cloruro de colina y EDTA de acuerdo a las
indicaciones de la O.M.S.
■ Control Positivo: dilución de suero inactivado, reactivo.
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V. PROCEDIMIENTO Y RESULTADOS

A. RPR SLIDE TEST PRUEBA NO-TREPONÉMICA PARA LA DETECCIÓN

SEROLÓGICA DE SÍFILIS
FUNDAMENTOS DEL MÉTODO
En la prueba rápida para reaginas plasmáticas (RPR),
las "reaginas" presentes en el suero de individuos
infectados con Treponema pallidum, se detectan por
acción de las mismas c on antígeno de cardiolipina,
lecitina y colesterol adsorbido sobre partículas de
carbón. La reacción produce una aglutinación visible
macroscópica - mente, favorecida por las partículas
de carbón. Las reacciones inespecíficas se evitan con
el empleo de antígeno altamente purificado y el
agregado de cloruro de colina, por lo que no es
necesario inactivar la muestra.

1. Llevar a temperatura ambiente los reactivos y la muestra antes de realizar

el ensayo.
Mantener los reactivos y la muestra a temperatura ambiente asegura
que las reacciones ocurran en condiciones óptimas. Las temperaturas
extremas pueden afectar la estabilidad de los reactivos y la viabilidad de los
antígenos o anticuerpos en la muestra.

2. Colocar en cada uno de los círculos de la tarjeta de reacción con un gotero

plástico provisto : Controles positivo y negativo respectivamente 1 gota (50
μl).

Control positivo Control negativo

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La adición de la muestra o el control en el círculo permite que el
antígeno o anticuerpo presente en la muestra se encuentre en contacto con el
reactivo. Usar un volumen preciso garantiza la consistencia y reproducibilidad
de los resultados.

3. Con el extremo cerrado del gotero, distribuir la muestra uniformemente

en todo el círculo.

La distribución uniforme de la muestra asegura que todos los

componentes reactivos tengan la misma probabilidad de interactuar, lo que
maximiza la sensibilidad y especificidad de la prueba.

4. Con el gotero metálico provisto, en posición vertical, agregar en el centro

del círculo Reactivo A 1 gota SIN MEZCLAR.

Añadir el reactivo en el centro y sin mezclar

inicialmente permite que se produzca una reacción más
controlada y evita la dispersión prematura de los reactivos,
lo que podría interferir en la observación de la
aglutinación.

5. Hacer rotar horizontalmente la tarjeta de reacción en

forma manual o con un agitador rotativo a 100 rpm durante 8 minutos.

6. Observar la presencia o ausencia de aglutinación al cabo de este tiempo.

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CONTROL POSITIVO: REACTIVO se observa aglutinación CONTROL NEGATIVO : NO REACTIVO

7. REPETIMOS EL PROCEDIMIENTO CON EL SUERO DE LOS

ESTUDIANTES

RESULTADOS: NO REACTIVOS

8. REPETIMOS EL PROCEDIMIENTO CON EL SUERO PROBLEMA

RESULTADOS PRUEBA CUANTITATIVA:

REACTIVO
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9. PRUEBA SEMICUANTITATIVA Efectuar diluciones seriadas 1:2, 1:4,
1:8, hasta 1:64 empleando solución fisiológica y proceder de la misma
manera que en la técnica cualitativa. El título estará dado por la inversa de
la última dilución que se observe reactiva.

1-Se realizó diluciones en tubo por lo que se le agregó 50 ul de suero

fisiológico a cada tubo para realizarlo.
2- Al primer tubo se le añadió 50ul del suero reactivo y diluimos.
3-Retiramos 50ul del primer tubo y lo añadimos al segundo tubo, diluimos.
4-Hasta la dilución a 1:64
5. Tomamos 50 ul de cada tubo y colocamos en orden en la tarjeta de reacción

10. En la tarjeta de reacción agregamos 50 ul respectivamente con la fracción de

cada tubo ½ , ¼ ,⅛ 1/16 ,1/32. 1/64.
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11. Agregamos el Reactivo A SIN MEZCLAR, hacer rotar horizontalmente la
tarjeta de reacción en forma manual durante 8 minutos.

12. Observar la presencia o ausencia de aglutinación al cabo de este tiempo.

Podemos observar que en la dilución 1/64 se observó una reactividad leve

(1+), lo que indica que hubo una reacción positiva, aunque débil.

13. Como se observa aglutinación en nuestra dilución 1/64 , para confirmar el

resultado continuaremos con las diluciones 1/128, 1/256, 1/512.
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Observamos 1 + en la dilución 1/64 y 0 +( cero cruces) en la dilución 1/128.

RESULTADOS: REACTIVO 1/64

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B. VDRL MODIFICADA (USR) TEST.
Las "reaginas", presentes en individuos infectados por T. pallidum se detectan en suero
por la reacción con un antígeno cardiolipínico purificado y estabilizado. Si la muestra
contiene reagina, ésta se unirá al antígeno produciendo una floculación visible en
microscopio. Las reacciones inespecíficas se evitan con el empleo de antígeno
altamente purificado y el agregado de cloruro de colina característica de la técnica
USR (Unheated Serum Reagin) en la que no es necesario inactivar la muestra.

PRUEBA CUALITATIVA PARA LCR*

*Las muestras de LCR no necesitan ser inactivadas y no deben

estar hemolizadas (pueden dar causar una reacción cruzada y dar
resultados erróneos) ni hiperlipemicas.

1. Se debe diluir el Reactivo A, a la 1/2 con solución de cloruro de sodio 10 g/dl.

2. Colocamos en un tubo 100ul de reactivo A y 100ul de cloruro de sodio al 10%
3. Cubrimos el tubo con parafilm y con cuidado homogeneizamos.
4. En la placa de vidrio con la micropipeta colocamos 50ul del control y 50ul de
la muestra de LCR
5. Luego agregamos 10ul del reactivo A diluido, mezclamos.
6. Balanceamos suavemente durante 8 min a 180 rpm.
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7. Leemos la placa en el microscopio a 40x y reportamos.

RESULTADOS:
PRESENCIA DE FLOCULACIÓN

VI. RECOMENDACIONES
■ Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
■ Evitar el contacto de los dedos con los círculos de la tarjeta de reacción, dado que el
depósito de grasa en los mismos puede ocasionar una mala distribución de la muestra,
produciendo resultados erróneos.
■ Si la muestra no puede ser distribuida uniformemente en toda la superficie de prueba, se
recomienda utilizar otro círculo de la tarjeta.
■ Una vez utilizado el gotero metálico para dispensar el Reactivo A, descartar el remanente
y enjuagarlo con agua destilada.
■ El Reactivo A debe dispensarse manteniendo el gotero en posición vertical respecto de la
tarjeta de reacción a fin de asegurar que el volumen de la gota sea el correcto.
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VII. CONCLUSIONES

El procedimiento descrito permitió la detección presencia de anticuerpos no

treponémicos que reaccionan con antígenos de cardiolipina, lecitina y colesterol en
muestras de suero y LCR, siendo reactivo a 1/64 en RPR TEST y presencia de
flóculos en VLDR TEST respectivamente. Las pruebas de diagnóstico no
treponémicas aquí reportadas junto a los signos clínicos son por lo tanto los
procedimientos más rápidos y útiles disponibles para el diagnóstico de sífilis, siendo la
VDRL TEST gold standard para la prueba de neurosífilis.

VIII. CUESTIONARIO
1. En la Prueba de FTA-Abs ¿Qué función cumple el sorbente?
El sorbente en la prueba FTA-Abs tiene la función de eliminar anticuerpos no
específicos que podrían reaccionar de manera cruzada y generar falsos positivos. Estos
anticuerpos pueden estar presentes debido a otras infecciones bacterianas no
relacionadas con Treponema pallidum.
Al eliminar estos anticuerpos no específicos, el sorbente asegura que solo los
anticuerpos específicos contra Treponema pallidum sean detectados en la prueba,
mejorando así la precisión del diagnóstico.

2. El grado de brillantes observado en la lectura de las treponemas en la prueba de

FTA-Abs ¿Con qué está relacionado?

El grado de brillo observado en la lectura de las treponemas durante la prueba

FTA-Abs está relacionado con la cantidad de anticuerpos específicos contra
Treponema pallidum presentes en la muestra del paciente. A mayor concentración de
estos anticuerpos, mayor será la fluorescencia observada, ya que los anticuerpos están
marcados con un fluorocromo que emite luz bajo un microscopio de fluorescencia.
Este brillo permite la visualización y evaluación de la reactividad, y su intensidad
refleja la respuesta inmune del paciente frente a la infección por sífilis.
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IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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(Detailed). https://www.cdc.gov/std/syphilis/stdfact-syphilis-detailed.htm
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detección de infecciones estreptocócicas: Antiestreptolisina O (ASO). Revista
Mexicana de Patología Clínica y Medicina de Laboratorio, 64(1), 15-20.
https://doi.org/10.1016/j.rmpc.2017.03.001
García P., Cárcamo C., y Escobedo J. (2018). Evaluación de las pruebas rápidas no
treponémicas en poblaciones de alto riesgo en Perú. Revista Peruana de
Medicina Experimental y Salud Pública, 35(3), 411-420.
Hook, E. W., & Peeling, R. W. (2004). Syphilis control—a continuing challenge. New
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Lafond, R. E., & Lukehart, S. A. (2006). Biological basis for syphilis. Clinical
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"Evaluación de tres reactivos para detección de sífilis" - VIII Congreso
Argentino de Bioquímica, 54º Triduo Bioquímico Científico Anual 1990 -
Revista A.B.A. 54/3, 1990.
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Panamericana, 1983.
Wiener lab.https://webapi.wiener-lab.com/api/file/1649/aso_latex.pdf