Ensayos Microbiológicos IES MATEO ALEMÁN

U.T. 2 NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE

MICROBIOLOGÍA. MATERIAL Y EQUIPOS EN EL LABORATORIO DE
MICROBIOLOGÍA

1.- INTRODUCCIÓN
2.- CLASIFICACIÓN DE LOS AGENTES BIOLÓGICOS. R.D. 664/1997
3.- VÍAS DE INFECCIÓN
4.- NIVELES DE BIOSEGURIDAD
4.1.- Nivel de contención biológica 1: Laboratorio básico
● Instalación del laboratorio
● Técnicas de laboratorio
● Normas para la vigilancia de los trabajadores que manipulan microorganismos
4.2.- Nivel de contención biológica 2
● Instalación del laboratorio
● Equipo especial de contención
● Técnicas de laboratorio específicas
● Normas para la vigilancia de los trabajadores que manipulan microorganismos
5.- MATERIAL Y EQUIPOS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

1.- INTRODUCCIÓN
El trabajo con muestras microbiológicas puede implicar riesgos para la salud de los
trabajadores, debido a la posible presencia de microorganismos patógenos,
Desde los inicios de la microbiología a mediados del siglo XIX, se han notificado y registrado
infecciones accidentales resultantes de la manipulación de microorganismos patógenos en los
laboratorios. Actualmente existe legislación enfocada hacia la protección de los trabajadores
contra los riesgos relacionados con la exposición a agentes biológicos durante el trabajo.
El trabajo en el laboratorio de microbiología debe realizarse teniendo siempre en cuenta:
1) Los riesgos potenciales de los microorganismos en cuestión.
2) Las vías por las que estos gérmenes pueden penetrar en el organismo y causar
infecciones.
3) Los métodos correctos de contención de estos gérmenes para que no lleguen a acceder a
dichas vías.

2.- CLASIFICACIÓN DE LOS AGENTES BIOLÓGICOS. R.D. 664/1997

No todos los microorganismos presentan la misma capacidad para producir infecciones.
Algunos son inofensivos, otros son responsables de enfermedades con síntomas leves y otros
pueden difundirse en la comunidad ocasionando graves enfermedades epidémicas.
La clasificación (en cuatro grupos de riesgo), así como un listado con los microorganismos que
actualmente forman parte de cada grupo, se encuentra en el REAL DECRETO 664/1997, de 12
de mayo, protección de los trabajadores contra los riesgos relacionados con la exposición a
agentes biológicos durante el trabajo.
A continuación se recogen, textualmente, los artículos 2 y 3 de dicho Real Decreto:
UT 2 1 de 16
 Ensayos Microbiológicos IES MATEO ALEMÁN

Artículo 2. Definiciones

A efectos del presente Real Decreto se entenderá por:

a. Agentes biológicos: microorganismos, con inclusión de los genéticamente modificados, cultivos celulares y
endoparásitos humanos, susceptibles de originar cualquier tipo de infección, alergia o toxicidad.
b. Microorganismo: toda entidad microbiológica, celular o no, capaz de reproducirse o de transferir material genético.
c. Cultivo celular: el resultado del crecimiento in vitro de células obtenidas de organismos multicelulares.

Artículo 3. Clasificación de los agentes biológicos

1. A efectos de lo dispuesto en el presente Real Decreto, los agentes biológicos se clasifican, en función del riesgo
de infección, en cuatro grupos:
1. agente biológico del grupo 1: aquél que resulta poco probable que cause una enfermedad en el hombre;
2. agente biológico del grupo 2: aquél que puede causar una enfermedad en el hombre y puede suponer un
peligro para los trabajadores, siendo poco probable que se propague a la colectividad y existiendo
generalmente profilaxis o tratamiento eficaz;
3. agente biológico del grupo 3: aquél que puede causar una enfermedad grave en el hombre y presenta un
serio peligro para los trabajadores, con riesgo de que se propague a la colectividad y existiendo
generalmente una profilaxis o tratamiento eficaz;
4. agente biológico del grupo 4: aquél que causando una enfermedad grave en el hombre supone un serio
peligro para los trabajadores, con muchas probabilidades de que se propague a la colectividad y sin que
exista generalmente una profilaxis o un tratamiento eficaz.
2. En el Anexo II de este Real Decreto se presenta una lista de agentes biológicos, clasificados en los grupos 2, 3, ó
4, siguiendo el criterio expuesto en el apartado anterior. Para ciertos agentes se proporcionan también
informaciones adicionales de utilidad preventiva.
Para la correcta utilización de la citada lista, deberán tenerse en cuenta las notas introductorias contenidas en
dicho Anexo.

Los agentes biológicos clasificados en los grupos 2, 3 y 4 están agrupados en las siguientes
familias:
● Bacterias
● Virus
● Parásitos (protozoos y helmintos)
● Hongos
Además hay que tener en cuenta que la no inclusión en la lista de un determinado agente no
significa su implícita y automática clasificación en el grupo 1. y que en la lista no se han incluido los
microorganismos genéticamente modificados, objeto de una reglamentación específica.

Para aclarar cualquier duda sobre el RD 664/1997 existe una “Guía técnica para la evaluación y
prevención de los riesgos relacionados con la exposición a agentes biológicos” que se
encuentra, al igual que el RD en la página del Instituto Nacional de Seguridad y Salud en el
Trabajo (INSST)

3.- VÍAS DE INFECCIÓN

Los microorganismos se pueden transmitir, en el laboratorio, por vía respiratoria (inhalación),
vía dérmica (a través de la piel), vía parenteral (inoculación) y vía digestiva (ingestión).
● Vía respiratoria: por inhalación de partículas infectadas transmitidas por el aire
(aerosoles), que se producen en algunas manipulaciones que se llevan a cabo en el
laboratorio, como centrifugación, mezclado, trituración, flameado de asas, etc.
UT 2 2 de 16
 Ensayos Microbiológicos IES MATEO ALEMÁN

● Vía dérmica: a través de la piel o de las mucosas, debido normalmente a la

utilización de ropa sucia, salpicaduras, no usar guantes cuando sea necesario, etc.
Esta penetración se verá muy favorecida si el estado de integridad de la piel es
deficiente (heridas, grietas,…). Hay que tener en cuenta, así mismo, las salpicaduras
de líquidos infectados en los ojos.
● Vía parenteral: la inoculación se puede producir por pinchazos o cortes con
materiales de vidrio infectados y rotos (pipetas pasteur, pipetas, portas, etc.)
● Vía digestiva: debido a la inadecuada limpieza de las manos, onicofagia (comerse
las uñas), consumir bebidas, comidas o fumar en el lugar de trabajo. También hay
que tener precaución con los objetos que se ponen encima de las mesas (lápices,
bolígrafos, cuadernos, etc.) que luego podemos llevar a la boca o tocar con las
manos. Hay que tener en cuenta que las mesas pueden estar contaminadas por
salpicaduras o derrames accidentales y/o no estar bien desinfectadas.

4.- NIVELES DE BIOSEGURIDAD.

La prevención de infecciones que se pueden adquirir en un laboratorio de microbiología se
concreta en la creación de barreras, que pueden ser: primarias alrededor de los
microorganismos para impedir su dispersión en el laboratorio, secundarias alrededor del
operador para que actúen como una red de seguridad si se rompieran las barreras primarias y
terciarias que impidan que cualquier germen que no sea contenido por las barreras primarias y
secundarias alcance a la comunidad.

Los niveles de riesgo condicionan las medidas preventivas tanto individuales como colectivas,
la manipulación del material biológico, la instalación del laboratorio, las medidas de
protección, las técnicas de laboratorio, etc.

Relación de los grupos de riesgo con los niveles de bioseguridad, las prácticas y el equipo
GRUPO DE NIVEL DE TIPO DE LABORATORIO PRÁCTICAS DE EQUIPO DE SEGURIDAD
RIESGO BIOSEGURIDAD LABORATORIO

Básico Enseñanza básica, TMA Ninguno; trabajo en mesa de

1 Nivel 1 investigación laboratorio al descubierto
Básico Servicios de TMA y ropa Trabajo en mesa al
2 Nivel 2 atención primaria; protectora; señal de descubierto y CSB para
diagnóstico, riesgo biológico posibles aerosoles
investigación
Contención Diagnóstico Prácticas de nivel 2 CSB además de otros
3 Nivel 3 especial, más ropa especial, medios de contención
investigación acceso controlado y primaria para todas las
flujo direccional del actividades
aire
Contención Unidades de Prácticas de nivel 3 CSB de clase III o trajes
4 máxima patógenos más cámara de presurizados junto con CSB
Nivel 4 peligrosos entrada con cierre de clase II, autoclave de
hermético, salida doble puerta (a través de la
con ducha y pared), aire filtrado
eliminación especial
de residuos
TMA: técnicas microbiológicas apropiadas
CSB: cámara de seguridad biológica.
(fuente: Manual de Bioseguridad en el Laboratorio de la OMS, 3ª ed.)

UT 2 3 de 16
Ensayos Microbiológicos IES MATEO ALEMÁN

Nivel de contención biológica 1: Laboratorio básico

Instalación del laboratorio

Sin duda, la seguridad dentro del laboratorio debe tenerse en cuenta desde la fase de diseño del
mismo, aunque esto no siempre es posible. Los laboratorios de tipo medio o pequeños se
ubican muchas veces en locales no pensados para este uso y con el agravante que con el paso
del tiempo se van ampliando con nuevas tecnologías quedando los locales pequeños y llenos de
aparatos. La aplicación de una política de seguridad en el laboratorio, cuando éste ya lleva
tiempo en funcionamiento y creciendo, es complicada y cara e incluso puede que no sea viable
en muchos casos sin recurrir a un rediseño del laboratorio.

● El laboratorio debe tener techos, paredes y suelos fáciles de lavar, impermeables a los
líquidos y resistentes a la acción de las sustancias químicas y productos desinfectantes
que se usan ordinariamente en ellos. Los suelos deben ser antideslizantes.
● Las tuberías y conducciones no empotradas deben estar separadas de las paredes y
evitar tramos horizontales para no acumular el polvo.
● Las superficies de trabajo tienen que ser impermeables y resistentes a los ácidos,
álcalis, disolventes orgánicos y al calor moderado. En las poyatas hay que evitar las
baldosas con juntas de cemento. Además hay que calcular una longitud de 2 metros
lineales por persona.
● Se instalará una iluminación adecuada y suficiente y que no produzca reflejos. El nivel
recomendado para el trabajo de laboratorio es de 500 lux, según la Norma Técnica DIN
5053.
● El mobiliario será robusto. Los espacios entre mesas, armarios, campanas y otros
muebles serán suficientemente amplios para facilitar la limpieza.
● En cada unidad del laboratorio debe haber lavabos de manos, a ser posible con agua
corriente, instalados preferentemente cerca de la salida.
● Las puertas deben estar protegidas contra incendios y cerrarse automáticamente.
Además, estarán provistas de mirillas con cristal de seguridad de 40 por 23 cm, situado
a la altura de la mirada. Su misión es evitar accidentes y poder examinar el interior del
laboratorio sin abrir la puerta.
● Fuera de las zonas de trabajo deberán estar los vestuarios, comedores o zonas de
descanso y, caso de que el edificio donde se halle ubicado el laboratorio lo permita,
espacios reservados para fumadores.
● En el mismo laboratorio o local anexo deberá colocarse un autoclave para la
descontaminación del material de desecho infeccioso.
● Deberá reservarse espacio para guardar los artículos de uso inmediato, evitando su
acumulación desordenada sobre las mesas y pasillos. Para el almacenamiento a largo
plazo se recomienda un local fuera de la zona de trabajo.
● Habrá que prever espacio e instalaciones para manejar y almacenar disolventes,
material radioactivo y gases comprimidos en condiciones adecuadas de seguridad y
siguiendo las normativas específicas para ello.
● Deben existir medios de protección contra incendios, a nivel de prevención, evitando
que se inicie el incendio y a nivel de protección, evitando que se propague el incendio.
Así mismo debe haber un sistema de detección de humos y/o fuego con alarma acústica
y óptica.
● Debe disponerse de una instalación eléctrica segura y de suficiente capacidad. Se
necesita un sistema de iluminación de emergencia para facilitar la salida del laboratorio
en condiciones de seguridad. Conviene que haya un grupo electrógeno de reserva para
alimentar el equipo esencial (estufas, congeladores, etc.).
● Se dispondrá de un botiquín suficiente e información sobre primeros auxilios.
UT 2 4 de 16
Ensayos Microbiológicos IES MATEO ALEMÁN

● No existen normas concretas de ventilación, aunque se recomienda trabajar en

depresión y una renovación de aire de 60 m3 por persona y hora.
● No debe haber ninguna conexión entre las conducciones de agua destinada al
laboratorio y las del agua de bebida. El abastecimiento de agua potable al laboratorio
estará protegido contra el reflujo por un dispositivo adecuado.

Técnicas de laboratorio

Las técnicas de laboratorio son los procedimientos de trabajo recomendados. Hay que tener en
cuenta que un procedimiento ordenado de trabajo es indispensable para la seguridad.

● Nunca se pipeteará con la boca, empleándose los dispositivos de tipo mecánico.

● Deben utilizarse guantes adecuados en todos los trabajos que entrañen algún contacto
con sangre, material infeccioso o animales infectados.
● Hay que utilizar batas o uniformes de trabajo para evitar la contaminación de los
vestidos de calle. No se utilizará la ropa de laboratorio fuera de éste (cafetería,
biblioteca, etc.).
● Siempre que haya peligro de salpicaduras se utilizarán gafas de seguridad, pantallas
faciales u otros dispositivos de protección.
● A fin de evitar los cortes accidentales, se preferirá el uso de material plástico al de
cristal.
● En la zona del laboratorio no se permitirá comer, guardar alimentos, beber, fumar ni
usar cosméticos.
● El uso de agujas hipodérmicas y de jeringas debe evitarse. Cuando ello no sea posible,
las agujas se recogerán en recipientes adecuados que eviten los pinchazos accidentales.
● Las superficies de trabajo se descontaminarán por lo menos una vez al día y siempre
que haya un derrame. Una nota debe especificar el modo de empleo de los
desinfectantes, la naturaleza del desinfectante a utilizar y su concentración.
● Todos los desechos biológicos, ya sean líquidos o sólidos, tienen que ser
descontaminados antes de su eliminación y se seguirán las normas existentes sobre la
gestión de residuos contenidos en las reglamentaciones referentes a residuos sanitarios.
● Todo el personal se lavará las manos después de haber manipulado material o animales
infecciosos, así como al abandonar el laboratorio.
● El acceso al laboratorio debe ser controlado.
● El material contaminado, que deba ser descontaminado en un lugar exterior al
laboratorio, se colocará en un contenedor especial, y se cerrará antes de sacarlo del
laboratorio.
● Deberá existir un programa de lucha contra insectos y roedores que se pondrá en
práctica.

Hasta aquí se han descrito las medidas y técnicas recomendadas para el laboratorio básico,
donde se manipulan agentes biológicos. Dichas medidas se aplicarán también en los niveles de
seguridad superiores añadiéndose precauciones suplementarias para cada nivel de riesgo.

Normas para la vigilancia de los trabajadores que manipulan microorganismos

Para los trabajadores que manipulen estos microorganismos, a pesar que tienen pocas
probabilidades de provocar enfermedades humanas, es recomendable practicarles un
reconocimiento médico, en el que se tenga en cuenta los antecedentes médicos de cada
individuo. Conviene que se notifiquen rápidamente las enfermedades y todos los accidentes de
laboratorio.

UT 2 5 de 16
Ensayos Microbiológicos IES MATEO ALEMÁN

Nivel de contención biológica 2

Le corresponde el nivel de riesgo II, indicador de riesgo individual moderado y riesgo

comunitario limitado.

Instalación del laboratorio

● Cada unidad debe tener un lavabo para el lavado de manos. Éste deberá funcionar
preferentemente con el codo o con el pie.
● Las ventanas estarán herméticamente cerradas.
● El laboratorio donde se manipulen los agentes biológicos, estará separado del pasillo de
circulación por un vestíbulo. Éste servirá a los usuarios para cambiarse la ropa de
trabajo, ya que tiene que ser distinta a la habitual.
● Si el aire del laboratorio es renovado regularmente, el aporte de aire nuevo será como
mínimo de 60 m3 por persona y hora. Hay que vigilar que con los movimientos, no haya
arrastre de aire del interior hacia el exterior y de esta forma no haya contaminación.
● Será necesario que haya un autoclave en el mismo laboratorio, para la
descontaminación de desechos y de material biológico contaminado.
● Ha de haber una sala de reposo para el personal.

Equipo especial de contención

Se utilizarán sólo Cabinas de Seguridad Biológica clase I y clase II, respondiendo como
mínimo a la Norma BS de 1979 (British Standard 5726).

Técnicas de laboratorio específicas

● Para la centrifugación de grandes concentraciones y volúmenes de agentes infecciosos,

se utilizará una centrífuga herméticamente cerrada (sistema "aerosol free") y tubos de
seguridad. El llenado, el cierre y la apertura de los tubos debe efectuarse en Cabinas de
Seguridad Biológica.
● Todas las técnicas que puedan producir aerosoles tales como la centrifugación, la
trituración, las mezclas, las agitaciones enérgicas, las disrupciones sónicas, la apertura
de envases de materiales infecciosos, cuya presión interna pueda diferir de la presión
ambiente, etc., se realizarán en cabinas de seguridad biológica. También se evitará
manipulaciones tales como la inserción de asas o agujas calientes en un cultivo, y se
utilizarán asas desechables; se evitará también la inyección violenta de fluidos a partir
de pipetas o jeringas ya que todas estas técnicas pueden generar aerosoles.
● El modo de empleo y las limitaciones de las Cabinas de Seguridad Biológica se
explicarán a todos los usuarios.
● Las puertas del laboratorio se mantendrán cerradas durante las manipulaciones.
● El personal se lavará las manos después de haber manipulado el material biológico, los
animales y antes de dejar el laboratorio. Será obligatorio llevar guantes apropiados
durante todas las técnicas que comporten un riesgo de contacto accidental directo con el
material biológico infeccioso.
● El responsable del laboratorio deberá establecer las reglas o los procedimientos según
las cuales se autorice el acceso al laboratorio. Sólo las personas prevenidas de la
naturaleza de los riesgos pueden ser autorizadas a entrar en el local de trabajo. Las
personas que sean de alto riesgo para la adquisición de una infección

UT 2 6 de 16
Ensayos Microbiológicos IES MATEO ALEMÁN

(inmunodeprimidas) o a las que la infección podría ser particularmente perjudicial, nose

les autorizará la entrada al laboratorio.
● El empleo de jeringas y agujas hipodérmicas estará restringido a la inyección parenteral
y a la aspiración de líquidos de los animales y de los viales con cápsula perforable, así
como a la extracción de fluidos biológicos, debiendo extremar las precauciones en su
manejo y eliminación. Por ello se utilizarán agujas y jeringas de un solo uso, no se
deberá reencapsular las agujas y se eliminarán directamente en recipientes rígidos,
aptos para la esterilización o para la incineración.
● La señalización internacional de riesgo biológico se colocará en las puertas de acceso al
laboratorio. También deben señalizarse los congeladores y refrigeradores utilizados
para guardar microorganismos del tipo de riesgo 2 (ver fig. 1).

Fig. 1: Señal de peligro biológico. (Anexo III RD 664/1997)

● Debe exigirse el uso de vestidos específicos, que no se llevarán fuera del laboratorio. Se
recomienda el uso de gafas de seguridad, máscaras o de otros dispositivos de
protección.
● Los accidentes que puedan llevar a una evidente exposición a los agentes infecciosos
deben informarse inmediatamente al responsable del laboratorio.
● Se preparará y adoptará un manual de seguridad biológica para el laboratorio. Los
miembros del personal deben estar prevenidos de los riesgos a los que están expuestos
y deben leer las instrucciones sobre las prácticas de laboratorio. La conducta a seguir en
caso de accidente estará en lugar bien visible y claramente expuesta en el laboratorio.

Normas para la vigilancia de los trabajadores que manipulan microorganismos

● Es indispensable el reconocimiento médico previo a la contratación o a la asignación

del puesto de trabajo. Hay que tener en cuenta los antecedentes médicos. Es
conveniente obtener una muestra de suero para utilizarla como referencia y en algunos
casos es conveniente también practicar un examen físico.
● El director del laboratorio debe mantener un registro de enfermedades y ausencias
laborales, y a su vez el personal mantendrá informado al director de cualquier ausencia
por enfermedad.
● Las mujeres en edad fértil deben ser informadas, de manera inequívoca, de los riesgos
que supone para el feto la exposición a ciertos microorganismos como la rubéola y los

UT 2 7 de 16
 Ensayos Microbiológicos IES MATEO ALEMÁN

citomegalovirus. Las medidas que se adopten para proteger al feto dependen de los
agentes microbiológicos causantes de la exposición.

5.- MATERIAL Y EQUIPOS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

Además del material fungible habitual en un laboratorio:

- Microscopios ópticos provistos de varios oculares, entre ellos uno de inmersión.

- Microscopio o lupa binocular.

- Estufas de cultivo de laboratorio.

- Baños termostáticos.

- Centrífugas

- Mezcladoras, trituradoras de tejidos y homogeneizadores. (Stomacher)

- Equipo de vidrio, de plástico y material pequeño general:

- Placas de petri.
- Tubos de ensayo.
- Frascos de dilución.
- Tapones y cierres.
- Frascos de almacenamiento de medios.
- Recipientes para muestras.
- Tarros y recipientes para muestras.
- Pipetas pasteur.
- Pipetas graduadas.
- Pipeteadores automáticos.
- Complementos de las pipetas.
- Portaobjetos y cubreobjetos.
- Campanas de Durham.
- Asas y agujas de inoculación.
- Asas de Drigalski.
- Gradillas y cestillos.

- Mecheros Bunsen.
- Otros artículos: lupa de mano, pinzas, escalpelo, servilletas para limpieza,
hisopos, espátulas de madera, bandeja para conservar asas, guantes estériles,
lámparas ultravioleta, batas, etc.

- Autoclave.

- Guantes de protección térmica.

- Balanzas granatario.

UT 2 8 de 16
Ensayos Microbiológicos IES MATEO ALEMÁN

- Caldos y agares necesarios para la preparación de los medios de cultivo.

- Tiras de papel con cultivos.

- Discos de papel y sistemas de identificación por kits (galerías comerciales)

- Reactivos químicos y colorantes generales.

- Contador de colonias.

- Papel para esterilizar en autoclave.

- Kits para determinaciones rápidas

Cabinas de seguridad biológica. Definición. Tipos

"Es una cabina proyectada para ofrecer protección al usuario y al ambiente de los riesgos
asociados al manejo de material infeccioso y otros materiales biológicos peligrosos,
excluyendo materiales radiactivos, tóxicos y corrosivos."

En este punto conviene aclarar el concepto que incluye su denominación, seguridad biológica,
referida a la protección que proporcionan al trabajador y que está basada en la dinámica de los
fluidos. Es habitual que estas cabinas sean denominadas "Cabinas de flujo laminar" que si bien
es cierto que alguno de sus tipos está dotado de este tipo de flujo, no debe asociarse el término
flujo laminar al de seguridad biológica, puesto que existen otros tipos de cámaras dotadas del
mismo (Cabinas de Flujo Laminar Horizontal, Cabinas de Flujo Laminar Vertical), que
únicamente aseguran un flujo de aire limpio y sin turbulencias sobre el trabajo que se realice,
pero que en ningún modo proporcionan protección al trabajador.

Las cabinas de seguridad biológica se clasifican en tres tipos denominados: Clase I, Clase II y
Clase III.

Cabinas de seguridad biológica. Clase I

Su fundamento es similar al de una campana de humos, es una cabina que trabaja a presión
negativa y está abierta frontalmente.

El aire procedente del local se introduce por la abertura frontal y es extraído al 100% de la
misma. La figura 1 muestra un esquema general de este tipo de cabinas.

UT 2 9 de 16
Ensayos Microbiológicos IES MATEO ALEMÁN

Fig. 1: Cabina de seguridad biológica Clase I

Las diversas normas técnicas existentes proporcionan recomendaciones precisas sobre las
dimensiones de la abertura frontal y la velocidad de entrada de aire que permiten asegurar un
adecuado grado de protección para el trabajador.

Así, recomiendan velocidades de entrada de aire, para aberturas frontales no superiores a 20

cm, de 0,4 m/seg como mínimo y no superiores a 1 m/seg (velocidades superiores a 1 m/seg
dan lugar a turbulencias y posibles retornos con lo que disminuiría el grado de protección
proporcionado por la cabina).

El aire extraído de la cabina es descontaminado antes de su vertido a la atmósfera a través de

filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air), filtros absolutos comprobados por test que
dictaminan una eficacia mínima del 99,99% para partículas de 0,3 µ de diámetro.

El uso de estas cabinas no previene la exposición por contacto a materiales peligrosos. Así
como tampoco garantizan la protección, en caso de que se requiera, del producto manipulado.

Cabinas de seguridad biológica. Clase II

Este tipo de cabinas se desarrolló para proteger a los trabajadores de los materiales
manipulados y para al mismo tiempo, proteger dichos materiales de la contaminación externa.

El área de trabajo es recorrida por un flujo descendente de aire filtrado estéril (Flujo Laminar
Vertical).

La protección del trabajador viene dada por la creación de una barrera de aire formada por la
entrada de aire desde el local, a través de la abertura frontal, y por el mencionado flujo
descendente de aire filtrado estéril.

UT 2 10 de 16
Ensayos Microbiológicos IES MATEO ALEMÁN

Ambos flujos de aire son conducidos a través de unas rejillas situadas en la parte anterior y
posterior del área de trabajo a un pleno desde el cual el aire es redistribuido. Un tanto por
ciento del mismo es extraído mientras que el resto es recirculado sobre el área de trabajo.

El sistema de filtración (Filtros HEPA) del aire puede variar según los fabricantes, pero tanto el
aire recirculado como el extraído deben ser filtrados al menos una vez.

El número de ventiladores es asimismo variable; algunos fabricantes utilizan un único

ventilador para la extracción y la recirculación. Otros, utilizan hasta tres ventiladores, dos para
la recirculación y otro para la extracción.

El ventilador o ventiladores fuerzan el paso del aire de la cabina y el que penetra por la
abertura frontal, a través de rejillas situadas en la parte frontal y posterior del área de trabajo.
Este aire es filtrado (Filtro HEPA) y reconducido a la parte superior de la cabina donde una
parte del aire filtrado estéril es recirculado y otra parte es extraído a través de un sistema de
filtración-purificación del aire, gracias a otro ventilador que suele estar instalado en el exterior
de la cabina.

La disposición de ventiladores y filtros debe asegurar que todas aquellas zonas del circuito de
aire contaminado (no filtrado) se hallan a presión negativa, de modo que ante cualquier
eventualidad el aire no pueda escapar al exterior de la cabina.

El volumen de aire extraído es equivalente al tomado en la abertura frontal.

La figura 2 muestra un esquema general de las Cabinas de Seguridad Biológica. Clase II

Fig. 2: Cabina de Seguridad Biológica. Clase II

Existen, básicamente, dos tipos de cabinas Clase II. Ambos tipos difieren en la proporción de
aire recirculado, en las velocidades de aire en la abertura frontal y sobre el área de trabajo.

UT 2 11 de 16
Ensayos Microbiológicos IES MATEO ALEMÁN

Cabinas de Seguridad Biológica. Clase II Tipo A

Ninguno de los dos tipos descritos (el A y el B) previene de las exposiciones por contacto a
materiales peligrosos.

Aproximadamente un 70% del volumen total de aire es recirculado sobre el área de trabajo,
mientras que el 30% restante es extraído.

La velocidad de entrada de aire para aberturas frontales de 20 cm debe ser como mínimo de 0,4
m/seg.

La velocidad de aire del flujo laminar descendente oscila según el diseño de la cabina, aunque
es aconsejable, en media, un mínimo de 0,4 m/seg.

Cabinas de Seguridad Biológica. Clase II Tipo B

Aproximadamente un 30% del volumen total de aire es recirculado sobre el área de trabajo,
mientras que en este caso el 70% restante es extraído.

La velocidad de entrada de aire para aberturas frontales de 20 cm debe ser como mínimo de 0,5
m/seg.

La velocidad de aire del flujo descendente, en media, debe ser de 0,25 m/seg.

Cabinas de seguridad biológica. Clase III

Estas cabinas son diferentes en concepto de las cabinas Clase I y II. En este caso la cabina está
herméticamente sellada, separando completamente al trabajador del trabajo que esté realizando
mediante barreras físicas (panel frontal completamente cerrado, manipulación a través de
guantes de goma). La figura 3 muestra un esquema general de las Cabinas de Seguridad
Biológica. Clase III

UT 2 12 de 16
Ensayos Microbiológicos IES MATEO ALEMÁN

Fig. 3: Cabina de Seguridad Biológica. Clase III

El aire es tomado del local o del exterior y filtrado (Filtro HEPA). En su extracción (100%),
suele haber dos filtros HEPA montados en serie para la completa purificación del aire extraído.

Este tipo de cabinas ofrece el grado máximo de protección al trabajador, obviando incluso la
exposición por contacto.

Selección de la cabina de seguridad biológica

Como se indica en la introducción, las Cabinas de Seguridad Biológica constituyen el principal

elemento del equipo de contención física, actuando como barreras que evitan el paso de los
aerosoles generados en su interior al ambiente del local de trabajo.

Así pues, la selección del tipo de cabina más adecuado deberá basarse en los siguientes
criterios:

● Riesgos que presenta el material manipulado.

● Posible generación de aerosoles debidos a las técnicas manipulativas empleadas.
● Grado de protección a obtener frente a la contaminación ambiental.

En cuanto al primero de los criterios, al revisar la bibliografía se encuentra una leve disparidad
debida a las diferencias que presentan las distintas clasificaciones de agentes biológicos según
el grupo de riesgo en que han sido incluidos.

Es de reseñar que en nuestro país y por el momento no se dispone de esta clasificación, aunque
el hecho de que el Anexo V de la Propuesta de Directiva del Consejo "Sobre la protección de
los trabajadores contra los riesgos relacionados con la exposición a agentes biológicos durante
el trabajo", contemple el compromiso por parte de los Estados miembro de elaborarla según las
definiciones de los grupos de riesgo, hace previsible su aparición.

El cuadro 1 muestra en resumen la información que sobre el tema aparece en la bibliografía.

Cuadro 1: Selección de cabinas de seguridad biológica

(*) Ante la eventualidad de que partículas de diámetro inferior a 0,3 µ atraviesen el filtro HEPA, el
aire extraído de la cabina debe evacuarse al exterior y/o incorporar un sistema complementario
de tratamiento del mismo.

UT 2 13 de 16
Ensayos Microbiológicos IES MATEO ALEMÁN

Recomendaciones para el uso de cabinas de seguridad biológica

Materiales y equipos

Se recomienda ubicar todo el material a utilizar en el interior de la cabina antes de empezar a

trabajar. De esta forma se evita que nada pase hacia dentro o hacia fuera de la misma hasta que
el trabajo haya terminado.

No es recomendable el uso de mecheros Bunsen o similares, puesto que su incorrecta ubicación

en el interior de la Cabina puede provocar desviaciones y turbulencias del flujo laminar y
quemar los filtros HEPA. Cuando su uso sea necesario deberá estudiarse su ubicación de modo
que las turbulencias provocadas por el calor de la llama influyan lo menos posible en la zona
estéril de trabajo.

Es recomendable el uso de microincineradores eléctricos para la esterilización de asas de

siembra microbiológicas, aunque es preferible que éstas sean desechables.

Es recomendable que el material a introducir en la Cabina esté libre de partículas, por ello
debería limpiarse cuidadosamente antes de su introducción en la misma.

No es aconsejable introducir en la zona de trabajo materiales que emitan fácilmente partículas

tales como: papel, madera, cartón, lápices, goma de borrar, etc.

Es preferible utilizar tubos y/o frascos con tapones de rosca en lugar de tapones de algodón, ya
que estos desprenden fibras.

No se deben utilizar las Cabinas como almacén de materiales y equipos de laboratorio.

Todos los productos de desecho (asas de siembra, placas de cultivo, medios de cultivo,
muestras, etc.), se evacuarán de la Cabina en recipientes impermeables y aptos para ser
esterilizados.

Procedimiento de trabajo

Es aconsejable realizar movimientos lentos de brazos y manos en el interior de las Cabinas, ya

que de lo contrario se crean corrientes de aire que rompen la laminaridad del flujo y pueden
provocar la entrada o salida de contaminantes transportados por el aire.

Las manipulaciones a realizar en las Cabinas no deben efectuarse cerca de la superficie de

trabajo, ya que el aire al chocar con la superficie se desplaza horizontalmente pudiendo recoger
la contaminación depositada sobre la misma.

Se recomienda trabajar entre 5 y 10 cm sobre la mesa de la Cabina, y por detrás de la "zona de

partición de humos" (zona en la que el aire estéril descendente se divide para seguir su
recorrido a través de las rejillas anterior y posterior de las Cabinas. Clase II). Esa zona es
variable y debe conocerse para cada Cabina. En general, la zona de menor seguridad para el
trabajador y el producto son los 8 cm más próximos a la abertura frontal.

A fin de preservar al máximo los filtros HEPA deben evitarse, en cualquier tipo de operación,
los golpes, la proyección de líquidos o salpicaduras, perforaciones, etc., contra la rejilla de
protección del mismo.

UT 2 14 de 16
Ensayos Microbiológicos IES MATEO ALEMÁN

Es recomendable la puesta en funcionamiento de la Cabina unos 15 - 30 min. antes del inicio

del trabajo. Asimismo debe mantenerse en funcionamiento durante un tiempo prudencial
después de finalizado el trabajo (algunos autores recomiendan el funcionamiento continuado de
las Cabinas para conseguir su óptimo rendimiento).

Se recomienda esperar de 2 a 3 minutos antes de empezar a trabajar, cuando se haya

introducido algún material en el interior de Cabinas dotadas del lujo laminar. Ello dará lugar a
que éste se reconstituya y purifique la posible contaminación transportada del exterior a la zona
de trabajo estéril.

En la zona de trabajo sólo debe introducirse el material verdaderamente necesario y de uso

inmediato. Preferiblemente se colocará de modo que se eviten movimientos innecesarios en el
interior de la Cabina.

No deben colocarse objetos entre el filtro HEPA y el área en que se vaya a trabajar puesto que
se producirán sombras y turbulencias (la laminaridad del flujo de aire no vuelve a recuperarse
hasta una distancia de 2,5 veces el diámetro del objeto interpuesto).

Ubicación de las cabinas

Es recomendable instalar las Cabinas de Seguridad Biológica de modo que estén alejadas de
puertas, ventanas y salidas de la ventilación general forzada o mejor dicho de las corrientes de
aire que éstas puedan generar.

Es asimismo aconsejable mantener una baja actividad en el local o habitación en la que se

encuentre instalada la Cabina, ya que corrientes de aire provocadas por el paso o movimiento
de personas pueden alterar el equilibrio de flujos de aire. La figura 4 muestra un esquema de
aquellas zonas más (++) adecuadas y menos (--) adecuadas para la ubicación de las Cabinas
respecto a las corrientes de aire que se pueden generar en un local.

Fig. 4: Esquema de las posibles ubicaciones de las cabinas de seguridad biológica

UT 2 15 de 16
Ensayos Microbiológicos IES MATEO ALEMÁN

Mantenimiento de las cabinas

Es necesario disponer, para cada Cabina, de una ficha de mantenimiento y control situada en
lugar visible, en la que se reflejarán las modificaciones realizadas y su periodicidad y las
operaciones de mantenimiento. En la ficha deberá constar:

● Modelo y referencia.
● Fecha de control.
● Horas de funcionamiento.
● Presión de trabajo en mm de c.d.a.
● Velocidad de aire en m/seg.
● Test D.O.P.
● Fecha de sustitución de filtro HEPA.
● Fecha de sustitución del prefiltro.
● Fecha de la próxima revisión aconsejada.

No es aconsejable trasladar las Cabinas una vez instaladas y verificadas, ya que ello podría
provocar fisuras en la continuidad del sello estanco del filtro y provocar fugas de aire no
tratado. En caso de traslado, es necesario efectuar un nuevo Test D.O.P. de control de fugas.

UT 2 16 de 16